氨基末端激酶參與胃癌順鉑耐藥機(jī)制的研究

張 雯

（蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇蘇州 215200）

本研究旨在探討氨基末端激酶參與胃癌順鉑化療耐藥機(jī)制的具體情況，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2018年1月本院收治的122 例胃鏡患者作為研究對(duì)象，所有患者均未接受放化療治療，均有完整資料。其中，男性70例，女性52例，年齡34～81歲，平均年齡（52.3±3.4）歲。同期選取35例手術(shù)切除的正常胃組織標(biāo)本作為對(duì)照組。標(biāo)本均用10%的甲醛液固定，應(yīng)用石蠟包埋。

1.2 方法

（1）采用四氮唑炎還原法（MTT）檢測(cè)藥物的敏感性。將 SGC7901、SGC7901-DDP、SGC7901加 SP600125、SGC7901-DDP加SP600125所屬細(xì)胞分別制成單細(xì)胞懸液，將其接種到96孔培養(yǎng)板上，設(shè)置DDP、ADM兩種藥物5 個(gè)梯度濃度，分別為：0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μg/L，各個(gè)濃度均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，應(yīng)用MTT法來(lái)計(jì)算4種類型的DDP、ADM半數(shù)抑制濃度。

（2） 制作組織芯片。選用所需病例存檔蠟塊，用病理學(xué)專家依據(jù)蘇木精—伊紅染色切片觀察切片形態(tài)學(xué)情況，確定出最具有代表性的病變部位，同時(shí)還需要避開(kāi)出血壞死部位及纖維化區(qū)域，做好標(biāo)記，之后借助組織微陣列儀來(lái)制作組織芯片蠟塊[2]。借助組織微陣列儀在蠟塊中打孔，在選用的癌組織、正常胃組織蠟塊標(biāo)記部位進(jìn)行穿刺，將所有的標(biāo)本都植于空白蠟塊中，行連續(xù)切片，貼敷在1%額多聚賴氨酸上。

（3）免疫組化檢驗(yàn)及判定結(jié)果。應(yīng)用免疫組化染色方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果用陽(yáng)性細(xì)胞占據(jù)百分比來(lái)表示。具體是在低倍的光鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)視野，各個(gè)視野中計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，獲得細(xì)胞均值，其中P-糖蛋白（P-gp）以胞質(zhì)/胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色；p-氨基末端激酶（p-JNK）以胞質(zhì)/胞核出現(xiàn)棕黃色的顆粒為陽(yáng)性染色。陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量若≥10%為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞＜10%為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞藥物敏感性變化情況比較

MTT耐藥情況顯示，應(yīng)用SP600125后耐藥株對(duì)DDP、ADM敏感性增加，顯示p-JNK抑制導(dǎo)致化療藥物對(duì)敏感株及耐藥株生長(zhǎng)抑制均有增強(qiáng)作用，見(jiàn)表1。

表1 MTT檢測(cè)細(xì)胞藥物敏感性情況比較（±s）

表1 MTT檢測(cè)細(xì)胞藥物敏感性情況比較（±s）

類別 DDP ADM SGC7901 0.33±0.03 0.31±0.02 SGC7901加SP600125 0.12±0.02 0.21±0.07 t 41.36 7.89 P 0.00 0.01 SGC7901-DDP 8.82±0.12 1.52±0.13 SGC7901-DDP加SP600125 1.62±0.18 0.62±0.21 t 7.86 23.36 P 0.01 0.00

2.2 P-gp與p-JNK蛋白表達(dá)在胃癌與正常胃組織中的表達(dá)與相關(guān)性

P-gp在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為53.28%（65/122），正常的胃組織中陽(yáng)性表達(dá)率為22.86%（8/35），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.118，P＜0.05）。p-JNK在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為45.08%（55/122），正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為11.43%（4/35），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.131，P ＜ 0.05）。

P-gp和p-JNK蛋白共同陽(yáng)性患者53例，P-gp和p-JNK蛋白共同陰性患者48例，P-gp陽(yáng)性p-JNK蛋白陰性患者37例，P-gp陰性p-JNK陽(yáng)性患者29例，相關(guān)系數(shù)r=0.221（P=0.003）。

3 討論與結(jié)論

氨基末端激酶屬細(xì)胞中重要信號(hào)傳導(dǎo)成員，信號(hào)通路可以被應(yīng)激因素與細(xì)胞因子激活，雙特異性激酶JNK為JNK上游激活酶，可以活化JNK轉(zhuǎn)錄因子，使得c-fos結(jié)合至靶基因啟動(dòng)子區(qū)，調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄[3-6]。當(dāng)前，對(duì)于JNK在耐藥機(jī)制中的作用尚且存在爭(zhēng)議，耐藥白血病細(xì)胞菌株中JNK持續(xù)激活的過(guò)度表達(dá)同耐藥性呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系，有效抑制JNK的活性，降低多藥耐性相關(guān)蛋白的表達(dá)，以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)藥物敏感性[7]。

胃癌治療上，一般應(yīng)用順鉑化療，主要是鉑類藥物能夠增強(qiáng)JNK持續(xù)活化與下游因子表達(dá)，減少藥物所致凋亡，這樣可以增加小細(xì)胞肺癌藥物敏感性[8]。與此同時(shí)，持續(xù)激活的JNK還可以導(dǎo)致下游c-Jun過(guò)度磷酸化，形成轉(zhuǎn)錄激活因子，JNK參與耐藥雙重性可能由于由細(xì)胞類型及條件依賴性特點(diǎn)所致[9-10]。本研究結(jié)果顯示，P-gp在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為53.28%（65/122），顯著高于正常的胃組織中陽(yáng)性表達(dá)率22.86%，P-gp在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為53.28%（65/122），顯著高于正常的胃組織中陽(yáng)性表達(dá)率22.86%（8/35），且P-gp和p-JNK在胃癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。

綜上，JNK通路參與了DDP所致胃癌耐藥，高表達(dá)預(yù)示化療的效果不佳，抑制通路可成為逆轉(zhuǎn)耐藥的新靶點(diǎn)。