宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p的表達觀察

楊勇莉，王曉武，韋靜，邵娜娜

(青海大學附屬醫院，西寧810001)

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，2011年有學者[1]報道全球每年有超過200,000例女性患宮頸癌，且鱗狀細胞癌是宮頸癌的主要類型。宮頸鱗狀細胞癌的早期發現及根治能夠有效防止復發[2]，但宮頸癌患者的術后5年總生存率低于50%[3]，預后較差。研究[4]表明，非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)能夠調控細胞凋亡、轉移等，參與宮頸鱗狀細胞癌的發生發展。微小RNA(miRNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNA)都屬于ncRNA[5]。miRNA是一種能夠通過結合其靶基因轉錄本的互補位點抑制翻譯從而調控基因表達的短小RNA[6]。miRNA在多種類型的癌癥，如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌中調控細胞的增殖、凋亡、分化[7～10]。宮頸癌中的miRNA可分為致癌因子或抗癌因子[11]。目前有關微小RNA-590-3p(miR-590-3p)在宮頸鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義的相關報道較少。研究[12]表明，lncRNA能夠與miRNA相互調節共同參與腫瘤的進展，并且lncRNA和miRNA之間的調節關系已成為目前的研究熱點。但是有關lncRNA 與miRNA在宮頸癌中表達的相關性及臨床意義研究報道較少。本研究觀察了宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表達變化，分析兩者表達的相關性，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年8月～2013年7月在青海大學附屬醫院接受子宮切除手術治療的宮頸鱗狀細胞癌患者69例。納入標準：①術前未接受化療、放療、內分泌治療等抗腫瘤治療；②術后經病理檢查證實為宮頸鱗狀細胞癌；③具備完整的病歷和隨訪資料。排除標準：①合并乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤；②合并嚴重肝、腎等重要器官功能不全。手術過程中切取癌組織及癌旁正常組織(距離癌組織>3 cm)。69例患者的年齡為29～68歲，其中<50歲者34例、≥50歲者35例；根據國際抗癌協會的TNM分期標準分為Ⅰ期+Ⅱ期46例、Ⅲ期+Ⅳ期23例；腫瘤分化程度為低分化27例、中分化22例、高分化20例；有淋巴結轉移者36例，無淋巴結轉移者33例；婦科人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染者43例，無HPV感染者26例；癌組織直徑<4 cm者30例、≥4 cm者39例。所有患者隨訪資料完整，以患者術后出院為隨訪觀察起始時間，隨訪方式包括電話、來院復診。末次隨訪時間為2017年8月，隨訪時間5～60個月。本研究獲得醫院倫理委員會批準，研究對象在知情同意書上簽字。

1.2 儀器與試劑 D-37520型低溫離心機和NanoDrop2000紫外微量光度計均購自Thermo公司,GT9612型普通梯度PCR儀購自Biotek公司,MX3005P實時熒光定量梯度 PCR 儀購自美國 Aglient公司。TRIzol購自Life公司，DEPC購自Sigma公司，逆轉錄試劑盒、SYBR Green Master Mix試劑盒均購自諾唯贊公司。

1.3 受檢組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p的檢測方法 分別取適量宮頸鱗狀細胞癌組織和癌旁組織，加入TRIzol提取總RNA，用分光光度計測量RNA的濃度。按照逆轉錄試劑盒說明書操作，將總RNA反轉錄為cDNA。根據SYBR Green Master Mix試劑盒說明書上的反應體系及反應程序，進行實時熒光定量PCR，檢測相關基因的表達。lncRNA HCG11、miR-590-3p的引物引物序列用Primer Premier5.0設計，以GAPDH基因作為內參。lncRNA HCG11正、反向引物分別為5′-GCTCTATGCCATCCTGCTT-3′、5′-TCCCATCTCCATCAACCC-3′；miR-590-3p正、反向引物分別為5′-TAATTTTATGTATAAGCTAGT-3′、5′-GCTGAGGTGCTGTGGT-3′；GAPDH正、反向引物分別為5′-TGGATTTGGACGCATTGGTC-3′、5′-TTTGCACTGGTACGTGTTGAT-3′。用2-ΔΔCt表示受檢組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p的相對表達量。

2 結果

2.1 宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表達量比較 宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中lncRNA HCG11的相對表達量分別為0.41±0.33、1.04±0.12，兩者相比，P<0.05。宮頸鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中miR-590-3p的相對表達量分別為14.6±5.94、1.06±0.23，兩者相比，P<0.05。宮頸鱗狀細胞癌組織中的lncRNA HCG11與miR-590-3p的表達量呈負相關(r=-0.597,P<0.01)。

