B7—H4蛋白在彌漫大B細胞淋巴瘤患者淋巴組織中表達情況及其與臨床特征和預后的相關性研究

朱穎　蔡崗麗　何綠苑

[摘要] 目的 分析彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）患者淋巴組織中B7-H4蛋白表達情況及其與臨床特征和預后的相關性研究。 方法 選取2010年3月～2016年3月本院確診為彌漫大B細胞淋巴瘤患者123例作為實驗組，另外選取同期87例正常淋巴結患者為對照組，62例炎性淋巴結患者為炎癥組。所有患者采用免疫組織化學法檢測B7-H4蛋白表達情況，分析三組患者的B7-H4蛋白表達水平，分析B7-H4蛋白表達的高低與臨床特征和預后的相關性。 結果 實驗組患者B7-H4陽性表達96例，對照組無，炎癥組19例，實驗組B7-H4陽性率明顯高于炎癥組，差異有統計學意義（χ2=5.34，P=0.02）；B7-H4的表達對DLBCL患者臨床特征無明顯影響，差異無統計學意義（P>0.05）；隨訪82例患者B7-H4表達呈陽性者57例，平均生存時間（52.1±4.2）個月；B7-H4表達呈陰性者25例，平均生存時間（63.2±3.7）個月，差異有統計學意義（χ2=4.17，P=0.02）。 結論 B7-H4蛋白在DLBCL患者淋巴組織中呈高表達，提示B7-H4蛋白與彌漫大B細胞淋巴瘤的發生、發展和預后密切相關。

[關鍵詞] B7-H4蛋白；彌漫大B細胞淋巴瘤；表達情況；臨床特征

[中圖分類號] R733.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）19-0009-04

Expression of B7-H4 protein in lymphoid tissue of patients with diffuse large B-cell lymphoma and its correlation with clinical features and prognosis

ZHU Ying CAI Gangli HE Lvyuan

Department of Hematology， Jinhua Hospital of Traditional Chinese Medicine in Zhejiang Province， Jinhua 321017， China

[Abstract] Objective To analyze the expression of B7-H4 in lymphoid tissues of patients with diffuse large B-cell lymphoma（DLBCL） and its correlation with clinical features and prognosis. Methods 123 cases diagnosed as diffuse large B cell lymphoma in our hospital from March 2010 to March 2016 were selected as the experimental group. Another 87 patients with normal lymph node were selected as the control group and 62 cases of inflammatory lymph nodes were selected as the inflammatory group. All patients were examined for the expression of B7-H4 protein by immunohistochemistry. The expression of B7-H4 protein in three groups was analyzed. The correlation between the expression of B7-H4 protein and clinical features and prognosis was analyzed. Results There were 96 cases of B7-H4 positive in the experimental group， 19 in the control group and no in the control group. The positive rate of B7-H4 in experimental group was significantly higher than that in inflammation group（χ2=5.34， P=0.02）. The expression of B7-H4 had no significant effect on the clinical features of patients with DLBCL， the difference was not statistically significant（P>0.05）； after follow-up of 82 patients with positive expression of B7-H4 in 57 cases， the average survival time was （52.1±4.2）months； There were 25 cases with negative expression of B7-H4， the average survival time was （63.2±3.7）months， the difference was statistically significant （χ2=4.17， P=0.02）. Conclusion B7-H4 protein is highly expressed in lymphoid tissues of patients with DLBCL，suggesting that B7-H4 protein is closely related to the occurrence， development and prognosis of diffuse large B cell lymphoma.

