聯合檢測P16與SOX-2在宮頸上皮內病變中的表達及臨床意義

李梅香，蔡麗萍

（南昌大學第一附屬醫院婦科，江西 南昌 330000）

在女性惡性腫瘤死亡疾病中，宮頸癌占第二位，目前宮頸癌是唯一一個機制明確，且可以預防的惡性腫瘤[1]。宮頸癌的癌前病變為宮頸上皮內病變（CIN），積極有效地治療宮頸上皮內病變可降低宮頸癌的發病率。臨床上用于評估宮頸上皮內病變癌變的常用分類方法為：低級別宮頸上皮內病變（LSIL）以及高級別宮頸上皮內病瘤變（HSIL）[2]。對于HPV感染不足以診斷 CIN以及CINⅠ級則為 LSIL，對于CINⅡ級及CINⅢ級則為HSIL。低級別宮頸上皮內病變與高級別宮頸上皮內病瘤變的治療及預后均具有顯著的差異性，有著不同的治療方式，因此，診斷明確對于治療具有重要意義[3]。病理醫師主觀因素易影響到CIN的分級，各分級間難以進行明確的區分，故診斷與治療的難度增加。為了提高不同病理醫師間診斷的可重復性，引進了多種生物化學標記物，其中P16、SOX-2已經在臨床上廣泛應用[4]。當病理醫師用常規的HE染色不能明確診斷CIN時，則可以使用免疫組化法檢測P16、SOX-2以進行形態學的診斷。本研究通過觀察不同程度病變的宮頸組織中 P16、SOX-2陽性表達情況，探討P16、SOX-2在病變組織中表達的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 搜集2013年6月～2016年6月期間在本院經病理活檢確診為宮頸上皮內病變的病理組織標本80例，并搜集同期在本院經病理活檢示宮頸組織正常的組織標本40例。將低級別宮頸上皮內病變組織標本設為為低級別組（n=30），將高級別宮頸上皮內病變組織標本設為高級別組（n=50），將宮頸組織正常標本設為正常組（n=40）。所有病理組織標本均經兩位高年資病理醫師審核確定符合本研究的要求，且病例臨床資料完備，活檢前均未行任何放化療或中藥等抗腫瘤治療。

1.2 免疫組化染色檢查 參照免疫組化染色質量控制要求嚴格執行操作程序。P16抗體、SOX-2抗體、濃縮型DAB試劑盒均來自于北京中杉金橋生物技術有限公司；其中P16抗體的克隆號為：3G5D5；SOX-2抗體的克隆號為：EP103；濃縮型DAB試劑盒的產品編號為：ZLI-9017。

1.3 結果判定 P16陽性：細胞漿呈棕黃色，SOX-2陽性：細胞核呈棕黃色。綜合陽性率與染色強度進行評分：①陽性率評分：每張組織切片上觀察5個高倍視野（×200），平均每高倍視野陽性細胞數占觀察總細胞數的百分比；0分：陽性率＜5%；1分：陽性率在5%～25%；2分：陽性率在26%～50%；3分：陽性率在51%～75%；4分：陽性率在76%～100%。②染色強度評分：0分：無色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。最終陽性率評分與染色強度評分的得分相乘，若為0分，則為陰性（-）；若為1～4分，則為弱陽性（+）；若為5～12分，則為陽性（++）。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件進行統計分析，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常組織中SOX-2、P16表達的陽性率均為0.00%，宮頸上皮內瘤變組織中SOX-2、P16表達的陽性率分別為55%（44/80）、67.5%（54/80），,見表1。低級別組內SOX-2的陽性表達率為13.33%（4/30），陰性（-）表達有26例，弱陽性（+）表達有3例，陽性（++）表達有1例；P16的陽性表達率為23.33%（7/30），陰性（-）表達有23例，弱陽性（+）表達有3例，陽性（++）表達有4例；高級別組內SOX-2的陽性表達率為80%（40/50），陰性（-）表達有10例，弱陽性（+）表達有13例，陽性（++）表達有27例；P16的陽性表達率為94%（47/50），陰性（-）表達有3例，弱陽性（+）表達有15例，陽性（++）表達有32例；組間的P16、SOX-2陽性表達率均有明顯的差異性，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 SOX-2、P16在正常組織與宮頸上皮內瘤變組織中的表達Table 1 Sox-2 and P16 expression in normal tissue and cervical epithelial neoplasia

