阿德福韋酯—羥丙基—β—環糊精包合物的研究

麻榮麗

摘 要：目的 將難溶性藥物阿德福韋酯制備成環糊精包合物，以增加體外溶出度。方法 以羥丙基-β-環糊精（ hydroxypropyl-β-cyclodextrin， HP-β-CD）包合材料為載體， 采用冷凍干燥法制備阿德福韋酯-HP-β-CD包合物，配合差示掃描量熱（differential scanning calorimetry，DSC）觀察藥物在載體中的存在狀態。結果 阿德福韋酯-HP-β-CD包合物，載體-藥物質量比不同，藥物的溶出度不同。結論 將阿德福韋酯經包合后能顯著增加阿德福韋酯的體外溶出度。

關鍵詞：阿德福韋酯；HP-β-CD包合物；差示掃描量熱法

阿德福韋酯（adefovir dipivoxil，ADV）為嘌呤類衍生物，是一類新型的開鏈核苷酸，ADV是阿德福韋的雙酯形式[1]，為阿德福韋的前體藥物，口服后可迅速水解為阿德福韋而發揮抗病毒作用。由于阿德福韋的磷酸酯基帶負電荷，阿德福韋口服后在腸內吸收不佳，因此開發了前藥-阿德福韋酯，以提高生物利用度。

采用環糊精包合技術，盡可能減少阿德福韋酯與空氣及水分的直接接觸，增加藥物的穩定性，提高藥物的溶出速率。為進一步提高阿德福韋酯的水溶性，擬選用溶解性好、熱穩定的羥丙基-β-環糊精（ hydroxypropyl-β-cyclodextrin， HP-β-CD）為包合材料，它是β-環糊精（β-cyclodextrin， β-CD）的羥烷基衍生物，在水中溶解度遠大于β-CD，能夠更顯著的增加難溶性藥物溶解度，是一種很有前途的藥物載體材料[2]。本章擬采用冷凍干燥法制備阿德福韋酯-HP-β-CD包合物并對其穩定性進行研究。

1 儀器與試藥

RC-12AD智能溶出試驗儀（天大天發科技有限公司），Lambda-25紫外-可見分光光度計（PE），DSC BLW-50差熱分析儀（日本Shimadzu公司）， XP205電子天平（METTLER TOLEDO）。

阿德福韋酯（某公司），阿德福韋酯膠囊（某公司），羥丙基-β-環糊精（石藥集團有限公司），無水乙醇（天津市博迪化工有限公司）。

2 方法與結果

2.1 阿德福韋酯包合物的制備

稱取阿德福韋酯原料藥3.0 g，加少量無水乙醇溶解。另稱取HP-β-CD 30.0 g，加水在60 ℃恒溫水浴中制成50 %飽和溶液。在電動攪拌下，將阿德福韋酯乙醇溶液緩緩加入到HP-β-CD飽和溶液中，恒溫攪拌1 h，停止加熱，繼續攪拌至室溫，得白色混懸液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，所得澄清溶液在-70℃冰箱中預凍12 h，置真空冷凍干燥機中凍干15 h， 干燥物粉碎，干燥處冷藏。

2.2 阿德福韋酯的測定

2.2.1 檢測波長的確定

取適量HP-β-CD配成200 mg·L-1的溶液（a）；取適量阿德福韋酯對照品，用鹽酸溶液（9→1000）配制成20 mg·L-1的溶液（b）。將a， b兩種溶液進行紫外掃描。HP-β-CD在阿德福韋酯的最大吸收波長259 nm處無吸收，因此對阿德福韋酯的測定無干擾。

2.2.2 標準曲線考查

配制一系列不同濃度的HP-β-CD 溶液（ 0， 6.7， 13.3， 33.3， 66.5， 133.1， 199.6， 266.1， 332.7， 399.2， 465.7 mmol·L-1 ），溶劑為去離子水。在上述系列溶液中加入過量的阿德福韋酯，密閉，超聲10 min，放入空氣浴振蕩器中于室溫下振蕩24 h。溶解達平衡后，取上清液通過0.45 μm微孔濾膜濾過測吸光度，代入標準曲線方程計算阿德福韋酯的濃度。以HP-β-CD濃度為橫坐標，阿德福韋酯濃度為縱坐標，繪制的相平衡溶解度圖。

