P63、P16和ki67在宮頸癌及上皮內病變中的表達及意義

施絨賢 陳 峰

（上海交通大學醫學院附屬新華醫院崇明分院病理科，上海 202150）

宮頸癌是發生于子宮頸的惡性腫瘤[1]，是婦科最常見的惡性腫瘤，其發病率有年輕化的趨勢，世界衛生組織（WHO）把其致病原因歸因于高危型HPV人類乳頭狀病毒感染[2]，根據其組織學來源大部分為鱗狀細胞癌，少部分為宮頸腺癌（15%～20%），另有極少數的腺鱗癌（3%～5%），其發展過程為上皮內病變低級別-高級別-鱗狀細胞癌，對其精確診斷尤其是對上皮內病變低級別的診斷，在有效的防止由上皮內瘤變向宮頸癌的發展具有重要的實際意義，本研究旨在探討其在宮頸癌癌前病變至癌變中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年12月本院婦科門診及病房活檢標本、leep刀標本及宮頸（含全子宮或附件）切除標本共161例，其中22例鱗狀細胞癌，3例宮頸腺癌，上皮內病變低級別104例，上皮內病變高級別32例，另選取超過40例確定無上述病變（包括正常宮頸，急慢性宮頸炎，宮頸萎縮等）的宮頸活檢組織作為對照實驗，年齡22～72歲，平均年齡42歲。

1.2 方法

所有組織用10%中性福爾馬林固定，采用LEICA ASP300S標準化脫水機脫水，LEICA組織包埋機制成蠟塊，使用LEICA 2035石蠟切片機切成4微米厚度，涂膠片使用江蘇世泰公司的商品化載玻片，P63、P16和ki67抗體采用即用型一抗，由上海長島生物制品公司提供，免疫組織化學實驗方法采用全自動染色方法，設備為LEICA BOND-MAX全自動免疫組織化學機，DAB顯色劑等為LEICA BOND-MAX套裝試劑。

1.3 結果判斷

以HE染色病變部位及性質對照，病變部位棕黃色染色為判斷陽性依據，其中P63及KI67為細胞核染色，P16為胞漿及胞核表達，染色深度及百分比綜合判斷確定陰性（-），弱陽性（+），陽性（++），強陽性（+++），ki67及 P63的判斷標準為僅位于基底/副基底層并且細胞陽性數小于5%為（-），陽性細胞數5%～25%為（+），陽性細胞數25%～50%為（++），陽性細胞數大于50%為（+++）

1.4 統計學分析

采用SPSS統計學軟件進行數據分析，計數資料用（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

P63在各級病變中呈明顯的細胞核陽性表達，在顯微鏡下主要位于宮頸外口鱗狀上皮與柱狀上皮的移行部位的基底部，隨著級別的增高而表達程度增高，從分布情況而言在對照組宮頸上皮的基底細胞中呈散在性的表達（5%），在上皮內病變低級別中基底層細胞表達明顯增多，且棘細胞層也有部分表達，在上皮內瘤變高級別中幾何全層均有表達，在浸潤性鱗狀細胞癌癌中的表達100%，在腺癌中不表達。

表1 P16、ki67和P63在宮頸癌及上皮內病變中的表達

Ki67在各級病變中的表達，正常宮頸鱗狀上皮中表達小于8%，低級別鱗狀上皮內病變低表達78%，高表達約22%，高級別鱗狀上皮內病變低表達19%，高表達約81%，鱗狀上皮癌100%，除了正常鱗狀上皮外，其他上皮內病變及鱗狀細胞癌及宮頸腺癌ki67均表達良好（P＜0.05）。

P16在正常組織中陰性表達（以不表達或散在性表達作為標準），在鱗狀細胞癌及高級別的病變中表現為彌漫陽性，在低級別的病變中約40%表現為彌漫性陽性，在宮頸腺癌中也陽性表達，見表1。

3 討論與結論

宮頸癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，50年前，宮頸癌是美國婦女癌癥患者最主要的因素，但目前死亡率已經下降了2/3，死亡原因的第8位[3]，與死亡率下降明顯不同的是發現早期癌及癌前期病變的頻率非常之高，而目前中國的發病率上升很快，從流行病學資料來看，目前認為宮頸的浸潤性鱗狀細胞癌及腺癌，其致病因素均為高危型人類乳頭狀病毒（HPV），2014年WHO采用了美國病理家協會（CAP）及美國陰道鏡和宮頸病理學會（ASCCP）的LAST方案，該方案方案提出了對于包括宮頸在內的下生殖道HPV感染相關鱗狀上皮病變進行命名的修訂，推薦采用鱗狀上皮內病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）來命名，并且將其分為兩級，即低級別鱗狀上 皮 內 病 變（Low grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）和高級別鱗狀上皮內病變（High grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）。在病理診斷中低級別與高級別的鑒別診斷尤為重要。

P16為抑癌基因，一旦失活會導致惡性增殖，在判斷良性宮頸病變，SIL中有十分重要的臨床意義[4]，在大量的文獻報道中P16與宮頸鱗狀上皮癌的關系密切[5]，在本實驗中發現在良性病變中呈局灶性或單個細胞著色，而在SIL以上病變中呈彌漫著色，本實驗結果P16著色不能區分LSIL（40%表達）及HSIL（100%表達）以及宮頸鱗狀上皮癌（100%），需要結合HE切片，其臨床意義是區分SIL以上病變及以下病變，有文獻報道P16在宮頸SIL及癌中表達證實可能與HPV感染有關[6]。

P63蛋白是P53蛋白的家族成員，其在增殖的上皮細胞、宮頸及尿道上皮中表達，有關文獻報道P63表達和鱗狀細胞癌有相關性，為鱗狀上皮癌的診斷標志之一[7]，在本研究中在高級別上皮內病變及鱗狀上皮癌中陽性率較高，在宮頸腺癌中無表達 。

Ki67是一種與細胞增殖特異相關的核抗原，主要用于判斷增殖活性在所有細胞周期活動期的增殖細胞中表達，但在靜止期細胞中不表達，ki67的表達與多種腫瘤的發展和浸潤有關[8]，在宮頸的病變包括SIL及宮頸表達良好，特別是高度增生表明其異常增殖狀態，隨著病變的進展，特別在宮頸癌陽性細胞的層次逐步開展至全層，表達明顯好于SIL。

綜上所述p63、p16和ki67在上皮內病變及宮頸癌中的表達，特別由上皮內瘤變向宮頸癌的發展具有重要的實際意義，KI67由于其超強的敏感性，P16在SIL中表達特點對于臨床也有一定的指導意義，p63、p16和ki67的檢測無論在診斷及判斷預后中有較大的臨床價值。