孕晚期子癇前期患者入院時外周血、分娩時臍血及胎盤組織miR-126表達觀察

董迪榮，張元珍，鄺伊敏，尹秋，龔青，李家福

(1武漢大學中南醫院，武漢 430071；2大冶市中醫醫院)

子癇前期(PE)是孕產婦及圍產兒病死率增高的重要原因之一。流行病學顯示，PE的發病率為3%～10%[1,2]。血管內皮損傷是妊娠期高血壓疾病生理改變的中心環節，PE患者多出現血管內皮功能紊亂，微血管收縮和血管內血栓形成最終導致了胎盤供血不足[3]。微小RNA(miR)是一種非編碼短的小RNA，參與發育、分化、凋亡等生理過程[4]。人胎盤中表達有大量的miR，重度PE患者胎盤組織中miR-130、miR-181、miR-222、miR-195、miR-126等表達增加[5]。微小RNA-126(miR-126)是近年發現的一種小分子調節物質，具有調節血管內皮細胞和促進血管生成的功能，在正常組織的血管發生和血管炎癥反應等病理過程中發揮重要作用[6]，但miR-126在PE中的研究鮮有報道。本研究觀察了PE孕晚期孕婦血清miR-126水平變化，旨在探討miR-126在PE高危人群篩查中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年3月～2018年4月武漢大學中南醫院收治的PE孕晚期孕婦52例(觀察組)，診斷參照《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[7]，除PE相關母胎并發癥外，無其他內外科并發癥。早發型(<34周)27例和晚發型(≥34周)25例。另選同期孕晚期正常孕婦68例(對照組)，血壓正常，無蛋白尿，分娩健康足月兒(孕周≥37周)，無內外科并發癥。兩組均排除多胎妊娠、胎膜早破、多囊卵巢綜合征和不明陰道流血等患者。本研究已經過我院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 孕婦血清、臍血血清、胎盤組織miR-126檢測 ①標本收集：采集所有入選對象晨起空腹肘靜脈血5 mL，置于EDTA管中，離心機(2 500 r/min)離心15 min，收集血清，儲存于-70 ℃。孕婦分娩后立即收集臍血和胎盤。從臍帶植入點旁5 cm處將胎盤分為母體面部份、中間部份、胎兒面部份共3部分，切開時盡量避免胎盤梗死和鈣化部份。采集中間部份的絨毛，體積為2 cm×2 cm×2 cm，冰生理鹽水中沖洗后儲存于-70 ℃[8]。②胎盤組織miR-126檢測：碾磨法提取胎盤組織中的RNA，miRNA 3′端加Poly(A)處理、修飾后逆轉錄，置于-20 ℃下保存，進行實時熒光定量PCR檢測。檢測時將miR-126 nmol per OD引物稀釋為100 μmol，將2倍miRNA premix混合后離心，0 ℃下反應，反應體系包括miRNA premix 10 μL、miR-126 2 nmols per OD 0.4 μL、reverse primer 0.4 μL、miRNA第一鏈cDNA 2 μL、去離子水7.2 μL。反應過程為起始模板變性、PCR循環中模板變性、退火和延伸。③血清miR-126檢測：采用離心柱型分離試劑盒分離血清中miRNA，200 μL血清中加入200 μL裂解液，離心后進行RNA的提取，檢測步驟同“②”。本研究所選的內參基因為U6，miRNA相對量的計算采用 CT法。miR-126的相對表達量為2-ΔΔCt， CT(閾值循環數)=待測樣本基因Ct均值-待測樣本內參Ct均值[9]。

1.3 一般資料收集及血生化指標檢測 入院時，收集患者年齡、孕次、產次、孕前身體質量指數(BMI)、孕周、定期檢查例數、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質量等一般資料，患者的最高收縮壓和舒張壓為入院后未服用降壓藥前所測的最高值；檢測甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度膽固醇(LDL-c)、血肌酐、尿酸和白蛋白等生化指標，血生化指標動態復查，以全部測得值的中位數作為最終數據。

2 結果

2.1 兩組孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織miR-126表達比較 結果見表1。

表1 兩組孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織miR-126表達比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 兩組年齡、孕次、產次、孕前BMI、妊娠期體質量增加值比較 結果見表2。

表2 兩組年齡、孕次、產次、孕前BMI、妊娠期體質量增加值比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.3 兩組分娩孕周、定期檢查例數、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質量比較 觀察組及對照組定期檢查比率分別為63.46%(33/19)、88.24%(60/8)，兩組比較，P<0.05。兩組分娩孕周、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質量比較見表3。

表3 兩組分娩孕周、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質量比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.4 兩組TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比較 結果見表4。

表4 兩組TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.5 觀察組孕婦血清miR-126水平與臨床指標的相關性 相關性分析顯示，觀察組孕婦血清miR-126水平與年齡呈負相關(-4.02，P<0.05)，而與分娩孕周、收縮壓、舒張壓、新生兒體質量、白蛋白、血肌酐、尿酸均無相關性(P均>0.05)。

3 討論

PE是指妊娠20周后出現新發的高血壓，且伴有蛋白尿或其他系統的損害，嚴重的系統損害使其成為孕婦圍產期發病率和病死率升高的主要原因。PE是是孕產婦和圍產兒患病率和病死率增高的主要原因之一，尤其對于孕晚期孕婦[3]。既往研究[10]證實，miR表達異常與人類疾病的發生有關。文獻[11]報道，PE患者胎盤和外周血中miR的異常表達也會使細胞功能紊亂。Wang等[12]發現，PE患者胎盤中miR-20a的高表達會抑制叉頭框蛋白A1，導致滋養層細胞增殖和侵襲能力下降。Muralimanoharan等[13]發現，PE患者胎盤組織中miR-210的表達水平增高會導致線粒體功能紊亂。

miR-126是Deeppak等于2006年發現的一類小分子RNA，與血管生成密切相關[14,15]。miR-126在血管內皮細胞中的含量最為豐富，且具有特異性，其可以調節細胞增殖、遷移和血管生成[16,17]。研究[14]發現，miR-126可以通過調節內皮祖細胞的功能參與胎盤血管的新生。本研究發現，PE患者外周血和胎盤組織中miR-126的表達水平均明顯升高，這與Yan等[18]研究一致。本研究發現，觀察組孕婦血清miR-126水平和胎盤組織miR-126表達高于對照組，臍血血清miR-126水平無差異，說明miR-126可能與PE的發病有關，孕婦血清異常表達的miR-126可能來源于胎盤。本研究還發現，觀察組早發型和晚發型孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織中miR-126表達均無明顯差異，提示miR-126參與這兩型的病理機制可能類似，且與發病時間無關。結果提示，孕晚期檢測孕婦miR-126的表達水平可能有助于PE高危人群的篩查。

既往有研究[2]發現，PE發病的高危因素有初產婦、孕婦年齡<20歲、分娩時孕周<32周、產前保健<5次等。本研究顯示，觀察組孕婦血清miR-126水平與年齡呈負相關，說明隨著年齡的增長，孕婦外周血清miR-126水平下降。而孕婦血清miR-126水平與分娩孕周、收縮壓和舒張壓等無關，這可能是因為PE多為胎盤源性，機體全身系統炎癥反應過度激活[19]。

總之，孕晚期孕婦血清和胎盤組織中miR-126異常表達，其可能參與了PE的發病，且隨著年齡的增長，其在孕婦血清中的水平越低。孕晚期對孕婦血清miR-124的檢測有助于PE高危人群的篩查。