[Key words] B7-H4 protein； Diffuse large B cell lymphoma； Expression； Clinical features

彌漫大B細胞淋巴瘤是一種大B淋巴細胞彌漫性惡性增生性疾病，其瘤細胞核的大小至少2倍于正常小淋巴細胞核甚至大于巨噬細胞核，是非霍奇金淋巴瘤中最常見的類型。其發病見于各年齡段，高峰在50～70歲之間，男性多于女性，發病部位可在結內和結外，原發結外的高達40%[1-3]。該病屬于侵襲性淋巴瘤，病情初期不易確診，發展迅速，經確診即是晚期，故死亡率較高。目前化療是臨床常用的治療方式，但效果并不理想，因此如何根據其發病機制選擇有效的治療方案是亟待解決的問題[4-7]。B7-H4是2003年在淋巴組織和非淋巴組織中檢測到的B7家族的一個新成員，它具有限制、終止和削弱T細胞的免疫應答的功能，在正常組織中有較低表達甚至無表達，有研究發現，B7-H4在一些惡性腫瘤組織中有較高表達，如肺癌、卵巢癌、乳腺癌等，研究還顯示其表達與腫瘤的性質和預后相關，因此較多學者認為B7-H4是診斷腫瘤的早期指標，也是選擇預后的重要指標[8-11]。本研究檢測彌漫大B細胞淋巴瘤患者淋巴組織中B7-H4蛋白的表達水平，探討其與臨床特征的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年3月～2016年3月來本院就診的確診為彌漫大B細胞淋巴瘤患者123例（實驗組），男73例，女50例，年齡18～80歲，平均（50.32±3.57）歲；另外選取同期來本院就診的87例正常淋巴結患者作為對照組，選取62例炎性淋巴結患者為炎癥組；三組患者一般資料差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。所有入組患者均檢測B7-H4，接受治療前進行血常規檢查、表淺淋巴結B超、生化檢驗、頸胸腹盆部增強CT等。

1.2 納入及排除標準

納入標準：（1）淋巴結腫大；（2）反復發熱：（3）初次確診為彌漫大B細胞淋巴瘤；（4）入組前未接受治療。排除標準：（1）有腫瘤病史；（2）長期激素藥物治療。

1.3 結果判定

實驗組所有患者的病理標本經過免疫組織化學染色后在光學顯微鏡下進行分析，隨機選擇4個腫瘤區域做細胞計數。根據檢測到的陽性染色細胞數量來判定B7-H4的表達情況。免疫組織化學結果采用半定量分級，陰性（-）為病灶表達<17%；弱陽性（+）為17%～55%；陽性（++）為56%～85%；>85%是強陽性（+++）。

1.4 分組方法

根據檢測的B7-H4表達水平分組，B7-H4<15%為陰性組，≥15%為陽性組。根據B7-H4的陽性率，在實驗組中，B7-H4細胞數≥50%為高表達組，B7-H4細胞數<50%為低表達組。

1.5 治療方法

實驗組118例患者接受了化療，其中59例患者采取CHOP化療方案（CHOP化療組），59例患者采取R-CHOP化療方案（R-CHOP化療組）。CHOP化療方案：第1天靜脈下滴注長春新堿3 mg、阿奇霉素55 mg/m2、環磷酰胺740 mg/m2，并連續5 d口服潑尼松100 mg。R-CHOP化療方案：在CHOP化療方案的基礎上，第1天靜脈下滴注增加利妥昔單抗375 mg/m2。兩組患者治療20 d為一個周期，共治療4個周期。

1.6 療效標準

治療2個周期后根據《血液病診斷及療效標準》來評價近期治療效果，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）和疾病進展（DP）[12-14]。依據患者治療后的生存時間評價長期療效。

1.7 統計學方法

應用SPSS20.0統計軟件分析數據結果。計數資料比較采用χ2檢驗，總生存時間的生存分析采用Kaplan-Meier生存函數Log-rank檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組患者的B7-H4表達情況比較

實驗組患者B7-H4陽性表達96例，對照組無，炎癥組19例，實驗組B7-H4陽性率明顯高于炎癥組，差異有統計學意義（χ2=5.34，P=0.02）。見表1。

表1 三組患者的B7-H4表達情況比較

注：陽性率=陽性例數/總例數×100%

2.2 實驗組患者臨床特征與B7-H4細胞比例關系

實驗組患者中低表達組69例（B7-H4細胞數比例<50%），高表達組54例（B7-H4細胞數比例≥50%）。兩組在性別、年齡、結外侵潤、臨床分期等臨床特征方面相比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

