孕婦O型血中抗A、抗B效價檢測的方法學研究

朱文剛

(阜陽市人民醫院南區 輸血科，安徽 阜陽236011)

人類血型至今已知有36種，ABO血型系統在臨床輸血及致新生兒溶血病實驗中意義最為重要，其中孕婦為O型，不規則抗體陰性，配偶為非O型常常需要檢測抗A、B效價，因為孕婦體內抗A、B IgG型抗體效價過高(大于256)會通過胎盤屏障與胎兒(非O型)紅細胞結合、致敏而發生新生兒溶血病[1，2]。因此，常通過檢測孕婦血漿中抗A、B效價來評估新生兒溶血病發生的可能性[3]。目前用2-Me處理標本常達不到實驗要求，為了更好地檢測抗體效價的真實水平和提高檢出率，我們利用IgM冷凝集的特性，在4℃用標準A、B紅細胞吸附O型孕婦血漿中的IgM抗體與2-Me處理樣本進行比較，并統計分析兩者的檢出率。

1 材料與方法

1.1研究對象收集2014年12月-2017年5月門診孕檢孕婦O型全血樣本842份，中位年齡 28 歲(17-45)歲。

1.2主要試劑與儀器微柱凝膠抗人球蛋白卡、微柱凝膠蛋白卡專用離心機(長春博訊生物技術有限公司)，標準A、B紅細胞、抗篩譜細胞、2-Me(上海血液生物醫藥有限責任公司)，離心機(武漢貝索生物有限公司)，S.HH.W型數字顯示式恒溫水溫箱(上海東榮豐科學儀器有限公司)。

1.3用微柱凝膠抗人球蛋白卡進行檢測操作步驟

1.3.12-Me處理血漿 將2-Me與被檢測血漿各400 μl按1∶1比例加入標記的試管中，在37℃下溫育30 min處理，用生理鹽水按照1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048倍比稀釋，將稀釋好的各管分別按順序加入對應標記的抗人球蛋白卡中，最后將A、B紅細胞懸液(0.8-1.0)%加入對應的抗人球蛋白卡中，溫育15 min，離心5 min，觀察、記錄結果。

1.3.24℃紅細胞吸附處理血漿 分別取標本血漿400 μl置于標記“A”“B”2支試管中，并置于4℃溫箱中1 h，將(3.0-5.0)%A、B紅細胞懸液，并置于4℃溫箱中1 h，將紅細胞懸液各400 μl分別加入相應的加入血清的標記試管中，3 000轉/min，離心15 s，取上清液400微升加入第二管，觀察凝集強度。依次處理到第十管(1∶2048)，其間每管觀察結果，直至無肉眼可見的凝集。最后用抗人球蛋白卡檢測，觀察結果。

1.3.3分別取標本血漿400 μl置于標記“A”“B”2支試管中，并置于37℃溫箱中1 h，將(3.0-5.0)%A、B紅細胞懸液，并置于37℃溫箱中1 h，將標準紅細胞懸液各400 μl分別加入相應的加入血清的標記試管中，3000轉/min，離心15 s，取上清液400 μl加入第二管，觀察凝集強度。依次處理到第十管(1∶2048)，其間每管觀察結果，直至無肉眼可見的凝集。最后用抗人球蛋白卡檢測，觀察結果。

1.3.4結果判定 以一個加號(+)作為判斷終點，以稀釋倍數的倒數作為最終數值。

1.4統計方法采用Graphpad Prism5統計軟件，率的檢驗用χ2檢驗，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1孕檢門診842例樣本中經2-Me處理符合檢測標準的595例，用4℃紅細胞吸附方法處理后亦可檢出相應的抗A，B效價，247例不符合實驗要求的標本用4℃紅細胞吸附方法處理，效價檢測結果全部高于參考值(256)，所以這類標本IgG抗體效價高于參考值(>256)。

2.2本研究比較了2-Me破壞IgM與4℃ A，B紅細胞吸附IgM在不同效價組別的檢出率，效價在≥32以上兩種方法的檢出率存在明顯差異(表1)。

2.3本研究2-Me處理樣本和4℃吸附處理樣本對比 若以2-Me處理標本組的256做為參考值，4℃吸附處理標本組可以128做為參考值；或仍以2-Me處理標本組的256做為參考值，用4℃吸附處理標本，相應結果增加相應效價組別稀釋梯度(表2)。

3 討論

近年來，隨著人們對健康及優生優育的意識不斷加強，產科門診孕婦數量不斷增加。對于孕婦血型為O(不規則抗體陰性)配偶非O型，產科門診要求檢測抗A、B效價以評估孕婦體內抗體IgG水平，從而間接預測ABO血型系統致新生兒溶血病的可能性[4，5]，但是往往由于IgM的存在干擾檢測結果，不能反映孕婦血清中抗A、B效價[6]，在臨床中經常需要對于效價過高或效價逐漸增高的孕婦在孕期內進行干預，從而預防或減少新生兒溶血病的發生[7]。

表1 不同方法處理樣本在不同效價組別的檢出率比較

表2 4℃吸附處理樣本較2-Me增加的稀釋梯度數

目前檢測IgG抗A、抗B效價時，通常用2-Me滅活IgM抗體，在實際實驗過程中，2-Me滅活IgM抗體時一部分標本無法達到實驗要求且2-Me對人體有危害、污染環境[8，9]。近期研究發現在4℃或37℃條件下，用標準A(B)紅細胞(3.0%-5.0%)吸附血漿中的IgM可達到實驗目的，但在37℃紅細胞吸附過程中，由于溫抗體效應，不僅吸收了IgM抗體，也吸附了IgG抗體，所以37℃處理標本對IgG類型抗體影響較大[10]。我們結果顯示若以2-Me處理標本的效價256做為參考值，通過對比4℃用標準紅細胞處理標本參考值可為128；或仍以256做為參考值，相應的組別增加相應的稀釋梯度。

我們對2-Me處理后達不到實驗要求的樣本用4℃紅細胞懸液吸附處理后IgG效價仍高于參考值(256)，說明這一類標本中不僅IgM含量高，IgG抗體含量也高，因此2-Me處理后樣本IgG效價檢測結果容易出現假陰性，而在4℃通過A、B紅細胞(3.0%-5.0%)吸附可明顯提高檢測陽性率，可更好地反映孕婦血清中IgG效價的真實水平，以減少新生兒溶血癥的發生。