IL-10基因多態(tài)性與漢族人群原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病率 病情及預(yù)后的關(guān)系

李 宏,童 燕,張耀東

(1.新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科 832000；2.湖北省黃崗市婦幼保健院檢驗(yàn)科 438000)

原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一種累及肝內(nèi)膽管系統(tǒng)的慢性進(jìn)展性疾病，多見于中年女性，肝臟組織的病理特點(diǎn)為進(jìn)展性的、非化膿性、破壞性小膽管炎[1]。PBC主要表現(xiàn)為乏力、皮膚瘙癢、膽汁性肝硬化。PBC患者的發(fā)生與多種基因表達(dá)有關(guān)。PBC病情危重可能誘發(fā)水、電解質(zhì)平衡紊亂、誘發(fā)消化道出血、肝性腦病等[2]。IL-10是機(jī)體重要的炎癥因子，IL-10參與體內(nèi)多種疾病的進(jìn)展，是由淋巴細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)體內(nèi)多種炎癥細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞遷移到炎癥局部造成并加重臟器損傷[3-4]。IL-10基因-1082A/A多態(tài)性與機(jī)體多種炎癥因子有關(guān)，本研究對比分析本院臨床資料，探討IL-10患者與患者PBC病情及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年5月至2015年5月在本院就診的480例PBC，診斷參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)指定的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合PBC的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡大于18歲；排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并惡性腫瘤、精神異常或其他認(rèn)知功能障礙的患者；(2)合并免疫缺陷性或其他影響患者血清IL-10水平檢測的患者；(3)合并其他慢性系統(tǒng)疾病包括高血壓、糖尿病等其他疾病的患者；480例患者中男240例、女240例，年齡(23.1±1.9)歲，BMI(23.1±1.9)kg/m2，所有患者均知情同意本研究，且本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并以同期480例健康體檢者作為對照組。

1.2方法 采取兩組患者血液標(biāo)本，使用Promega公司試劑盒及Eppendorf核酸定量儀測定白細(xì)胞中DNA水平，進(jìn)一步使用ABI7500型測序級擴(kuò)增儀擴(kuò)增IL-10基因-1082A/A的相應(yīng)基因片段，雙相測序法分析PCR產(chǎn)物。

1.3觀察指標(biāo) (1)病情評估：采用Child分級和MELD評分評價(jià)患者病情，具體參照文獻(xiàn)[5]；(2)檢測血清中IL-10和腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平：抽取外周血5 mL,TNF-α和IL-10試劑盒購于武漢博士德生物制劑有限公司，檢測方法參照試劑說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1觀察組和對照組IL-10基因-1082A/A基因型分布情況 觀察組患者IL-10基因-1082G/A基因型為A/A占47.5%，明顯高于對照組的14.2%，基因型為A/A的患者PBC的風(fēng)險(xiǎn)是C/C的2.8倍，基因型為A/C患者患PBC的風(fēng)險(xiǎn)是C/C的1.6倍，含A基因患者患PBC的風(fēng)險(xiǎn)為不含A基因的1.9倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組IL-10基因-1082A/A基因型分布情況[n(%)]

表2 不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α分泌的比較±s，ng/L)

a：P<0.05，與A/C比較；b:P<0.05，與C/C比較；c:P<0.05，與AnyA比較；d:P<0.05,與對照組比較

表3 不同基因型PBC患者血清中Child分級和MELD評分的比較±s，分)

a：P<0.05，與A/A比較；b:P<0.05，與A/C比較；c:P<0.05，與C/C比較；d:P<0.05,與AnyA比較

2.2不同基因型患者血清中IL-10和TNF-α表達(dá)水平比較 觀察組患者各基因型IL-10和TNF-α水平明顯高于對照組各基因型，觀察組患者基因型A/A患者IL-10和TNF-α水平分為(33.6±9.5)、(18.9±7.3)ng/L,明顯高于其他基因型和對照組各基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3不同基因型PBC患者Child分級和MELD評分的比較 A/A基因型患者Child評分和MELD評分分別為(8.6±1.8)分和(31.5±3.6)分明顯高于A/C、C/C、Any A基因型的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.4PBC患者死亡的多因素分析 將性別、年齡、肝功能、膽紅素水平、IL-10的基因型、血清中IL-10、TNF-α水平作為單因素，以患者死亡為終點(diǎn)事件，采用Logistic回歸模型分析提示：IL-10基因-1082A/A(P=0.01)、IL-10(P=0.02)、MELD評分(P=0.01)是PBC患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見表4。