表2 實驗組患者臨床特征與B7-H4細胞比例比較

2.3 實驗組不同化療方案臨床療效比較

實驗組118例患者接受CHOP化療59例，R-CHOP化療59例，化療后CHOP化療組病情完全緩解（CR）、部分緩解（CR）的患者29例，有效率為49.15%；R-CHOP化療組病情完全緩解、部分緩解的患者40例，有效率為67.80%，明顯高于CHOP化療組，差異有統計學意義（χ2=5.22，P=0.03）。兩組的生存時間比較，差異有統計學意義（χ2=4.37，P=0.02）。見表3。

表3 實驗組不同化療方案臨床療效比較

注：有效率=（CR+CR）/總例數×100%

2.4 B7-H4表達高低與彌漫大B細胞淋巴瘤患者預后的關系

患者的生存時間從開始治療的首日算起，通過電話隨訪和門診復診了解患者的預后情況。隨訪時間截止到2015年8月30日。共隨訪到82例患者，其中B7-H4表達呈陽性者57例，平均生存時間（52.1±4.2）個月；B7-H4表達呈陰性者25例，平均生存時間（63.2±3.7）個月，兩者比較，差異有統計學意義（χ2=4.17，P=0.02）。82例彌漫大B細胞淋巴瘤患者的平均生存時間是（55.00±2.29）個月，Kaplan-Meier生存函數分析及Log-rank檢驗顯示，不同的B7-H4表達組間平均生存時間有差異，具有統計學意義（χ2=3.26，P=0.01）。見圖1。

圖1 B7-H4的Kaplan-Meier生存函數

3 討論

B7-H4是新發現的共刺激分子B7家族的成員，位于1號染色體，由六個外顯子和五個內含子組成。它在T細胞介導的免疫抑制中發揮重要作用，可以抑制T細胞增殖和細胞因子分泌來負性調控T細胞的免疫應答，從而使腫瘤細胞逃避機體免疫系統的攻擊[15-17]。

研究顯示，B7-H4在彌漫大B細胞淋巴瘤患者的淋巴組織中表達明顯，在正常淋巴結患者中無表達，在炎癥淋巴結患者中有較低表達，與Kyung等[18]的研究結果基本一致，提示彌漫大B細胞淋巴瘤的發生、發展與B7-H4有關，對診斷腫瘤有重要意義，有研究表明B7-H4對T細胞介導免疫反應的抑制一般是通過三種途徑：一是抑制T細胞增殖；二是抑制T細胞活性；三是抑制細胞因子分泌[19]。實驗組中有118例患者接受了化療，CHOP化療組有效率48.39%，R-CHOP化療組有效率75.41%，明顯高于CHOP化療組，表明臨床療效與B7-H4表達的高低有關。本研究中DLBCL的臨床特征（年齡、性別、臨床分期、結外侵潤）對B7-H4的表達水平高低及總生存時間無明顯影響，這一結果與在其他腫瘤中的情況有所不同。有報道在惡性腫瘤中B7-H4的表達與惡性程度及預后相關[20]。結果顯示，B7-H4表達根據隨訪到的82例患者的資料顯示，B7-H4表達呈陽性者57例，平均生存時間（52.1±4.2）個月；B7-H4表達呈陰性者25例，平均生存時間（63.2±3.7）個月。Kaplan-Meier生存函數分析及Log-rank檢驗顯示，B7-H4表達的高低與預后有關，B7-H4表達較高的預后較差。可能是因為B7-H4表達較高降低了患者的特異免疫力，影響了預后。由此可知，B7-H4在腫瘤免疫中起到負性調節作用，因此根據B7-H4的表達情況可以了解患者的免疫狀態和預后情況。

綜上所述，B7-H4蛋白在彌漫大B細胞淋巴瘤患者的淋巴組織中呈高表達，提示B7-H4蛋白與彌漫大B細胞淋巴瘤的發生、發展和預后密切相關，為彌漫大B細胞淋巴瘤的診斷治療提供了新指標。

[參考文獻]

[1] 郭淑萍，童茵，倪萬茂，等.彌漫大B細胞淋巴瘤的B7-H4表達情況及臨床特征相關性分析[J].中華危重癥醫學雜志：電子版，2015，1（2）：1-5.