將曲線開始的直線部分回歸，得到回歸方程y=3.02×10-1x+1.8×10-3， r=0.9996，根據回歸方程，按公式Kc = b/ （ a - ab），（ a為截矩， b為斜率） 計算表觀穩定常（ Kc） [3] 。25 ℃時阿德福韋酯在羥丙基-β-環糊精溶液中表觀穩定常數Kc=2.4×102L·mol-1。Kc是衡量包

合物穩定性的重要參數[4]，Kc越大，包合物越穩定。結果可知，50 %的HP-β-CD 溶液中含阿德福韋酯的量趨于飽和，即500 g·L-1的HP-β-CD 溶液中含阿德福韋酯50.43 g·L-1（約相當于m（阿德福韋酯）：m（HP-β-CD）=1 ： 10）

2.3 包合物的驗證

采用差示掃描量熱（ DSC ） 法。測定條件： 以空鋁坩為參考池，加熱速率為10℃·min-1，在30-350℃范圍內進行測定。DSC分析結果可看出，阿德福韋酯和HP-β-CD分別在102.19 ℃和336.54℃處有特征吸收峰，與兩者熔點基本一致。二者的物理混合物在對應的熔點處也有明顯的吸熱峰，包合物中阿德福韋酯和HP-β-CD各自的熔點峰已消失，而在265.96℃產生1個新的吸熱峰。

2.4 溶出度測定

2.4.1 溶出度測定方法

照溶出度測定法（《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0931第二法），以鹽酸溶液（9→1000）500 mL為溶劑，轉速為50 r·min-1，依法操作，分別于5、10、20、30、45 min定時定位取樣10 mL，用0.45 μm微孔濾膜快速濾過，棄去初濾液，同時補加10 mL溶劑，在波長259 nm處測定吸收度，計算藥物不同時間累積溶出質量濃度，制作累計時間-溶出度曲線。

2.4.2 阿德福韋酯-HP-β-CD包合物體外溶出度的測定

制備含有阿德福韋酯-HP-β-CD 包合物的膠囊，每粒含阿德福韋酯10 mg。在（40 ±2） oC、RH（75±5）%條件下放置6個月，觀察其穩定性。以45 min時阿德福韋酯累積溶出度為基準，固體分散體分別在第0、1、2、3、6 個月時進行考察。結果表明，市售阿德福韋酯膠囊溶出度嚴重不合格，阿德福韋酯-HP-β-CD 包合物的膠囊溶出度明顯增大，可見制備的包合物具有增加阿德福韋酯體外溶出度的作用。

3 結論

本實驗中，作者以HP-β-CD為載體，以冷凍干燥法制備了阿德福韋酯環糊精包合物。考察了相對濕度RH75 % 40 oC放置6個月固體分散體對溶出度的改善及載體-藥物質量比對溶出度的影響，配合DSC分析觀察考察了藥物在載體中的存在狀態。溶出實驗結果表明：阿德福韋酯-HP-β-CD中阿德福韋酯與載體為1：10，相對濕度RH75 %40 oC放置6個月HP-β-CD對溶出度改善明顯。

參考文獻

[1]CULLEN J M， LI D H， BROWN C，et al. Antiviral efficacy and pharmacokineties of oral adefovir dipivoxil in chronically woodchuck hepatitis virus-infected woodchucks[J]. Antimicrob Agents Chemother， 2001， 45：2740-2745.

[2]丁平田， 吳雪梅. 藥物制劑的新型輔料2-羥丙基-β-環糊精 [J]. 國外醫藥-合成藥制劑生化分冊， 1996， 17 （2） ： 107-111

[3]H IGUCH I T， CONNORS K. Phase-solubility teclmiques [J]. Adv Anal Ctwm Lnstrum， 1965， 4 ： 117-212

[4]施潔明，何仲貴， 劉曉紅， 等. 2-羥丙基-β-環糊精對桂利嗪的增溶作用[J].中國新藥雜志， 2004， 13 （3） ： 233-235