高血壓與維生素D受體基因遺傳變異的相關(guān)性分析

張 靖

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬江蘇盛澤醫(yī)院, 江蘇 蘇州, 215228)

研究[1]發(fā)現(xiàn)，維生素D缺乏與非骨骼慢性疾病具有相關(guān)性。作為調(diào)節(jié)血壓的關(guān)鍵因子，活性維生素D可以直接抑制細(xì)胞的啟動(dòng)子活性腎素基因，從而下調(diào)腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能[2]。缺乏維生素D的人群中，血清腎素和血管緊張素II濃度顯著升高，腎血管灌注對(duì)血管緊張素II的反應(yīng)減弱[3]。研究[4-6]表明，血清人25-羥基維生素D3[25(OH)D3]濃度與人體血壓水平或高血壓狀態(tài)存在顯著關(guān)聯(lián)。維生素D與維生素D受體(VDR)結(jié)合而發(fā)揮作用，Wang等[7]在美國人群中發(fā)現(xiàn)VDR基因BsmI和FokI位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。本研究探討高血壓與維生素D受體基因遺傳變異的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2018年1月本院門診收治且診斷為高血壓患者289例為高血壓組，所有病例均符合高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其他非高血壓患者。健康對(duì)照組為本院同時(shí)期參加體檢的健康人群650例。本研究獲得本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵守倫理學(xué)的各項(xiàng)規(guī)定。

1.2 調(diào)查方法

參照相關(guān)文獻(xiàn)自行設(shè)計(jì)的高血壓調(diào)查表進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)詢問調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容包括基本情況(年齡、性別、吸煙、飲酒等)，既往疾病史(慢性疾病史、傳染病史、其他疾病史等)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

抽取研究對(duì)象外周靜脈血5 mL，分離血清、白細(xì)胞和紅細(xì)胞，分裝于1.5 mL凍存管。采用ELISA法檢測(cè)血清25(OH)D3水平，所有實(shí)驗(yàn)的具體操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。從美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫中搜索VDR基因的多態(tài)性位點(diǎn)，篩選在中國人群具有較高頻率[最小等位基因頻率(MAF)≥5%], 再結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[5-7], 最終選擇FokI和ApaI兩個(gè)位點(diǎn)。采用ABI公司設(shè)計(jì)的TaqMan-MGB熒光探針實(shí)施定量PCR法檢測(cè)FokI和ApaI位點(diǎn)基因型。反應(yīng)在ABI 7900 PCR儀中進(jìn)行，采用SDS2.3軟件讀取檢測(cè)數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用EpiData 3.10、SPSS 17.0和PHASE 2.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用卡方檢驗(yàn)分析高血壓組和健康對(duì)照組的性別、吸煙、飲酒分布情況，年齡分布差異采用t檢驗(yàn)，血清25(OH)D3水平分布不符合正態(tài)分布，故采用秩和檢驗(yàn)方法。采用多因素Logistic回歸分析VDR基因位點(diǎn)在人群中分布。

2 結(jié) 果

高血壓組和健康對(duì)照組在性別、年齡分布上無顯著差異(P=0.71、0.27) ,2組血清25(OH)D3水平有顯著差異(P<0.01)。見表1。多因素Logistic回歸分析顯示，在調(diào)整年齡、性別等因素后，與FF基因型相比, FokI位點(diǎn)的Ff可以顯著增加個(gè)體高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(調(diào)整OR=1.63, 95% CI=1.17～2.31); 本研究未發(fā)現(xiàn)ApaI位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在顯著關(guān)聯(lián)。見表2。FokI和ApaI兩個(gè)位點(diǎn)組成的單倍型共有4種形式，即FA、Fa、Af、af。與fa單倍型相比, Fa單倍型在高血壓組的分布顯著低于健康對(duì)照組(調(diào)整OR=0.65, 95%CI=0.51～0.84), 見表3。采用協(xié)方差分析法，分析機(jī)體血清25(OH)D3水平與FokI位點(diǎn)基因型分布的關(guān)系。結(jié)果顯示FokI位點(diǎn)3種基因型中血清25(OH)D3水平分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.47,P=0.04)。見表4。