表4 PBC患者死亡的多因素分析

3 討 論

PBC是一種慢性自身免疫系統(tǒng)疾病，常見于女性，以肝內(nèi)膽汁淤積為主要臨床特點(diǎn),可導(dǎo)致嚴(yán)重瘙癢、膽管炎等臨床表現(xiàn)，病情進(jìn)展為終末期肝病可誘發(fā)一系列并發(fā)癥包括消化道出血、肝性腦病等[5]。PBC患者體內(nèi)存在多種自身免疫性抗體，體內(nèi)多種自身免疫性抗體可導(dǎo)致機(jī)體肝臟損傷和其他臟器損傷，PBC病理進(jìn)展可最終誘發(fā)終末期肝臟疾病導(dǎo)致患者預(yù)后不良[6-7]。積極發(fā)現(xiàn)PBC患者病理生理機(jī)制，進(jìn)行早期臨床干預(yù)有助于改善PBC患者臨床預(yù)后。

IL-10是淋巴細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子，與機(jī)體炎性反應(yīng)程度和細(xì)胞免疫活化程度密切相關(guān)。IL-10可能通過活化中性粒細(xì)胞MYD88信號通路，刺激細(xì)胞內(nèi)NF-κB大量分泌，促進(jìn)膽管上皮細(xì)胞損傷，進(jìn)一步加重PBC患者的病情進(jìn)展[8-11]。而IL-10基因多態(tài)性可能參與PBC患者發(fā)病及患者病情的進(jìn)展，本研究探討IL-10基因多態(tài)性與PBC的關(guān)系，結(jié)果提示基因型A/A的患者PBC的發(fā)病率明顯更高，這可能是基因型為A/A的患者可以影響血清中IL-10的分泌進(jìn)而影響PBC病情的進(jìn)展，導(dǎo)致PBC的發(fā)生。基因型為A/A的患者可能刺激機(jī)體分大量的炎癥介質(zhì)，且可能對患者造成免疫炎癥損傷而誘發(fā)PBC。

血清中IL-10大量活化是導(dǎo)致PBC患者預(yù)后不良的重要因素，本研究對比不同基因型患者IL-10和TNF-α水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)基因型為A/A的患者體內(nèi)TNF-α和IL-10水平明顯更高，而TNF-α水平進(jìn)一步增高可導(dǎo)致患者體內(nèi)大量炎癥細(xì)胞活化進(jìn)一步損傷患者肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞[12-15]。這就意味著基因型為A/A的患者可能通過影響患者血清中炎癥介質(zhì)分泌，加重PBC的病理生理進(jìn)展。

MELD和Child評分是評價(jià)肝硬化病變程度的指標(biāo)，被廣泛運(yùn)用。本研究還對比了觀察組患者不同基因型PBC患者M(jìn)ELD和Child評分，結(jié)果提示血清中基因型為A/A的患者M(jìn)ELD和Child評分均明顯高于其他基因型患者(P<0.05)。這提示基因型為A/A可能通過調(diào)節(jié)患者病理機(jī)制刺激分泌炎癥因子，而影響患者病理進(jìn)程，加重局部肝臟組織的損傷。筆者進(jìn)一步采用Logistics回歸分析探討患者血清中IL-10基因多態(tài)性、TNF-α等因素與患者臨床預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果提示IL-10基因型為A/A、IL-10水平及MELD評分是患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這意味著機(jī)體炎癥因子分泌在PBC病情中具有重要的意義，可能與PBC病理機(jī)制密切相關(guān)。

綜上所述，PBC是自身免疫系統(tǒng)疾病，患者血清中IL-10基因多態(tài)性參與體內(nèi)多種炎癥因子的分泌和釋放，基因型為A/A可增加PBC發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，是患者死亡的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，值得臨床關(guān)注。