[2] 王利飛，崔澂，劉翠蓮，等.協同共刺激分子B7-H4參與腫瘤免疫逃逸的研究進展[J].中國免疫學雜志，2015， 8（1）：139-141.

[3] 劉建江，張娜，劉魯迎，等.放療對早期彌漫大B細胞淋巴瘤化療后CR患者的價值研究[J].中華放射腫瘤學雜志，2015，24（2）：138-142.

[4] Geng Y，Wang H，Lu C，et al. Expression of costimulatory molecules B7-H1，B7-H4 and Foxp3+ Tregs in gastric cancer and its clinical significance[J]. International Journal of Clinical Oncology，2015，20（2）：273-281.

[5] 蔡明淵，蔣敬庭.協同刺激分子B7-H4在胃癌組織中的表達及定位[J].現代免疫學，2015，6（5）：378-383.

[6] 張巍，王晶，王艷芳，等.共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在血液系統惡性腫瘤細胞株中的表達水平和分布特征[J].中國實驗血液學雜志，2016，24（5）：1539-1546.

[7] 張燕，王婷婷，徐曼，等.B7-H4對宮頸癌患者外周血活化T細胞增殖、凋亡和分泌細胞因子的影響[J].重慶醫學，2015，11（26）：3628-3630.

[8] 陳施婧，朱彥，雷芳，等.（R）-CHOP方案中阿霉素平均每周劑量強度影響初診彌漫大B細胞淋巴瘤患者的治療效果[J].南京醫科大學學報（自然科學版），2015，6（4）：529-533.

[9] 胡蓉華，孫婉玲，趙弘，等.利妥昔單抗聯合調整劑量EPOCH方案治療胃腸道彌漫大B細胞淋巴瘤[J].南方醫科大學學報，2016，36（9）：1291-1294.

[10] 范磊，徐衛，李建勇.彌漫大B細胞淋巴瘤預后新指標[J].中國實用內科雜志，2015，9（2）：81-84.

[11] 徐淑芬，白海，土存邦，等.利妥普單抗聯合CHOP方案治療彌漫大B細胞淋巴瘤臨床療效[J].現代腫瘤醫學，2014，22（8）：1945-1947.

[12] Qian Y，Hong B，Tao Z，et al. 216P Expression and significance of B7-H4 and HBx in HBV related hepatocellular carcinoma[J].Annals of Oncology，2015，26（9）：65-67.

[13] Yi KH，Chen L.Fine tuning the immune response th-rough B7-H3 and B7-H4[J]. Immunol Rev，2013，229（1）：145-151.

[14] 謝敏瑚，土亞萍，盧志賢，等.血清可溶性B7-H4在淋巴瘤患者診斷中的臨床意義[J].放射免疫學雜志，2016， 25（4）：442-443.

[15] Guttapalli A，Ma C，Thodima V，et al. Clinico-and path-ogenomic analyses of a single institution diffuse large B-cell lymphoma cohort[J]. Cancer Genetics，2015，208（6）：357-358.

[16] 朱俊鋒，周黎黎，耿英華，等.淋巴瘤組織中B7-H4的表達及其臨床意義[J].中國實用內科雜志，2014，38（10）：1284-1290.

[17] 張利娟，土鳳瑋.彌漫大B細胞淋巴瘤的治療進展[J].中華臨床醫師雜志，2014，8（11）：2127-2132.

[18] 周揚，趙洪國，李廣倫，等.生發中心與非生發中心彌漫大B細胞淋巴瘤化療效果及影響因素分析[J].山東醫藥，2015，55（17）：75-77.

[19] 王輝，田波，魯常青，等.B7家族PD-L1和B7-H4的研究進展[J].細胞與分子免疫學雜志，2015，29（2）：216-217.

[20] Mei XU，Zhang B，Zhang M，et al.Clinical relevance of expression of B7-H1 and B7-H4 in ovarian cancer[J].Oncology Letters，2015，11（4）：2815-2819.

（收稿日期：2018-01-04）