表1 2組受試者一般資料比較

25(OH)D3采用中位數(shù)(最小值，最大值)表示;與健康對(duì)照組比較，**P<0.01。

表2 VDR基因多態(tài)性與高血壓遺傳易感性的關(guān)系

調(diào)整因素分別為年齡、性別、吸煙和飲酒。

表3 VDR基因SNP位點(diǎn)單倍型與高血壓發(fā)病的關(guān)聯(lián)

調(diào)整因素分別為年齡、性別、吸煙和飲酒。

表4 2組人群中FokI不同基因型血清25(OH)D3水平分布差異

3 討 論

目前，關(guān)于高血壓的發(fā)病機(jī)制還處于研究階段，但遺傳因素已被證實(shí)在高血壓的發(fā)病過程中起到重要作用。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因已被證實(shí)與高血壓的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)[8]。目前，僅有少數(shù)國外研究[7]發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性可能與高血壓發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。本研究探討漢族人群中VDR的2個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)(FokI和ApaI)與高血壓發(fā)病的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)FokI位點(diǎn)多態(tài)性可能與高血壓的發(fā)病發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。

維生素D不僅可調(diào)節(jié)血清鈣水平，還參與機(jī)體抗氧化水平、減輕抗氧化水平、清除自由基以及保護(hù)神經(jīng)元等反應(yīng)[9-11]。因此，機(jī)體血清維生素D水平可能參與了高血壓的發(fā)生、發(fā)展等過程。血清維生素D濃度與腎素-血管緊張素系統(tǒng)功能也有關(guān)，這提示維生素D可能對(duì)人體血壓有一定的應(yīng)用價(jià)值。多項(xiàng)研究[12-15]發(fā)現(xiàn)，高血壓患者血清維生素D水平普遍低于健康人群。本研究亦發(fā)現(xiàn)高血壓患者血清維生素D水平低于健康對(duì)照者，表明機(jī)體血清維生素D水平與高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)，且高血壓患者普遍存在缺乏維生素D的現(xiàn)象，這對(duì)高血壓臨床診斷具有一定的指導(dǎo)意義。

VDR作為一種配體激活轉(zhuǎn)錄因子，在機(jī)體多種組織中廣泛表達(dá)，主要與維生素D形成復(fù)合物，后者與存在于靶基因序列上的反應(yīng)元件(VDRE)結(jié)合形成反應(yīng)物，從而改變靶基因mRNA的水平[16-18]。VDR可能通過調(diào)節(jié)維生素D生物學(xué)功能而間接影響高血壓的發(fā)病，而VDR的表達(dá)受控于VDR基因多態(tài)性。VDR基因可表達(dá)在多種細(xì)胞中，其基因多態(tài)性直接影響維生素D與其受體結(jié)合的親和性[16], 從而可能影響著高血壓的發(fā)病、進(jìn)展以及預(yù)后。Wang等[19]檢測(cè)高血壓患者VDR基因其他位點(diǎn)基因型的分布情況，發(fā)現(xiàn)VDR基因rs2544037位點(diǎn)與高血壓的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。本研究中，作者發(fā)現(xiàn)FokI位點(diǎn)的Ff可以顯著增加個(gè)體高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，其變異基因型Ff、ff亦可顯著增加高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，但未發(fā)現(xiàn)ApaI位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。在單倍型研究中，與fa單倍型相比, Fa單倍型在高血壓患者中的分布顯著低于健康對(duì)照組，可見FokI位點(diǎn)多態(tài)性在VDR基因變異中發(fā)揮著重要功能，且這種生物學(xué)功能在某種情況下發(fā)揮主導(dǎo)作用。