子宮內膜癌組織中miRNA-373的表達變化及其臨床意義

譚飛非，徐紅， 李美儀， 何中慧

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530022)

微小核糖核酸即微小RNA(miRNA)，是廣泛存在于真核生物體內的、長度18～25 nt的單鏈非編碼內源性小分子RNA，通過與靶基因3′-UTR區完全或不完全互補結合而發揮其調節作用，是人類某些疾病(包括癌癥)發病的關鍵基因和調節因子[1]。miRNA表達譜分析表明，miRNA的異常表達與腫瘤的發生、發展密切相關，其扮演著促癌或抑癌作用，如miR-21在乳腺癌中扮演抑癌基因[2]，而在結直腸癌中扮演促癌基因作用[3]。多種miRNA在子宮內膜癌中的異常表達可以影響腫瘤的行為與進展，如miR-944在子宮內膜癌中表達上調，促進腫瘤的侵襲[4]，miR-302c在子宮內膜癌中表達下調而促進腫瘤的發生發展[5]。本研究采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測子宮內膜癌組織與癌旁正常組織中的miR-373，觀察其在子宮內膜癌組織中的表達變化，分析其表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系，并進一步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2016年9月～2017年12月在廣西醫科大學第一附屬醫院接受廣泛性子宮切除及盆腔淋巴結清掃術治療的子宮內膜癌患者30例(術前均未接受放化療)，手術治療時均留取癌組織，其中20例同時留取癌旁正常組織(癌旁2 cm以外)。留取的組織標本均在離體后立即用液氮浸沒降溫，置-80 ℃冰箱凍存，所有標本經術后病理檢查確診。

1.2 試劑與儀器 TRIzol試劑(大連Takara公司)，RNase-free water(大連Takara公司)，miRNAs逆轉錄試劑盒(大連Takara公司)，熒光定量PCR試劑盒(大連Takara公司)，RT-PCR、miRNA-373及U6引物(大連Takara公司)。NanoDrop2000紫外分光光度計，ABI 7500實時熒光定量PCR儀。

1.3 miR-373檢測方法 采用qRT-PCR。先用TRIzol試劑按其說明書提取受檢組織總RNA。用NanoDrop2000紫外分光光度計測定RNA濃度和純度，OD260/OD280為1.8～2.1。逆轉錄cDNA，RT反應:10 μL反應體系，37 ℃、1 h，85 ℃、5 min。qRT-PCR: 以U6作為內參；U6上游引物序列為5′-CGCTTCGGCAGCACATATAC-3′、下游引物序列為5′-AAATATGGAACGCTTCACGA-3′，miR-373上游引物序列為5′-TGCGCGAAGTGCTTCGATTTGG-3′、下游引物序列為5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′；以cDNA為模板，按試劑盒說明配置反應液，上樣于ABI 7500實時熒光定量PCR儀；95 ℃預變性30 s，95 ℃、5 s，60 ℃、34 s，共40個循環。miR-373相對表達量用2-ΔΔCt表示。

2 結果

子宮內膜癌組織及癌旁正常組織中miRNA-373的相對表達量分別為3.045±1.664、1.098±0.419，兩者相比，P<0.01。 miR-373在子宮內膜癌組織中的表達與患者的腫瘤臨床分期、組織分級、肌層浸潤、是否有淋巴結轉移等因素相關(P均<0.05)，與年齡及病理類型無關(P均>0.05)，詳見表1。

表1 子宮內膜癌組織中miR-373的表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系

3 討論

子宮內膜癌是婦科最常見三大惡性腫瘤之一，在我國子宮內膜癌的發病率位居婦科惡性腫瘤第2位，僅次于宮頸癌，近年來子宮內膜癌發病率呈逐年上升趨勢[6]。雖然治療子宮內膜癌的技術與方法在不斷發展，但對于晚期和復發的子宮內膜癌患者的治療效果仍欠佳。因此，進一步探索子宮內膜癌中具有特異性和敏感性的分子標志物是對子宮內膜癌進行早期診斷、改善治療效果的關鍵。

miRNA作為一類保守的非編碼RNA，在各種疾病的病理生理過程扮演基因管理角色，主要通過轉錄后水平參與調節眾多目標基因的表達[7, 8]。miRNA的表達失常在腫瘤中是一種常見現象，主要表現在表觀遺傳修飾、基因變異、生物起源改變及轉錄阻抑這四個主要機制的失調。表達失調的miRNA不僅影響腫瘤的發生進展，且關聯著腫瘤對其抗癌藥物耐藥性的產生[9]。miR-373作為miR-371-372-373家族的一員，主要位于染色體19q13.42上，在不同的腫瘤中，其表達情況不同，如miR-373在食管鱗狀細胞癌、宮頸癌中表達均顯著上調，促進其癌細胞的增殖和轉移，發揮促癌基因作用[10,11]。miR-373在乳腺癌中可通過TXNIP-HIF1α-TWIST信號軸而促進上皮間質細胞的過渡與轉移[12]。miR-373在卵巢癌中通過作用于Rab22a抑制卵巢癌的侵襲與轉移，在膀胱癌中通過增強鈣黏蛋白的表達而顯著抑制癌細胞的增殖與發展，發揮抑癌基因作用[13,14]。Hua等[15]研究發現，胰腺癌患者血清中miR-373 低表達與臨床預后不良顯著相關，且miR-373的表達水平與腫瘤分級、分期、遠處轉移密切相關。我們[16]的前期研究，通過構建miR-373-3p慢病毒載體成功轉染子宮內膜癌HEC-1A細胞，發現miR-373-3p明顯抑制HEC-1A細胞的增殖和遷移能力，故miR-373具有促進子宮內膜癌細胞的增殖、遷移的作用。

本研究結果顯示，miR-373在子宮內膜癌組織中的表達量明顯高于癌旁正常組織，與我們[16]的前期研究結果一致，表明miR-373在子宮內膜癌中發揮癌基因作用。另外本研究發現，子宮內膜癌組織中miR-373的表達隨子宮內膜癌惡性程度的增高及臨床分期的增加而呈上升趨勢，miR-373的表達在有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴及轉移者，相較于肌層浸潤<1/2者，在肌層浸潤≥1/2者中的miR-373的表達量明顯增加，提示miR-373可能與子宮內膜癌的浸潤與轉移有關。

綜上所述，子宮內膜癌組織中miR-373呈高表達，其表達量與子宮內膜癌惡性程度有關，可能成為子宮內膜癌惡性程度及轉移潛能的重要預測指標，并有可能成為子宮內膜癌的潛在治療靶點。但miR-373在子宮內膜癌中的具體作用機制、作用信號通路及靶基因還需要更全面、更深入探討。本實驗所取樣本例數較少，所取樣本時間較短，有關miR-373的表達情況對子宮內膜癌患者的生存及預后的影響不能做出完整闡述。后續研究還需擴大樣本量后進行追蹤隨訪。