2.2 宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p表達量與宮頸鱗狀細胞癌患者臨床病理參數的關系 宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表達量與腫瘤組織大小、有無淋巴結轉移以及臨床分期有關(P均<0.05)，與患者年齡、有無婦科HPV感染、分化程度無關(P均>0.05)，見表1。

表1 癌組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p表達量與宮頸鱗狀細胞癌患者臨床病理參數的關系

2.3 宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p表達量與宮頸鱗狀細胞癌患者預后的關系 以宮頸鱗狀細胞癌組織中lncRNA HCG11、miR-590-3p相對表達量的平均值為界，將宮頸鱗狀細胞癌患者分為lncRNA HCG11高表達組(32例)與lncRNA HCG11低表達組(37例)、miR-590-3p高表達組(36例)與miR-590-3p低表達組(33例)。lncRNA HCG11高表達組患者5年總生存率為87.5%(28/32)、低表達組為59.46%(22/37)，兩者相比，P<0.01。miR-590-3p高表達組患者5年總生存率為58.33%(21/36)、低表達組為81.82%(27/33)，兩者相比，P<0.01。

3 討論

miRNAs在各種人類癌癥的腫瘤發生中發揮重要作用[13, 14]。miRNA能夠結合下游mRNA，在轉錄水平調節mRNA的表達，使mRNA轉錄或降解[15]。miRNA包括癌基因和抑癌基因，參與細胞的增殖、凋亡、分化等過程[16]。miRNA參與多種癌癥的進展過程，可以作為治療癌癥的潛在靶分子。miR-590-3p是一種新發現的miRNA，能夠通過調節PTEN基因促進肝癌細胞的增殖[17]。Sun等[18]研究發現，miR-590-3p能促進結腸癌細胞的增殖和轉移。miR-590-3p在胰腺癌細胞中表達上調，miR-590-3p可能是維持胰腺癌干細胞特性的關鍵基因[19]。本研究發現，miR-590-3p在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達與癌旁組織相比上調，miR-590-3p在宮頸鱗狀細胞癌中的表達量與腫瘤組織大小、有無淋巴結轉移以及臨床分期相關。本研究還發現，miR-590-3p低表達組宮頸鱗狀細胞癌患者術后5年總生存率較高，可以作為預測宮頸癌預后的靶分子。

研究[20]表明，lncRNA的異常表達均與癌癥發生相關，在癌細胞的轉移及術后預后中發揮關鍵作用。通路富集分析顯示lncRNA HCG11主要參與MAPK信號通路、鈣信號通路、Jak-STAT信號通路、Wnt信號通路和GnRH信號通路[21]，在調控信號轉導、轉錄、細胞黏附、發育和蛋白質氨基酸磷酸化中起關鍵作用。有研究[22]報道lncRNA HCG11在多種腫瘤中表達失調并且能夠作為判斷某些腫瘤預后的潛在指標。Quagliata等[23]的研究發現，敲降lncRNA HCG11不僅抑制肝癌細胞的生長，而且抑制了癌細胞的轉移，驗證了lncRNA HCG11在肝癌進展中的關鍵作用。有研究[24]發現，肝癌組織中lncRNA HCG11表達上調，進一步研究發現lncRNA HCG11能夠調節線粒體凋亡，進而促進肝癌的發生。但Zhang等[21]的研究表明，在前列腺癌中lncRNA HCG11表達下調并且與患者預后不良有關。本研究發現lncRNA HCG11在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達顯著低于癌旁組織，lncRNA HCG11在宮頸鱗狀細胞癌患者中的表達量與腫瘤組織大小、有無淋巴結轉移以及臨床分期相關，lncRNA HCG11高表達組子宮頸鱗狀細胞癌患者術后5年總生存率較高，說明lncRNA HCG11表達量與患者預后呈正相關，可以作為宮頸鱗狀細胞癌預后判斷的靶分子。本研究還發現，lncRNA HCG11的表達量與miR-590-3p的呈負相關，即lncRNA HCG11高表達的宮頸鱗狀細胞癌組織中，miR-590-3p表達量明顯下調。由此推測，lncRNA通過海綿樣吸附作用，與miRNA發生競爭性結合，抑制miRNA的轉錄調控，即lncRNA HCG11可能通過在轉錄水平調控miR-590-3p的表達發揮抑癌作用[18]。

綜上所述，在宮頸鱗狀細胞癌組織中，lncRNA HCG11表達下調，而miR-590-3p表達上調；宮頸鱗狀細胞癌組織中的lncRNA HCG11低表達和miR-590-3p高表達預示腫瘤組織較大且處于較高臨床分期、淋巴結轉移可能性較大、患者預后較差。推測lncRNA HCG11與miR-590-3p有可能成為宮頸鱗狀細胞癌治療的靶標分子。