康炎凈顆粒對大鼠長期毒性試驗(yàn)研究

孟 莉，向紹杰，喬 敏，宋達(dá)夫，張 宏，賈天柱

0 引言

慢性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥。在患者體質(zhì)較差的情況下，急性盆腔炎的病程可遷延及反復(fù)發(fā)作，造成慢性盆腔炎；但是亦可無急性盆腔炎癥病史過程，如沙眼衣原體感染所致輸卵管炎。慢性盆腔炎病情較頑固，可導(dǎo)致月經(jīng)紊亂、白帶增多、腰腹疼痛及不孕等，嚴(yán)重影響患者的正常生活。近年來，中藥在治療此病上取得了較好的進(jìn)展。康炎凈顆粒具有清利濕熱、化瘀散結(jié)的功效，臨床用于治療慢性盆腔炎，取得較好的療效。前期實(shí)驗(yàn)研究表明[1]，康炎凈顆粒具有抑菌、抗炎、活血化瘀、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，對大鼠進(jìn)行了長期毒性實(shí)驗(yàn)研究，為其臨床安全應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 康炎凈顆粒浸膏，由沈陽藥科大學(xué)提供，批號：0701010，每毫升浸膏含4.272 g生藥。用蒸餾水配成所需濃度后供試驗(yàn)用。

1.2 動物 Wistar大鼠，160只，雌性，體重70～90 g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK(吉)2003-0001。

1.3 試劑 血細(xì)胞分析儀用稀釋液(批號：071027)、血細(xì)胞分析儀用溶血劑(批號：20070919，上海東湖儀器試劑科技有限責(zé)任公司)。尿素氮(BUN)試劑盒(批號：20070626)、堿性磷酸酶試劑盒(批號：20070928)、總膽固醇試劑盒(批號：20070817)、血糖試劑盒(批號：20070813)、血清總膽紅素測定通用試劑盒(批號：20070716)、肌酸磷酸激酶試劑盒(批號：20071214)、白蛋白試劑盒(批號：20070518)、總蛋白試劑盒(批號：20070518，桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司)。肌酐液體試劑(批號：H097，北京豪邁生化有限公司)。鉀試劑盒(批號：70417C211)、鈉試劑盒(批號：70514B211，北京利德曼公司)。凝血四項(xiàng)試劑盒(批號：20070927，北京世帝公司)。

1.4 儀器 日本光電MEK-6318K血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，意大利Eos Bravo Plus全自動生化分析儀，北京世帝四通道血凝儀。

1.5 方法

1.5.1 分組與給藥[2-4]取雌性Wistar大鼠160只，體重70～90 g，按體重隨機(jī)分成4組，空白對照組(對照組)、康炎凈顆粒低劑量組(低劑量組，9.69 g/kg)、康炎凈顆粒中劑量組(中劑量組，28.77 g/kg)和康炎凈顆粒高劑量組(高劑量組，85.44 g/kg)，每組40只。大鼠每日按20 ml/kg的容積灌胃給藥，空白對照組給予等容積蒸餾水。每周稱1次體重和攝食量，并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量，試驗(yàn)期間每周給藥6 d，連續(xù)6個月。

1.5.2 指標(biāo)檢測[5-6]試驗(yàn)期間每日觀察受試大鼠的行為體征、外觀形態(tài)及藥物可能產(chǎn)生的不良反應(yīng)等。試驗(yàn)進(jìn)行到3個月末時，每組取14只受試大鼠禁食不禁水18 h，麻醉取血，檢測血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)。取血后系統(tǒng)尸解，取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、子宮、卵巢、腦等主要臟器，稱濕重，計(jì)算臟器指數(shù)，并對上述器官及胃、腸、淋巴結(jié)、胰腺、乳腺、頜下腺、坐骨神經(jīng)、骨髓、脊髓、膀胱、氣管、食管、主動脈等進(jìn)行組織學(xué)檢查。其余大鼠繼續(xù)給藥觀察3個月，6個月末時，每組取14只受試大鼠做上述同樣項(xiàng)目檢查。余下每組12只受試大鼠，停藥恢復(fù)性觀察4周，進(jìn)行上述同樣項(xiàng)目檢查。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般狀況 連續(xù)給藥6個月，除高劑量組于給藥第12周和第22周各有1只大鼠死亡，15周時有1只大鼠瀕臨死亡提前處死外，其余各組大鼠被毛光澤、反應(yīng)機(jī)敏，口周、鼻及尾部黏膜無破潰，活動正常，攝食、飲水、大小便均未見異常，亦未發(fā)現(xiàn)因藥物中毒引起的受試動物死亡或其他毒副反應(yīng)發(fā)生。

