子宮內膜癌組織LAPTM4B-35和LRG1表達變化及其臨床意義

梁棟，李維茹，鐘沛文，徐禮江

(佛山市第一人民醫院，廣東佛山528000)

近年來子宮內膜癌的發病率呈明顯上升趨勢。目前認為，子宮內膜癌形成是一個多基因參與的復雜過程，其具體機制尚不完全清楚。溶酶體相關4次跨膜蛋白B(LAPTM4B)是一種癌基因，尤其LAPTM4B-35，在多種腫瘤組織中過表達[1]。富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)屬于富亮氨酸重復家族成員，可參與調節內皮細胞TGF-β通路活性，促進新生血管生成，尤其是腫瘤血管生成[2]。目前關于LAPTM4B-35、LRG1在子宮內膜癌發生、發展中作用的研究甚少。本研究觀察了子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1表達變化，并分析其與患者臨床病理參數和預后的關系，旨在探討二者在子宮內膜癌發生、發展中的作用。

1 臨床資料

選擇2010年1月～2012年12月佛山市第一人民醫院收治的子宮內膜癌患者86例。納入標準：①均行手術治療，術后組織病理檢查明確診斷為子宮漿液性癌或內膜樣癌；②首次發病；③術前未行任何抗腫瘤治療；④臨床病理資料完整。排除標準：①子宮和卵巢雙發癌且不能確定原發灶；②合并全身感染、其他惡性腫瘤以及嚴重肝腎功能不全；③術前行抗腫瘤治療。患者年齡34～76(54.39±14.32)歲，其中≤50歲35例、>50歲51例；病理類型：腺癌65例，其他類型21例；臨床分期(FIGO分期)：Ⅰ期59例，Ⅱ、Ⅲ期27例；組織分化程度：高分化32例，中分化27例，低分化27例；浸潤深度：≤1/2肌層61例，>1/2肌層患者25例；有淋巴結轉移24例，無淋巴結轉移62例。本研究經佛山市第一人民醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬均知情同意。

2 方法與結果

2.2 子宮內膜癌組織及其配對的癌旁正常組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA表達檢測 取手術切除的子宮內膜癌組織及其配對的癌旁組織(距腫瘤組織邊緣>2.0 cm，經組織病理檢查證實為正常子宮內膜組織)各86例份，按TRIzol法提取組織總RNA，經超微量紫外分光光度計鑒定，OD260/OD280為1.8～2.1，滿足實驗要求。取總RNA 0.5 μg，按反轉錄試劑盒說明反轉錄為cDNA，置于-80 ℃冰箱保存。引物序列：LAPTM4B-35上游引物5′-GCCCGGAGCGATGAAGATG-3′，下游引物5′-CAACAGTACCACAGCATTGATGA-3′；LRG1上游引物5′-AGAACCTGAGCGACCTCTATC-3′，下游引物5′-CACAGCGCGTGTCATTCTG-3′；GAPDH上游引物5′-TCACCATCTTCCAGGAGCGA-3′，下游引物5′-CACAATGCCGAAGTGGTCGT-3′。PCR反應體系共10 μL：2×SYBR Mixture 5 μL，上下游引物各0.25 μL，cDNA 0.4 μL，ddH2O 4.1 μL；反應條件：50 ℃預熱2 min，95 ℃ 3 min，然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 34 s、95 ℃ 15 s共40個循環。以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCT法計算目的基因mRNA相對表達量。結果顯示，子宮內膜癌組織與癌旁正常組織LAPTM4B-35 mRNA相對表達量分別為3.42±1.32、1.21±0.43，LRG1 mRNA相對表達量分別為4.18±1.65、1.18±0.21。子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA相對表達量均明顯高于癌旁正常組織(t分別為12.216、13.323，P均<0.05)。以LAPTM4B-35、LRG1 mRNA相對表達量的均數(3.42、4.18)為界值，將患者分為LAPTM4B-35、LRG1高表達者與低表達者。其中，LAPTM4B-35高表達者45例、低表達者41例，LRG1高表達者43例、低表達者43例。

2.3 子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA表達與患者臨床病理參數的關系 子宮內膜癌組織LAPTM4B-35 mRNA表達與臨床分期、組織病理分級、浸潤深度有關(P均<0.05)，與患者年齡、病理類型、淋巴結轉移無關(P均>0.05)；子宮內膜癌組織LRG1 mRNA表達與臨床分期、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與患者年齡、病理類型、組織病理分級和浸潤深度無關(P均>0.05)。見表1。

