九蒸九曬黃精5-HMF含量的變化

韓笑，匡宇，趙永艷，黨凱茹，彭騰，鄒和平

黃精為百合科植物滇黃精、黃精或多花黃精的干燥根莖。具有補氣、養 陰、健 脾、潤 肺、益腎的功效[1～2]。生黃精有麻舌感，且刺激咽喉。在唐代《食療本草》 就有記載“蒸之，若生則刺人咽喉，曝使干，不爾朽壞”[3]，生黃精炮制后，可以去除麻舌感，并增強了其補脾潤肺益腎的功能。黃精的炮制方法以蒸煮法為主[4]，歷史沿襲至清代黃精以“九蒸九曝”炮制為主流，《本草從新》中記載“黃精去須，九蒸九曬用，每蒸一次，必半日方透”[5]。

5-羥甲基糠醛（5-HMF）在含糖的中藥炮制過程中都有可能生成，與炮制時間和溫度密切相關，可用于指示炮制程度，現已成為中藥炮制原理研究的活性成分。目前關于黃精九蒸九曬炮制過程中5-HMF含量變化尚未見報道。

1 材料

1.1 儀器

島津 LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；BUG25-13型超聲波清洗器（美國BRANSON公司）；BP211D 型電子天平、BP121S 型電子天平（德國 Sartorius 公司）；FW135型中藥粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；優普系列超純水器UPTII-10T（成都超純科技有限公司）；依利特ODS-B色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2 試藥與試劑

乙腈為色譜純（美國Fisher公司）；甲醇、磷酸為分析純（成都市科龍化工試劑廠）；水為超純水。對照品5-HMF（批號 H-005-150307）成都瑞芬思生物科技有限公司，HPLC測定質量分數均＞98%。黃精為多花黃精。

2 方法與結果

2.1 黃精的炮制

將新鮮的黃精去除雜質及須根，洗凈晾干，切厚片，采用實驗室前期實驗研究所得的炮制方法，依法炮制得一蒸一曬、二蒸二曬、三蒸三曬……九蒸九曬黃精。

2.2 5-HMF的含量測定

2.2.1 對照品溶液的配制 取5-HMF對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解制備成的對照品20.96μg/ml溶液。避光低溫保存。

2.2.2 供試品溶液的制備 取黃精不同炮制品約0.2 g，精密稱定，置150 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，超聲提取20 min，濾過。濾渣加甲醇10 mL，超聲提取10 min，濾過，濾液定容至25 mL量瓶中，即得。

2.2.3 色譜條件 依利特ODS-B色譜柱(250 mm×4.6mm，5μm)；流動相為乙腈-1%磷酸水(5∶95)；檢測波長∶284 nm;柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min;進樣量為10μl。HPLC圖見圖1。

2.2.4 線性關系考察 將對照品溶液采用自動進樣法分別進樣2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12 μl ，測得色譜峰面積，以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程為:Y=187675X-9603.1（R2=0.9999）,結果表明，5-HMF在0.04-0.25 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 5-HMF對照品(A)、黃精樣品(B)HPLC圖

2.2.5 精密度、重復性、穩定性和加樣回收率實驗 精密吸取對照品溶液20 μL，按照“2.2.1”項條件連續進樣6次，測得5-羥甲基糠醛峰面積的RSD分別為1.12%，表明儀器精密度良好；精密稱取六份三蒸三曬黃精，按照“2.2.3”項中制備供試品的方法平行操作，按照“2.2.1”項條件進樣10 μL，測得5-羥甲基糠醛含量的RSD分別為2.12%，表明該方法重復性良好；精密吸取三蒸三曬黃精供試品溶液，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，2 h，按照“2.2.1”項條件進樣分析，測得5-羥甲基糠醛峰面積RSD分別為1.11%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好；加樣回收率實驗的平均加樣回收率分別為92.62%，RSD%分別為1.90%，表明方法準確度好。

2.2.6 九蒸九曬黃精中5-HMF含量的測定結果

表1 九蒸九曬黃精中5-HMF含量的測定結果

3討論

3.1 5-HMF的提取方法

經查閱文獻，5-HMF的提取方法主要有水浴回流提取和超聲提取兩種方法。考慮到回流提取的加熱過程中，可能會使黃精中的多糖自身可發生水解、脫水反應生成5-HMF，導致5-HMF含量偏高，實驗數據不準確。本實驗對黃精中的5-HMF的提取，采用超聲提取的方法，超聲提取是在常溫下進行，避免了黃精中的多糖發生水解、脫水反應。

3.2 實驗結果分析

未經炮制的黃精，以及一蒸一曬的黃精中未檢測到5-HMF的含量。隨著對黃精蒸曬次數的增加，5-HMF含量會逐漸升高。目前，5-羥甲基糠醛對人類健康是否具有潛在危害存在爭議，一些研究認為，5-HMF對眼黏膜、上呼吸道黏膜等產生刺激作用，對人體橫紋肌和內臟有損傷；但近年來的5-HMF的生物活性逐漸被發掘，具有抗心肌缺血、抗氧化、降血糖、改變血液流變性和神經保護性。2005年，歐洲食品安全局評估的人群5-HMF日攝入量為1.6 mg[10]。筆者認為事物的發展都具有兩面性，做好質量的控制，是保證安全有效的關鍵之處。