匹多莫德水溶液穩定性研究

于士龍 ，羅勝男 ，徐菁陽 ，崔思嬌 ，汪 宇

（1.中國人民解放軍第463醫院，遼寧 沈陽 110042； 2.沈陽藥科大學，遼寧 沈陽 110000）

匹多莫德是人工合成的免疫調節劑，能顯著下調由植物血凝素誘導的血單核細胞白細胞介素4（IL－4）等細胞因子的分泌，增加γ干擾素（IFN－γ）和IL－12等Th1型細胞因子的分泌，從而調節Th1／Th2細胞因子平衡。匹多莫德通過免疫功能調節機制發揮其抗細菌和病毒作用，預防和降低感染的復發[1－2]。其口服制劑市售劑量下可快速起效，服用方便，無注射疼痛，且水溶性良好，各口服劑型的生物利用度無明顯差異，因而應用廣泛。但由于匹多莫德的分子結構中含有2個酰胺結構，其在有水的條件下易受pH和溫度等條件影響而水解。本研究中探討了匹多莫德水溶液穩定性的影響因素[3]，考察不同條件下匹多莫德水溶液的穩定性，為其口服液體制劑或注射劑的處方工藝篩選提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（美國SSI科學系統公司）；pHS－25型pH計（上海儀電科學儀器股份有限公司）；HNP－400GSD型綜合藥品穩定性試驗箱（重慶宇碩實驗儀器公司）；ATY224型電子分析天平（日本島津公司）；CSF－18型超聲波清洗儀（上海超聲波儀器廠，功率為500 W）；DK－98－Ⅱ型恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

匹多莫德原料藥（批號為151102，江蘇吳中醫藥集團公司）；匹多莫德對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量為99.9%，批號為100588－201402）；甲醇和異丙醇為色譜純，氫氧化鈉和磷酸二氫鈉為分析純。

2 方法與結果

2.1 樣品溶液制備[4]

稱取匹多莫德原料藥約80 g，加入2 000 mL水中，將樣品水溶液置30℃水浴中，攪拌溶解，完全溶解后停止加熱，冷卻至室溫。將樣品均分成15份，以30%氫氧化鈉分別調節 pH 為 1.8，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0（分別編號為 1 ～15）。重復以上步驟，平行制備3份，作為3種不同存放條件下的試驗樣品。

2.2 含量測定[5－6]

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：0.01mol／L 磷酸二氫鈉 － 甲醇 － 異丙醇（95∶4∶1，磷酸調 pH 至 2.5）；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2.2 溶液制備

供試品溶液：精密量取樣品0.5 mL，置50 mL容量瓶中，以流動相定容至刻度，搖勻，即得。

對照品貯備液：取匹多莫德對照品適量，精密稱定，加流動相溶解，即得質量濃度為0.9 g／L的溶液。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品貯備液適量，加流動相分別稀釋成質量濃度為 0.450，0.225，0.113，0.056，0.028，0.014 g／L 的對照品溶液，分別精密吸取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）對質量濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程Y＝2.530 9×104X＋15.175 2×104，r＝0.999 7（n＝6）。結果表明，匹多莫德質量濃度在0.45～0.014 g／L范圍內與峰面積線性關系良好。

重復性與精密度試驗：取匹多莫德對照品適量，精密稱定，加流動相溶解，平行制備6份質量濃度為0.25g／L的溶液，測定含量。結果平均百分含量為99.65%，RSD為1.21%（n＝6），表明方法重復性良好。另取其中1份匹多莫德對照品溶液，精密吸取20 μL，連續進樣6次，測定含量。結果平均百分含量為99.23%，RSD為0.99%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取匹多莫德對照品貯備液，分別室溫放置 0，1，2，4，6 h，用 0.45 μm 微孔濾膜濾過，精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，測定匹多莫德含量。結果的RSD為1.25%（n＝4），表明溶液在6 h內穩定。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的同一匹多莫德樣品溶液6份，每份1 mL，加流動相稀釋200倍，每份各精密吸取5 mL，分別精密加入對照品貯備液2.0 mL，按擬訂色譜條件進樣測定。結果見表1。