表1 子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA表達與患者臨床病理參數的關系

2.4 子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA表達與患者預后的關系 術后采用電話或門診復查方式隨訪，隨訪時間以術后出院為起點，隨訪60個月，以患者死亡或隨訪時間結束為終點。隨訪時間1～60個月，中位隨訪時間為46個月。LAPTM4B-35低表達者與高表達者術后5年生存率分別為90.24%(37/41)、66.67%(30/45)，術后生存時間分別為(49.20±9.46)、(30.60±17.21)個月，二者比較P均<0.05。LRG1低表達者與高表達者術后5年生存率分別為88.37%(38/43)、67.44%(29/43)，術后生存時間分別為(50.21±7.44)、(28.28±18.05)個月，二者比較P均<0.05。見圖1。

圖1 子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1 mRNA表達與患者預后的關系

3 討論

LAPTM4B基因是一種與肝細胞癌相關的癌基因，定位于人染色體8q22.1，含有2個等位基因，可編碼2種蛋白質，相對分子質量分別為35、24 kDa。研究發現，LAPTM4B基因多態性與胃癌、子宮內膜癌等易感性有關[3，4]。LAPTM4B能激活PI3K/Akt信號通路，通過調節下游信號分子活性而發揮促進腫瘤細胞增殖、抗腫瘤細胞凋亡等作用[5]。LAPTM4B還可參與細胞周期蛋白基因、p53基因的表達和功能調控，發揮促癌基因作用。LAPTM4B-35(NP 060877)蛋白是由LAPTM4B(NM 018407)基因編碼、由317個氨基酸殘基組成的、相對分子質量約為35 kDa的跨膜蛋白[6，7]。研究發現，在肝細胞癌等惡性腫瘤中LAPTM4B-35表達與腫瘤淋巴結轉移、遠處轉移呈正相關關系，而與腫瘤組織分化程度、患者預后呈負相關關系[8，9]；LAPTM4B-35可能通過調控MMP-9基因表達，促進胃癌細胞侵襲和遷移，誘導腫瘤惡性進展[10]。本研究結果顯示，子宮內膜癌組織LAPTM4B-35 mRNA表達增加，提示在子宮內膜癌形成過程中LAPTM4B-35可能發揮癌基因作用，與其在其他惡性腫瘤形成中的作用類似。LAPTM4B-35 mRNA表達與腫瘤病理類型、臨床分期、浸潤深度、淋巴結轉移有關，說明LAPTM4B-35可能參與子宮內膜癌的發生、發展。本研究結果顯示，LAPTM4B-35高表達者術后5年生存率明顯低于LAPTM4B-35低表達者，提示LAPTM4B-35高表達者預后較差，與其在前列腺癌、胃癌、膠質母細胞瘤等惡性腫瘤中一致[11，12]。

LRG1于1977年從人類血清中首次分離出來，其基因定位于人染色體19p13.3，由312個氨基酸殘基組成的多肽鏈，相對分子質量約45 kDa。LRG1蛋白又稱富亮氨酸α2糖蛋白1，屬于富亮氨酸重復家族蛋白類的高度保守因子，可參與蛋白間相互作用，在多種信號傳導等生理過程中發揮重要作用，如LRG1可通過TGF-β信號通路促進上皮細胞增殖和腫瘤新生血管形成。研究證實，LRG1能夠促進血管生成，其較少參與正常血管生成，主要是對異常血管生長起作用，并在免疫應答、粒細胞分化、細胞增殖或凋亡、細胞黏附等生理過程中發揮重要作用。LRG1在毛細血管靜脈中異常表達，并趨向與細胞外基質蛋白結合，與多種惡性腫瘤的形成密切相關，如消化系統、生殖系統等惡性腫瘤[13，14]。LRG1高表達可顯著促進腫瘤血管生成，其分子機制主要為通過調節TGF-β信號通路來發揮作用，在腫瘤侵襲、轉移和復發中均具有重要作用[15]。本研究發現，子宮內膜癌組織LRG1 mRNA相對表達量明顯高于癌旁正常組織。說明LRG1可參與子宮內膜癌的發生、發展。本研究還發現，LRG1 mRNA表達與臨床分期、淋巴結轉移有關，并且LRG1高表達者術后5年總生存率明顯低于LRG1低表達者。因此推測，LRG1可能通過促進腫瘤血管形成，促進子宮內膜癌的發生、發展。

綜上所述，子宮內膜癌組織LAPTM4B-35、LRG1過表達，二者表達變化可能與患者病情進展和預后有關。LAPTM4B-35、LRG1有可能成為子宮內膜癌患者病情判斷和預后預測的腫瘤分子標志物。