高效液相色譜法測定鹽酸可樂定片的有關物質

尚如霞 何寅

（鎮江市食品藥品監督檢驗中心 江蘇 鎮江 212000）

鹽酸可樂定片在臨床上主要用于治療高血壓（但不作為第一線用藥）和高血壓急癥，在臨床上還可以治療偏頭痛、絕經期潮熱、痛經，以及戒絕阿片癮毒癥狀。心血管疾病作為危害人類健康的主要殺手之一，嚴重地損害人類的健康。該藥作為心血管類用藥，已收錄于江蘇省基本藥物目錄中，臨床應用范圍較廣。因此，其質量情況應受到重點關注。

鹽酸可樂定片已收載在《中國藥典》（2015年版）二部[1]中，美國藥典亦有收載。但國內標準和國外標準均未收載其有關物質檢查項。有關物質是藥品中除主成分以外的雜質，它可能是原料藥合成過程中帶入的原料、中間體、試劑、分解物、副產物、聚合體、異構體，以及不同晶體、旋光異構的物質，也可能是制劑生產過程或在貯藏、運輸、使用過程中產生的降解產物等。為了客觀地評價鹽酸可樂定片有關物質，控制其雜質含量，因此建立了鹽酸可樂定片的有關物質測定方法，并考察了環境對藥品的影響[2]。

1.實驗材料

儀器：SPD-20A島津液相色譜儀、電熱恒溫培養箱、AG245天平

色譜柱：C8柱，依利特 150mm×4.6mm

液相色譜條件：以0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸（500：500：1）為流動相（調節PH值3.0）；柱溫30℃；檢測波長為220nm。

鹽酸可樂定片：江蘇A藥業有限公司24批、常州B藥業有限公司6批，共計兩個廠家30批樣品。

2.實驗方法

2.1 流動相選擇

首先，進行流動相的選擇。由于《中國藥典》和《美國藥典》收載的含量測定方法，其流動相均相同，因此考慮就選擇與含量測定項下相同的色譜條件，以0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸（500：500：1）為流動相（調節pH值3.0），檢測波長為220nm。同時，在相同的色譜條件下，對空白溶劑和空白片分別進樣，在同一波長處均無吸收干擾（附圖1、2）。

2.2 專屬性實驗

取本品細粉適量（約含鹽酸可樂定150g），分別經熱破壞、酸破壞、堿破壞、UV365nm(6h)破壞處理，中和后，分別用流動相溶解稀釋成每1ml中約含3g的供試液，取50l進行HPLC分離分析。結果表明：在上述選定的色譜系統之下，鹽酸可樂定與分、降解產物的分離良好，分、降解產物不干擾鹽酸可樂定及其有關物質的測定。酸破壞后產生了較多的雜質，UV365nm(6h)破壞處理后，供試品中有關物質多為光降解產物。

（1）光照破壞：取上述供試液在紫外光燈（UV365nm）下照射6小時后，進樣。

（2）酸破壞實驗：取上述供試液1ml，加1ml稀鹽酸，至10ml容量瓶，放置8小時后，加1mol/L氫氧化鈉試液中和，加流動相至刻度，進樣。

（3）堿破壞實驗：取上述供試液1ml，加1ml1mol/L氫氧化鈉試液，至10ml容量瓶，放置8小時后，加稀鹽酸中和，加流動相至刻度，進樣。

2.3 溫濕度存儲條件模擬實驗

選用同一廠家、同一批號的樣品，一份在35℃電熱恒溫培養箱放置48小時，另一份在80℃水浴放置8h，同法測定，在4.1分鐘處出現新雜質峰。表明溫濕度存儲條件對藥品雜質有一定影響。（見附圖3、4）

2.4 方法耐用性

選取不同的色譜柱Kromasil柱及伊利特C8柱，其他條件不變，取專屬性試驗項下破壞溶液進樣測定。鹽酸可樂定與分降解產物的分離良好。方法耐用性好。

2.5 線性范圍

稱取鹽酸可樂定對照品10.50mg，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成每1ml中含鹽酸可樂定濃度分別為0.1、1、10、50和100g的供試品溶液，分別精密量取50l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以鹽酸可樂定的峰面積(A)對其濃度(C)進行線性回歸，回歸方程為y=158128x+76850, R2=0.9998 結果表明：在0.1～100g/ml范圍內，鹽酸可樂定色譜峰面積與其濃度成良好線性關系。（見圖5）

附圖1 江蘇A藥業公司樣品有關物質色譜圖

附圖2 常州B藥業公司樣品有關物質色譜圖

圖5 有關物質標準曲線圖

2.6 定量限

將上述0.1g/ml的對照品溶液再稀釋后進樣，根據峰高以信噪比S/N=10確定鹽酸可樂定片的定量限為30ng。(見附圖6)

2.7 檢測限

同定量限測定方法，根據峰高以信噪比S/N=3確定鹽酸可樂定片的檢測限為10 ng。（見附圖7）

3.實驗結果與討論

3.1 實驗結果

附圖3 35℃～48h熱破壞色譜圖

附圖4 80℃～8h熱破壞色譜圖

取本品適量，精密稱定，加流動相稀釋制成每1ml中約含30g的鹽酸可樂定溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。按照上述色譜條件和配制方法進行有關物質檢查，供試液濃度為30g,對照溶液的濃度為0.3g。取對照溶液50l注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高約為記錄滿量程的10%，再精密量取對照溶液和供試品溶液各50l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的5倍。測定兩個廠家共30批不同批號樣品，有關物質檢查結果如下：（見表1）從表1中可以得知，30批樣品中總雜質為0.6%～3.1%，其中單個最大雜質為保留時間2.54處的雜質峰（限度為0.5%～2.9%）。30批鹽酸可樂定片均檢出有關物質，其檢出率為100%，由此可見建立有關物質的檢查方法重要且很有必要。

表1 鹽酸可樂定片有關統計表

3.2 結果與討論

（1）本次測定的鹽酸可樂定片兩個廠家共30批，均檢出了有關物質，其中28批有關物質的含量大于1%，有的批次甚至達到2%～3%,有關物質的含量比較高的，因此建立有關物質的檢查方法還是很有必要性的。通過控制有關物質的含量，可以控制鹽酸可樂定片的雜質總量。

附圖6 定量限（S/N=10）

附圖7 檢測限（S/N=3）

（2）通過上述數據，分析不同廠家的生產工藝可能對雜質有一定影響，江蘇A藥業公司生產過程中加入的輔料比較的少，因此雜質含量比較低；而常州B制藥廠生產中加入的輔料比較多，所以平均雜質含量要高。從雜質的出峰時間上，有關物質主要是保留時間2.54分鐘左右的雜質峰，有10批次在其它時間內也有雜質峰，可通過進一步分析，確認其雜質成分。