表1 匹多莫德加樣回收試驗結果（n＝6）

2.3 穩定性影響因素考察[7－8]

2.3.1 室溫普通光照試驗

將2.1項下制備的供試品溶液于室溫和普通光照條件下保存3個月，按擬訂色譜條件，分別于第0，15，30，60，90 d時測定樣品中匹多莫德含量，同時檢測各樣品的pH。結果見表2。

表2 常溫光照條件下不同pH樣品含量和pH變化

2.3.2 60℃光照試驗

將2.1項下制備的供試品溶液于60℃和普通光照條件下保存3個月，按擬訂色譜條件，分別于第0，15，30，60，90天時測定樣品中匹多莫德含量，同時檢測各個樣品的pH。結果見表3。

表3 60℃光照條件下不同pH樣品含量和pH變化

2.3.3 室溫強光（4 500 lx）[9－10]試驗

將2.2.2項下制備的供試品溶液于室溫和強光（4 500 lx）條件下保存3個月，按擬訂色譜條件，分別于第 0，15，30，60，90 d 時測定樣品中匹多莫德含量，同時檢測各個樣品的pH。結果見表4。

表4 室溫強光（4 500 lx）條件下不同pH樣品含量和pH變化

3 討論

在室溫普通光照儲存條件下，4－15號樣品（pH 3.5～9）的含量變化均小于10%，說明此條件匹多莫德水溶液相對穩定。其中，9－15號樣品（pH 6～9）在第30天后的含量變化趨緩，均小于1.5%。由表3可知，14號和15號樣品在儲存期間pH變化較大，但其pH僅在30 d內變化程度較大，30 d后pH穩定在7～8范圍內不變，說明當溶液pH大于8時，其最終穩定的pH為7～8。因此，在室溫普通光照條件下，匹多莫德水溶液pH為3.5～8時相對穩定，pH為6～8時最穩定。

在60℃普通光照儲存條件下，6－15號樣品（pH 4.5～9）的含量變化均小于10%，說明此條件匹多莫德水溶液相對穩定；其中1－2號樣品的含量變化均超過了50%，說明在低pH條件下升高溫度更容易加速匹多莫德的分解；10－15號樣品（pH 6.5～9）在第30天后的含量變化趨緩，且均小于1.5%。由表3可知，13－15號樣品（pH 8～9）在儲存期間pH變化較大，但其pH在30 d后變化趨緩，pH在7左右保持穩定。可知在60℃普通光照條件下，pH為4.5～8的匹多莫德水溶液相對穩定，pH為6～7.5最穩定。無論在60℃普通光照條件下，還是在室溫普通光照條件下，匹多莫德水溶液的含量與pH變化趨勢均一致；但60℃普通光照條件下，能使匹多莫德水溶液保持穩定的條件范圍更窄。可知，高溫不利于匹多莫德水溶液的穩定。

在室溫強光（4 500 lx）條件下，4－15 號樣品（pH 4.5～9）的含量變化均小于10%，說明此條件匹多莫德水溶液相對穩定；其中5－15號樣品（pH 5～9）在第60天后的含量變化趨緩，均小于1%。由表4可知，13－15號樣品（pH 8～9）在儲存期間pH變化較大，但其pH在30 d后變化趨緩，基本穩定在6～7范圍內。可知，在室溫強光（4 500 lx）條件下，pH為 4.5～7.5的匹多莫德水溶液相對穩定，pH為5～7.5最穩定。室溫強光（4 500 lx）條件下，匹多莫德水溶液的含量和pH變化趨勢與其他2種條件相一致，而穩定性不如條件室溫普通光照，但要強于60℃普通光照。可知，光線可以影響匹多莫德的穩定性，但并不是主要影響因素。

綜上所述，匹多莫德水溶液保持穩定的最佳條件為調節pH為6～8，同時應在室溫和避光條件下儲存。匹多莫德水溶液主要用于注射劑和口服制劑，除了注射劑要保持特定的pH范圍外，口服制劑還要受胃液pH的影響。胃液的 pH一般低于3，pH為1.8～3.0時匹多莫德水溶液最不穩定，故本研究結果可為今后進一步進行匹多莫德的制劑處方篩選和體內穩定性研究提供參考。