卵巢癌組織中泛素1的表達變化及其臨床意義

王靜，賀英，王萍，武欣

(1河北北方學院附屬第一醫院,河北張家口，075000；2河北北方學院病理教研室)

卵巢癌是婦女常見的致死性惡性腫瘤之一[1]，大多數患者就診時已為晚期，臨床治療和預后均不理想。早期診斷和早期治療是卵巢癌最有效的治療方法。泛素1屬于泛素樣蛋白一族，在調節蛋白質降解中起著重要作用。在真核生物中，泛素1連接蛋白酶體和泛素化蛋白質以刺激泛素化蛋白質降解，促進錯誤折疊的自噬調節[2]。泛素1功能的失活可誘導人類多種神經退行性疾病的病理過程，例如阿爾茨海默病和亨廷頓病等[3,4]。泛素1與鼻咽癌、非小細胞肺癌和胰腺癌的發生發展有關[5～7]，但泛素1在卵巢癌組織中的表達及作用尚未見相關報道。本研究觀察了卵巢癌組織中泛素1的表達變化，分析其表達水平與卵巢癌患者臨床病理參數的關系及與卵巢癌預后的相關性，為卵巢癌的診斷和預后預測提供分子生物學標記物。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 河北北方學院附屬第一醫院2012年1月～2015年1月收治的卵巢癌患者80例，均接受手術治療(術前未接受其他治療)，術中留取卵巢癌組織(自癌灶中心處獲取)和相應癌旁正常組織。80例患者術后定期復查、電話隨訪，末次隨訪時間為2017年12月31日，中位隨訪時間為25個月;隨訪期間24例生存，56例死亡。

1.2 受檢組織中泛素1的檢測 采用免疫組化法。鼠抗UBQLN1單克隆抗體(編號：128011)購于美國Abcam公司，免疫組化試劑盒、DAB顯色劑購于上海Gene Tech公司。受檢組織用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，染色，切片進行烘烤，乙醇脫水，內源性過氧化物酶滅活，高溫高壓水化修復，PBS沖洗，先后加入一抗(1∶100)50 μL、二抗50 μL。DAB顯色，輕度復染，沖洗，梯度乙醇脫水，松節油透明和樹膠行封片處理,光鏡下觀察。PBS代替一抗作陰性對照。泛素1主要表達于細胞質，少量表達于細胞核，呈棕黃色或褐色顆粒。計算泛素1陽性染色細胞百分比，陽性細胞1%～10%計1分、11%～50%計2分、51%～80%計3分、81%～100%計4分；細胞無著色計0分、淺黃色計1分、黃色計2分、深黃色計3分；上述兩分值相乘，乘積0為-、1～4為+、5～8為++、9～12為+++，+、++、+++定為陽性[5]。

1.3 卵巢癌組織中泛素1表達與卵巢癌患者臨床病理參數的關系分析 收集80例卵巢癌患者臨床病理資料，包括患者年齡、是否絕經、腫瘤分化程度、腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結轉移、血清CA125、血清HE4、Ki-67，分析卵巢癌組織中泛素1表達與上述指標的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗，相關性分析用Spearman秩相關分析法，通過Cox回歸模型分析卵巢癌患者預后的獨立影響因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 泛素1在卵巢癌組織與癌旁正常組織中的表達比較 泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達率為72.50%(58/80)，癌旁正常組織為17.50%(14/80)，兩者相比，P<0.01。卵巢癌組織和癌旁正常組織中泛素1的表達情況見圖1。

注：a為癌旁正常組織中泛素1的表達情況； b 為卵巢癌組織中中泛素1的表達情況。

圖1卵巢癌組織和癌旁正常組織中泛素1的表達(×200)

2.2 卵巢癌組織中泛素1表達與卵巢癌患者臨床病理參數的關系 卵巢癌組織中泛素1的陽性表達與卵巢癌患者腫瘤分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、CA125(+)、HE4(+)和Ki-67(+)有關(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤大小、是否絕經等無關(P均>0.05)，見表1。卵巢癌組織泛素1陽性表達的58例中Ki-67表達陽性者44例、陰性14例，泛素1陰性表達的22例中Ki-67陽性8例、陰性14例，兩者表達呈正相關，r=0.259，P<0.01。

2.3 卵巢癌組織泛素1表達與卵巢癌患者生存預后的關系 卵巢癌組織泛素1陽性表達的58例卵巢癌患者，12例生存、46例死亡，中位生存時間為22個月；泛素1陰性表達的22例患者中，10例生存、12例死亡，中位生存時間為30個月；兩者相比，P<0.05。

泛素1表達、淋巴結轉移、腫瘤分化程度、FIGO分期、CA125(+)、HE4(+)、Ki-67表達均是影響卵巢癌預后的獨立影響因素(P均<0.05)。

3 討論

泛素1是一種核小體表面蛋白，屬于高度保守的泛素樣蛋白家族中的重要成員，位于人9q22染色體，內含589個氨基酸序列，在人體組織中廣泛表達。泛素1由11個外顯子、3個功能結構域組成;其中N末端系泛素樣區域(介導與蛋白酶體的相互作用)，C末端系泛素相關區域,中間的STI伴侶樣區域負責傳遞功能，三者共同將多泛素化靶目標提供給特定的蛋白，促進蛋白酶體降解[8,9]。泛素1能通過促進錯誤折疊的自噬調節、誘導細胞凋亡和受體轉運等多種調控機制影響腫瘤細胞的遷移和侵襲等生物學行為[10～12]。Bao等[13]采用免疫組織化學法檢測179例胃癌及癌旁正常組織中的泛素1，發現其在胃癌組織中的表達上調，且泛素1高表達與胃癌組織學分級、浸潤、分期、淋巴結轉移密切相關，泛素1高表達的胃癌患者預后較差；Wang等[14]采用免疫組織化學檢測125例浸潤性乳腺癌樣本中的泛素1，發現其在癌組織中呈過表達，且其表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期和血管侵犯相關，泛素1陽性患者5年無病生存期和總生存期遠低于泛素1陰性患者，同時首次證實了泛素1是浸潤性乳腺癌患者總生存期的獨立預后因素。

表1 卵巢癌組織中泛素1表達與卵巢癌患者臨床病理參數的關系

本研究結果顯示，泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，且泛素1的陽性表達與卵巢癌分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、血清CA125(+)和HE4(+)有關，且泛素1與Ki-67表達呈正相關，二者在卵巢癌的發生、發展過程中可能具有協同作用。Shah等[15]通過實驗證實泛素1基因沉默能促進肺癌細胞遷移和浸潤，泛素1基因的缺失導致包括E-鈣黏蛋白和Claudin1在內的上皮標記物表達的降低，而包括波形蛋白、Snail和ZEB1在內的間充質標記物的表達升高，因而考慮泛素1能誘導肌動蛋白細胞骨架重組和上皮細胞間質轉變，從而促進腫瘤的侵襲和轉移[16]。

本研究結果顯示，泛素1陽性表達的卵巢癌患者生存期明顯短于陰性表達的患者，泛素1陽性表達提示預后不良，Cox回歸模型分析顯示泛素1陽性表達為卵巢癌患者預后的獨立影響因素。

綜上所述，泛素1在卵巢癌組織中的陽性表達率較高，與卵巢癌的臨床病理特征及預后關系密切，其在卵巢癌的發生、發展中可能發揮重要作用，臨床上可將其作為卵巢癌診斷和預后預測的潛在生物學指標。進一步對泛素1致癌機制的深入研究將為卵巢癌的靶向治療提供理論基礎。