氣相色譜法測定香砂六君丸中乙酸龍腦酯

袁惠霞 歐國燈 劉瀟瀟

1.廣州市荔灣區中醫醫院，廣東廣州 510140；2.廣東省藥品檢驗所，廣東廣州 510180

香砂六君丸來源于《太平惠民和劑局方》，由木香、砂仁、黨參、炒白術、茯苓等10味藥組成，具有益氣健脾、和胃的功效，臨床上用于脾虛氣滯、消化不良、噯氣食少、脘腹脹滿、大便溏泄等癥[1-4]。本品為全生粉入藥制劑，因此，原料藥材的質量和安全直接影響到成品的療效和用藥安全。砂仁為方中佐藥，奏以健脾和胃，理氣散寒之效。揮發油成分是砂仁重要的藥效物質基礎，其中乙酸龍腦酯為砂仁揮發油中主要成分[5-15]。本品質量標準收載于《中國藥典》2010年版一部，目前暫未對砂仁進行有效的控制[1]，亦未見文獻報道香砂六君丸中砂仁的檢測。本研究建立了氣相色譜法測定香砂六君丸中乙酸龍腦酯，并對收集到的23家生產企業共23批樣品（濃縮丸8批，水丸15批）進行檢測，為該品種砂仁的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀系統、FID檢測器；Sartorius CP224S、CP225D 電 子 天 平； Elmasionic 300H超聲波清洗器（功率350W，頻率37kHz）。試劑為分析純。乙酸龍腦酯對照品（批號為110759-200303），購自中國食品藥品檢定研究院。收集來自不同生產企業樣品23批。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以彈性石英毛細管柱Agilent DB-1（柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25μm）為色譜柱；載氣為高純氮氣；柱溫100℃；進樣口溫度230℃，不分流進樣；火焰離子化檢測器（FID），檢測器溫度250℃；進樣量1μL。

2.2 對照品溶液的配制

2.2.1 標準儲備液 精密稱取乙酸龍腦酯對照品0.12562g，置25mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為乙酸龍腦酯標準儲備液（即每1mL中含乙酸龍腦酯5.0248mg）。

2.2.2 混合標準系列溶液 精密量取乙酸龍腦酯標準儲備液適量，用無水乙醇逐級稀釋，配制成含乙酸龍腦酯分別為 0.5025、0.1005、0.0502、0.0201、0.0100mg/mL 的標準系列溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細，水丸取約12g，濃縮丸取約5g（相當于含砂仁1g），精密稱定，精密加入無水乙醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率350W，頻率37kHz）30分鐘，并時時振搖，使樣品充分溶散，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。另按《中國藥典》收載的本品處方，取除砂仁外其余7味藥材，按制法配制不含砂仁的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。

2.4 專屬性

分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行分析。在此色譜條件下，陰性樣品無干擾，表明該法專屬性良好，見圖1。

圖1 乙酸龍腦酯對照品（A）、香砂六君丸樣品（B）和陰性樣品（C）的氣相色譜圖

2.5 線性關系考察

取“2.2.2”項下乙酸龍腦酯標準系列溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以對照品濃度（mg/mL）為橫坐標X，測得的峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，得回歸方程y=7325x-2.661（r=1.0000）。結果表明，乙酸龍腦酯在0.0100～1.0050mg/mL的濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度和穩定性

取標準曲線上乙酸龍腦酯對照品溶液（0.0201 mg/mL），連續進樣6 次，計算對照品峰面積的RSD為 1.5%，表明儀器精密度良好；分別在 0、2、4、6、8、12、24小時內進樣測定，計算對照品峰面積的RSD為1.3%，表明乙酸龍腦酯在24小時內穩定性良好。

2.7 檢出限和定量限

精密量取一系列不同濃度的乙酸龍腦酯對照品溶液各1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以儀器信噪比3∶1時的乙酸龍腦酯濃度3.0μg/mL作為儀器檢出限。以儀器信噪比10∶1時的乙酸龍腦酯濃度10.0μg/mL作為定量限。根據濃縮丸和水丸的取樣量分別為5g和10g，按“2.3”項下供試品溶液制備方法計算香砂六君丸濃縮丸和水丸樣品的方法檢出限分別為0.015mg/g和0.006mg/g，方法定量限分別為0.05mg/g和0.02mg/g。

2.8 重復性和回收率實驗

分別取同一批水丸和濃縮丸（水丸：批號為110807；濃縮丸：批號為1202171，兩批樣品中均未檢出乙酸龍腦酯）各6份，水丸每份取12g，濃縮丸每份取5g，精密稱定，分別精密加入乙酸龍腦酯對照品溶液（0.0502mg/mL）25mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算樣品中乙酸龍腦酯的回收率，結果水丸和濃縮丸的平均回收率分別為98.1%和99.2%，RSD分別為1.1%和1.2%，見表1。因樣品中乙酸龍腦酯含量低于檢出限，故方法重復性由回收率RSD值表示，見表1。結果表明該法準確性和重復性均良好。

2.9 樣品測定

取23個生產廠家的香砂六君丸樣品，每個廠家1批，共23批（濃縮丸8批，水丸15批），分別按“2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定樣品中乙酸龍腦酯含量，結果見表2。

3 討論

在樣品前處理的預試驗中，考察了揮發油提取法、超聲提取法及浸泡過夜提取法等幾種提取方法，結果以超聲提取法效果最佳。本方法操作簡便，測定準確，同時可以消除雜質成分的干擾。

《中國藥典》2015年版一部“砂仁”項下規定[9]，乙酸龍腦酯含量不得少于0.90%。香砂六君丸中砂仁為原粉入藥，根據處方量，香砂六君丸中乙酸龍腦酯理論含量應不低于0.8mg/g。考慮揮發性成分不穩定和大生產等因素，乙酸龍腦酯的轉移率按不低于50%計算，擬定香砂六君丸中乙酸龍腦酯含量不得少于0.4mg/g。通過對不同企業樣品的測定，結果23批樣品中有20批未檢出乙酸龍腦酯或低于定量限，占總批數的87.0%，而能檢出乙酸龍腦酯的樣品含量低且差異大。分析其原因可能與藥材的來源與企業生產工藝差異較大引起。因此，有必要在香砂六君丸的質量標準中制定砂仁的含量測定項，從而對砂仁的質量及藥品的有效性進行評價。本研究所建立的砂仁含量測定方法可操作性、可控性較強，為香砂六君丸中砂仁的質量控制提供參考。

表1 回收率和重復性考察結果

表2 樣品測定結果