表2 SOX-2、P16在不同級別宮頸上皮內瘤變組織中的表達Table 2 Sox-2 and P16 expression in different levels of cervical epithelial neoplasia

3 討論

宮頸癌是一種常見的女性惡性腫瘤，而宮頸上皮內病變是其癌前病變。明確的CIN分級診斷可以為宮頸上皮內病變提供有效的治療方法，從而降低宮頸癌的發病率[5]。目前臨床上病理活檢為診斷CIN的金標準。宮頸組織標本通常采用HE染色診斷，而有一部分標本通過HE染色難以明確診斷，其受病理醫師主觀因素的影響較大[6]。有相關研究結果顯示，不同病理醫師對CINⅠ級診斷的一致性僅為64%，CINⅡ級診斷的一致性低于50%[7]。宮頸上皮內病變的病理診斷還會受到其它因素的影響。若標本采集時組織標本切片過厚，則CINⅠ級可能被診斷為CINⅡ級；若標本采集時組織標本切片過薄，則CINⅢ級可能被診斷為 CINⅡ級[8]。鱗狀上皮萎縮、慢性炎癥、特殊治療、不成熟鱗狀上皮化生等均有可能導致出現類似CIN病灶，從而會影響到宮頸上皮內病變的治療。若治療過度會對組織造成不必要的損傷，若治療不足會使病灶殘留。因此，為了提高宮頸上皮內病變病理診斷的可重復性及一致性，學術界提倡采用特異性強的生化指標來輔助診斷，如P16、SOX-2等。

在宮頸癌的發生過程中，HPV發揮著重要的作用，其中最常見的高危亞型為HPV16/18。HPV16/18在子宮頸鱗狀細胞癌中的檢出率較高，盡管目前還沒有HPV感染導致宮頸癌發病的確切證據，但已有大量證據顯示，HPV感染是宮頸癌十分常見的伴隨現象[9]。P16蛋白是一種重要的HPV轉染子宮頸細胞分子標志物，其聚集于宮頸細胞內，因此可以采用免疫組化染色方法進行清晰地觀察。在宮頸細胞發生癌變的過程中，可通過觀察P16蛋白在細胞內的表達情況而得到HPV轉染細胞的直接證據。當CIN伴有慢性宮頸感染時，通過形態學的觀察難以進行分級的判斷，特別是樣本較小，比較局限時，其重復性較差[10]。有無HPV感染可通過HPV16/18型原位雜交結果證實，但難以評價CIN的分級。在本研究結果中，正常宮頸組織的P16表達均為陰性，對于宮頸上皮內病變組織，隨著病變嚴重程度的增加，P16的陽性表達率也明顯增加。因此，P16在宮頸上皮內病變的病理診斷中具有重要意義，可以將其作為診斷及判斷其病變嚴重程度的客觀指標。

SOX-2是一種重要的轉錄因子，在DNA的損傷修復、腫瘤干細胞自我更新、細胞周期調節方面均有著不可替代的作用[11]。有相關文獻研究發現，腫瘤干細胞的自我更新相關、宮頸癌的發生、宮頸癌細胞株的浸潤轉移均與SOX-2的表達密切相關[12]。在本研究結果中，正常宮頸組織的SOX-2表達均為陰性，對于宮頸上皮內病變組織，隨著病變嚴重程度的增加，SOX-2的陽性表達率也明顯增加，在高級宮頸上皮內病變組織中，SOX-2陽性表達率高達100%。該結果說明在宮頸上皮內病變的發生發展過程中均有SOX-2的參與，其陽性表達率與宮頸上皮內病變的嚴重程度密切相關，病變越嚴重，陽性率越高。SOX-2具有調控細胞的作用，其陽性表達率可能與宮頸細胞的分化程度有關，陽性表達率的升高表示宮頸上皮內病變的病情在進展。

綜上所述，在宮頸上皮內病變的病理診斷中，如果將HE染色的形態學觀察結合P16、SOX-2的免疫組化法檢測，則能得到更加客觀的診斷，且P16與SOX-2的聯合檢測能客觀反映出宮頸上皮內病變的病變程度，提高病理診斷的精確性。