VEGF和MMP-7在膽管癌組織中的表達及其與預后的關系

買二輝 李四橋 雷霆 戶平安 査中明 張樹交

(洛陽市中心醫院肝膽胰脾外科，河南 洛陽 471009)

膽管癌是臨床上較少見的惡性腫瘤之一，起源于膽管上皮細胞，其病因可能與原發性硬化性膽管炎、膽管結石等疾病有關，手術治療、放射治療、化學治療等是目前臨床上治療膽管癌的方法。由于其起病隱匿、易發生侵襲轉移、發病機制尚未完全清楚等，嚴重威脅著患者的生命。大量臨床研究表明，對膽管癌患者予以早期診斷和有效治療對提高其預后生存率具有重要的臨床意義[1]。血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)又稱血管通透因子，是最重要的血管內皮誘導因子，其表達與惡性腫瘤的發生發展、侵襲轉移有著密切的聯系。基質金屬蛋白酶-7(Matrix metalloproteinase-7，MMP-7)是基質金屬蛋白酶家族中最小的成員，可降解如纖維連接蛋白、層黏連蛋白、彈性蛋白等各種細胞外基質成分，其多態性與多種惡性腫瘤如小細胞肺癌、卵巢癌等的易感性具有一定的相關性。有學者指出，VEGF和MMP-7的檢測對膽管癌的早期診斷、有效治療具有一定的臨床價值，但學術界對于VEGF和MMP-7表達與膽管癌預后之間的關系的研究報道較為少見[2]。因此，本文選取本院2010年5月至2012年8月手術切除膽管癌組織標本35例及非膽管癌組織標本30例為研究對象，以此探討VEGF和MMP-7在膽管癌組織中的表達及其預后的關系，為提高其臨床診治水平提供參考依據，具體內容報道如下。

1 臨床資料與方法

1.1 研究對象

選取本院2010年5月至2012年8月手術切除膽管癌組織標本35例為觀察組。其中男性19例，女性16例，年齡45～75歲，平均年齡46.3±12.32。納入標準：(1)所有患者術前均未放化療；(2)均經過病理組織學檢查確診；(3)患者及患者家屬對本次研究均知情并簽署同意書。排除標準：(1)合并心、肝、腎等重要臟器損傷者；(2)凝血功能障礙者；(3)自愿退出本次研究者。另選取同期手術切除非膽管癌組織標本(癌旁膽管組織)30例為對照組，其中男性17例，女性13例，年齡45～76歲，平均年齡47.5±14.32。兩組患者在性別、年齡等一般臨床資料方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

通過查閱住院記錄、各種輔助檢查單，隨訪記錄等病案資料，收集入選膽管癌患者的臨床和隨訪資料，使用統一調查表摘錄相關內容，主要包括基本資料、手術病理分期、腫瘤大小、淋巴結轉移等。

1.3 隨訪方式

經電話隨訪或門診復查等方式進行隨訪，收集資料。隨訪周期為術后1年內每3個月1次，3年內6個月1次，5年內9個月1次，之后每1年1次。隨訪至患者死亡或2017年8月1日為止，入選患者隨訪率為100%。

1.4 指標檢測

所有標本經10%甲醛固定24h以上，常規石蠟包埋，室溫保存，分別做蘇木精-伊紅染色法(HE)及免疫組化染色。免疫組化采用SP法，試劑盒來源于上海研卉生物科技有限公司，檢測過程嚴格按照說明書進行操作。根據陽性細胞所占百分比，陽性細胞<5%為陰性，陽性細胞率5～25%為弱陽性，陽性細胞率26～50%為陽性，陽性細胞率>50%為強陽性，VEGF、MMP-7強陽性、陽性、弱陽性均定性為陽性。

1.5 統計分析

所有實驗數據采用SPSS18.0軟件進行數據處理，計數資料采用率和構成比等相對數進行描述，采用χ2檢驗，計量資料采用平均數±標準差(X±SD)進行描述，采用t檢驗。P<0.05表示差異間具有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF和MMP-7在膽管癌組織及非膽管癌組織中的表達

觀察組VEGF和MMP-7的陽性表達率分別為68.57%、71.43%，對照組VEGF和MMP-7的陽性表達率分別為23.33%、36.67%，觀察組中VEGF和MMP-7的陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 VEGF和MMP-7在膽管癌組織

注：與對照組相比，**P<0.01，***P<0.001。

2.2 VEGF和MMP-7的表達與膽管癌臨床病理特征的關系

觀察組VEGF以及MMP-7的陽性表達均與患者性別、年齡、腫瘤大小無關，與分化程度及腫瘤的淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表2。

2.3 VEGF和MMP-7表達與膽管癌預后的關系

膽管癌患者術后5年總體生存率為22.86%(8/35)，VEGF和MMP-7的表達均與生存期<5年相關(P<0.05)，見表3。

表2 VEGF和MMP-7表達與膽管癌臨床病理特征的關系(例)

注：與高分化相比，aP<0.05；與中分化相比，bP<0.05；與有淋巴結轉移相比，*P<0.05，**P<0.05。

表3 VEGF和MMP-7表達與膽管癌預后的關系(例(%))

注：與生存時間<5相比，*P<0.01，**P<0.01。

3 討論

一直以來，惡性腫瘤對人們的身體健康造成了嚴重的威脅，關于腫瘤方面的研究也是學界的熱點。膽管癌是一種罕見惡性腫瘤，易發生侵襲轉移，手術切除全部腫瘤是唯一有效的治療方法[3]。但是膽管癌起病隱匿，不能及時發現病情變化，確診時已經進入進展期，并且解剖部位復雜又特殊，徹底切除全部腫瘤的可能性不大，預后較差。因此，尋找有效的檢測指標對膽管癌的早期診斷、治療及預后評估具有重要的臨床意義。

近年來，隨著分子生物學技術不斷發展，分子與基因水平檢測作為了腫瘤的診斷與治療的一種手段[4]。有相關研究報道，VEGF和MMP-7表達與膽管癌的發生發展、侵襲轉移預后有著密切的關系[5]。其中VEGF是一種糖蛋白，廣泛分布于人和動物體內組織中，由不同的腫瘤細胞分泌，也可表達于正常細胞及組織，是刺激血管內皮增殖最重要的因子之一，具有較強誘導腫瘤血管形成的作用[6]。MMP-7是一種分泌型蛋白，是基質金屬蛋白酶家族中最小的成員，其基質降解活性強大和底物特異性廣泛，主要表達于腫瘤細胞或腫瘤浸潤邊緣的間質中，在腫瘤的發生和發展中起到重要的作用[7]。本研究結果發現，觀察組VEGF和MMP-7的陽性表達率明顯高于對照組；且VEGF以及MMP-7的陽性表達均與患者性別、年齡、腫瘤大小無關，而與分化程度及腫瘤的淋巴結轉移有關；這些結果與梁晶等研究結果相似[8]。提示若采取有效的手段干預或抑制VEGF和MMP-7可有效緩解膽管癌患者的病情，從而提高患者的生活質量。本研究結果還發現，膽管癌患者的VEGF和MMP-7表達水平均與生存期<5年有關，提示VEGF和MMP-7高表達的膽管癌患者生存時間較短，有助于臨床醫師對膽管癌預后的評估。

綜上所述，膽囊癌組織中VEGF和MMP-7的陽性率和表達強度均高于非膽管癌組織，VEGF和MMP-7表達均與膽管癌的分化程度、淋巴結轉移關系密切，是影響膽管癌預后的重要因素。因此，膽管癌治療的靶點是保護基底膜的完整性和抑制腫瘤淋巴管的生成。