HPLC法測定腎安膠囊中迷迭香酸的含量

云南省食品藥品監督檢驗研究院，云南 昆明 650011

腎安膠囊由石椒草、腎茶、黃柏、白茅根、茯苓、白術、金銀花、黃芪、澤瀉、淡竹葉、燈心草、甘草組成，具有清熱解毒，利尿通淋的功效。用于濕熱蘊結所致淋癥，證見小便不利，淋瀝澀痛，下尿路感染見上述癥候者。腎茶為腎安膠囊中的主要成分，是一種對腎臟與泌尿系統疾病具有良好功效的熱帶稀有植物，全草有利尿、抗菌、溶石、排石作用。腎茶中的迷迭香酸為其主要活性成份之一[1]，不僅具有抗炎、抗菌、抗病毒、調節免疫等生物活性[2]，而且能防止草酸草結石的形成和改善腎功能[3]，還是腎茶中治療慢性腎衰竭的主要成分之一[4]。在本品中起到清熱解毒和改善腎臟功能的重要作用，故應該對其進行質量控制。本制劑現行標準[5]含量測定只控制了黃柏一味藥，每粒含黃柏以鹽酸小檗堿計，不得少于0.16 mg。為了能更加有效控制腎安膠囊的質量，因此采用HPLC法對本制劑中腎茶的主要成分迷迭香酸進行了含量測定方法學研究，為評價腎安膠囊的質量提供了更為準確可靠的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AD液相色譜儀(SPD-20A紫外檢測器，四元泵，自動進樣器，日本島津公司)；萬分之一Sartorius BS224S型電子分析天平(Sartorius公司，美國)；十萬分之一DENVER TB-215D型電子分析天平(DENVER公司，美國)；AS7240A超聲清洗儀(天津奧特賽斯儀器有限公司)。

1.2 材料 迷迭香酸對照品(批號：111871-201102，中國食品藥品檢定研究院)。腎安膠囊(批號：120605、120709、130305、130514、130615)、陰性對照所用的藥材均由云南保元堂藥業提供。實驗用水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 取迷迭香酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取本品內容物混勻，取3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液50 mL，稱定重量；超聲處理10 min冷，再稱定重量，用0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.1.2 陰性樣品溶液 按處方比例制備缺腎茶的陰性空白樣品，并按“2.1.2”項下制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：330 nm；進樣量：5 μL。在上述色譜條件下，取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液進樣測定，結果其他藥材并不干擾待測成分的測定，結果見圖1。

2.3 線性關系的考察 分別精密吸取迷迭香酸對照品溶液1、2、4、6、8、10、20 μL，按上述色譜條件，測定迷迭香酸峰面積。分別以迷迭香酸進樣量為橫坐標(X)，以峰面積積分值A為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得線性方程為：Y=2e+7X-1713.1(r=0.9998)，表明迷迭香酸在11.7914～235.8274 μg范圍內呈現良好的線性。

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液5 μL，連續進樣5次，記錄峰面積。RSD為0.6%，結果表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同一批(批號為130305)腎安膠囊樣品，按“2.1.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行含量測定，結果迷迭香酸的含量為0.4528 mg/g；RSD分別為0.5%，說明測量方法的重復性良好。

2.6 穩定性試驗 按“2.1.2”項下方法制備一份供試溶液，精密吸取5 μL，分別于0、4、8、12和16 h各測定1次，結果5次測定所得的峰面積值的RSD為0.2%。結果表明，室溫條件下，供試品溶液中的迷迭香酸在16 h內穩定。

2.7 加樣回收試驗 分別精密稱取9份已知含量的樣品(批號為130305)每份約1.5 g，精密稱定。 精密加入每1 mL迷迭香酸對照品68.08 μg的對照品溶液分別為三份12 mL，三份10 mL三份8 mL，按“2.1.2”項下的方法制備供試溶液，進樣分析，計算迷迭香酸平均回收率(n=9)為99.54%，RSD為0.3%。表明試驗方法準確度好。結果見表1。

表1 腎安膠囊迷迭香酸溶劑加樣回收試驗結果 (n=9)

2.8 樣品中迷迭香酸含量測定 分別稱取不同批號的腎安膠囊，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，以外標法計算含量，結果見表2。

表2 腎安膠囊迷迭香酸溶劑含量測定結果 (mg/粒，n=2)

3 討論

實驗通過對提取方法，提取溶劑，提取時間，檢測波長分別進行了考察及參照相關文獻資料中的有迷迭香酸的含量測定方法[6-9]后進行改進，最后確定了以0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液為流動相，檢測波長為330 nm，流速1 mL·min-1，樣品超聲處理(功率300 W，頻率25 kHz)10 min對本品迷迭香酸的含量進行測定，試驗結果表明，缺腎茶的陰性樣品溶液無干擾，且樣品分離效果好。經方法學考察，本含量測定方法結果較好，方法可行。