孢子絲菌病患者外周血Th1與Th17比例與疾病關(guān)系

陳 鳳，孫銘徽，閆百靈,周明偉*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科，吉林 長春130033；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 急診內(nèi)科)

孢子絲菌病是由孢子絲菌復(fù)合體引起的人和其它哺乳動物的皮膚、皮下組織、黏膜和局部淋巴管的急性或慢性炎癥，偶可播散至全身引起系統(tǒng)性損害[1]。固定型與皮膚淋巴管型是最常見的類型。細胞免疫被認為是機體抵抗真菌感染的主要方式。典型的效應(yīng)細胞為Th1，Th2以及Th17細胞[1]。本研究通過檢測孢子絲菌病患者外周血中的Th1,Th2以及Th17細胞亞群在淋巴細胞中的比例，觀察其與疾病的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1病例資料收集吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科2014年9月至2017年3月就診的患者。患者納入標準：(1)根據(jù)患者主訴，典型的皮損改變，組織培養(yǎng)出典型的孢子絲菌，形態(tài)轉(zhuǎn)換實驗陽性，病理表現(xiàn)為化膿性肉芽腫性反應(yīng)，明確診斷為孢子絲菌病患者；(2)病程超過3個月。患者排除標準：(1)合并有其他疾病患者，比如嚴重感染，免疫抑制性疾病，肝、腎功能不全的患者或者其他疾病；(2)應(yīng)用抗真菌藥物治療的患者；(3)2個月內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑的患者；(4)最近3個月內(nèi)罹患其它疾病的患者。根據(jù)孢子絲菌病患者臨床表現(xiàn)，分為固定型與皮膚淋巴管型(未見播散型與皮膚外型)；根據(jù)患者發(fā)病至就診時間，孢子絲菌病患者分為亞急性期(病程小于6個月)以及慢性期(病程超過6個月)。

根據(jù)患者性別、年齡，為患者匹配健康對照組43例，對照組為中日聯(lián)誼醫(yī)院健康體檢中心體檢者。所有對照組的體征與生化檢查均無異常。所有對照組均無孢子絲菌病感染史。共納入96名患者，男 66人，女30人，年齡62.14±7.94歲；其中淋巴管型患者40人，男29人，女11人，年齡61.46±8.37歲；固定型患者56人，男35人，女21人，年齡62.62±6.78歲；無播散型患者及皮膚外孢子絲菌病患者。根據(jù)患者病程，亞急性組(病程3-6個月)患者63人，男43人，女20人，年齡63.24±6.81歲；慢性組(病程≥6個月)患者33人，男22人，女11人，年齡60.04±10.4歲；健康對照組共43名。 病例組與健康對照組在年齡分布(P=0.86)、性別(P=1.0)構(gòu)成上無明顯差異。固定型孢子絲菌病患者與皮膚淋巴管型患者在年齡分布(P=0.46)、性別(P=0.38)構(gòu)成上無明顯差異。亞急性組與慢性組在年齡分布(P=0.07)、性別(P=1.0)構(gòu)成上無明顯差異。見表1。

1.2樣本收集用肝素鈉抗凝管收集5-10 ml外周血，所有的血液均于收集24小時內(nèi)在東北師范大學(xué)生命科學(xué)院進行流式細胞術(shù)檢測各細胞亞群比例。

1.3流式細胞檢測流式細胞檢測中用到的抗體有:FITC-anti-IL-4,PE-anti-IL-17,PP-anti- CD4,PE-Cy7-anti-IFN-γ以及APC-anti-CD3；檢測Th1，Th2與Th17亞群在淋巴細胞中的比例。Th1分子標記：CD3+CD4+IFN-γ+cells,Th2分子標記：CD3+CD4+IL-4+cells,Th17分子標記：CD3+CD4+IL-17+cells。所有熒光抗體與同型對照抗體均購自BD Biosciences 和 eBioscience公司。所有樣品通過Flowjo軟件分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 20.0軟件分析處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用χ2統(tǒng)計；計量數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差表示，以t檢驗分析。P<0.05 認為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

病例組外周血中Th1型細胞亞群的比例較健康對照組明顯下降(P=0.004),固定型孢子絲菌病患者與淋巴管型孢子絲菌病患者相比Th1細胞亞群的比例明顯上升(P=0.04)。亞急性組與慢性組相比，Th1型細胞亞群比例明顯升高(P=0.0003)。患者組與健康對照組之間，固定型與皮膚淋巴管型患者之間，急性期與慢性期患者之間，Th2細胞亞群占淋巴細胞的比例均無明顯改變。病例組外周血中Th17型細胞亞群的比例較健康對照組明顯下降(P=0.002),固定型孢子絲菌病患者與淋巴管型孢子絲菌病患者相比，Th17細胞亞群的比例明顯上升(P=0.04)。亞急性組與慢性組相比，Th17型細胞亞群比例明顯升高(P=0.002)。見表1。

表1 病人一般情況及Th1、Th2、Th17在外周血中統(tǒng)計分析

3 討論

孢子絲菌病是一種世界范圍內(nèi)散發(fā)的深部真菌病，在部分地區(qū)可以小范圍流行[2]。Th1、Th2以及Th17型細胞免疫反應(yīng)在抵抗真菌中的作用已有很多研究，但大部分研究是在小鼠體內(nèi)或體外進行[3]，本研究中，我們利用流式細胞儀檢測孢子絲菌病患者外周血中各亞群的比例變化。

孢子絲菌病患者體內(nèi)Th1與Th17細胞亞群在外周血中的比例較健康對照組明顯下降。樹突狀細胞能夠提呈孢子絲菌相關(guān)抗原，誘導(dǎo)Th1/Th17分化[4]。Th17細胞在小鼠抵抗孢子絲菌感染時起著重要作用[5]。本研究中，孢子絲菌病患者體內(nèi)外周血中Th1和Th17細胞亞群的比例較正常對照組明顯下降，且病程越長，比例下降越明顯。推測外周血中Th1/Th17比例下降的原因為，由于感染的持續(xù)存在，隨著疾病時間的延長，出現(xiàn)T細胞耗竭，從而出現(xiàn)外周血中相應(yīng)細胞亞群的下降[6]。

患者臨床癥狀越重，Th1和Th17 細胞亞群的比例越低。患者的臨床分型(固定型與皮膚淋巴管型)與機體的免疫狀態(tài)有關(guān)，機體對感染菌的免疫功能決定了感染侵入的嚴重程度[7]。 固定型孢子絲菌病患者的免疫功能相對平衡，感染更容易控制，對感染鄰近部位的損傷較小[6]。而播散型孢子絲菌患者的免疫功能多數(shù)受到抑制，因此，有人提出，固定型孢子絲菌病的發(fā)生反應(yīng)了機體對孢子絲菌有較強的抵抗能力，可以在感染的早期迅速將病原體局限[8]。

病例組與健康對照組，以及病例組內(nèi)各亞群之間，Th2型細胞亞群的比例均沒有變化。考慮Th2型免疫反應(yīng)可能在機體抵抗孢子絲菌的免疫過程中不起重要作用，這與之前的報道是一致的[9]。

因此，我們推測Th1和Th17細胞亞群的比例變化是判定疾病嚴重程度與病程長短的重要指標。較低的Th1和Th17細胞亞群一般伴有相對嚴重的臨床表現(xiàn)與更長的病程。更重要的是，我們的研究結(jié)果為孢子絲菌病的治療提供了一個新的方向，抗真菌藥物治療聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)治療可能較單純應(yīng)用抗真菌藥物治療更加有效。