2.2 大鼠體重、攝食量測定結(jié)果 給藥期間，高劑量組大鼠從給藥第1周開始，體重、攝食量明顯低于對照組(P<0.05)，其余各給藥組大鼠體重、攝食量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。恢復(fù)期，高劑量組體重明顯低于對照組，其余各給藥組大鼠體重、攝食量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1、圖2。

圖1 康炎凈顆粒對大鼠體重的影響

2.3 大鼠血液學(xué)測定結(jié)果 給藥3個月后，高劑量組大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比率、平均血細(xì)胞容積、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率明顯高于對照組(P<0.05)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積明顯低于對照組(P<0.05)。

圖2 康炎凈顆粒對大鼠攝食量的影響

給藥6個月后，高劑量組大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積低于對照組(P<0.05)，平均血細(xì)胞容積、平均血紅蛋白含量和網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率高于對照組(P<0.05)。停藥4周后，高劑量組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積低于對照組(P<0.05)，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.4 大鼠血液生化學(xué)測定結(jié)果 給藥3個月后，高劑量組大鼠血清尿素氮、血清鉀高于對照組(P<

0.05)，肌酐低于對照組(P<0.05)。給藥6個月后，高劑量組大鼠血清肌酸激酶低于對照組(P<0.05)。停藥4周后，各劑量組血液生化學(xué)指標(biāo)與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.5 大鼠臟器指數(shù)測定結(jié)果 給藥3個月后，高劑量組大鼠肝、脾、腎、腎上腺臟器指數(shù)高于對照組(P<0.05)。給藥6個月后，高劑量組大鼠肝、脾、腎臟器指數(shù)高于對照組(P<0.05)。停藥4周，高劑量組肝、脾、腎臟器指數(shù)高于對照組(P<0.05)。見表3。

2.6 大鼠主要組織形態(tài)學(xué)改變 實(shí)驗(yàn)中期、末期、恢復(fù)期大鼠病理組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果表明，對照組動物各臟器組織均無異常組織學(xué)改變，高劑量組動物各臟器組織均無藥物所致異常組織學(xué)改變，提示康炎凈顆粒對大鼠主要臟器無明顯損害和毒性反應(yīng)。

表1 康炎凈顆粒對大鼠血液學(xué)的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

表2 康炎凈顆粒對血液生化學(xué)的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 結(jié)論

長期毒性試驗(yàn)是觀察評價動物反復(fù)給予受試物后，機(jī)體產(chǎn)生毒性反應(yīng)的特征及其毒性損害的嚴(yán)重程度，以及主要毒性靶器官及其損害的可逆性，其目的是提供受試物的無毒性反應(yīng)劑量和主要臨床檢測指標(biāo)，為制定人用安全劑量提供參考資料[1]。本文對康炎凈顆粒進(jìn)行了長期毒性研究，結(jié)果表明，試驗(yàn)中期時，高劑量組大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積明顯低于對照組，平均血細(xì)胞容積、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率明顯高于對照組；尿素氮、血清鉀明顯高于對照組，肝、脾、腎、腎上腺臟器指數(shù)明顯高于對照組。試驗(yàn)結(jié)束時，高劑量組大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積明顯低于對照組，平均血細(xì)胞容積、平均血紅蛋白含量和網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率明顯高于對照組；肝、脾、腎臟器指數(shù)明顯高于對照組。停藥4周后，高劑量組血液學(xué)指標(biāo)中紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積明顯低于對照組，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率明顯高于對照組，肝、脾、腎臟器指數(shù)明顯高于對照組。推測康炎凈顆粒高劑量可能對紅系細(xì)胞有損害作用，停藥4周不足以恢復(fù)其對紅細(xì)胞的損傷。在給藥期間及恢復(fù)期，康炎凈顆粒低、中劑量組大鼠體重、攝食量、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)及臟器指數(shù)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示康炎凈顆粒大鼠灌胃給藥安全劑量為28.77 g/kg以下，約為臨床成人擬用量的22.27倍(成人按60 kg體重計(jì))。

表3 康炎凈顆粒對主要臟器指數(shù)的影響

注：與對照組比較，*P<0.05