結(jié)腸癌FOLFOX輔助化療方案對組織中TS、P53表達(dá)的影響

李宗山，李忠輝，張晉冀

(1.遷西縣人民醫(yī)院 外二科，河北 遷西064300；2.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤外科)

結(jié)腸癌作為胃腸道常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率占胃腸道腫瘤的第3位。由于結(jié)腸癌早期癥狀并不明顯，確診時(shí)大部分患者已進(jìn)入結(jié)腸癌中晚期，嚴(yán)重威脅生命健康和生活質(zhì)量[1,2]。結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制涉及多種因素，所以在目前治療方案也在不斷完善并呈現(xiàn)個(gè)體化現(xiàn)象。FOLFOX方案是目前治療結(jié)腸癌術(shù)后化療的常用方案，其他還有XELOX、CapOX、生物靶向治療以及單藥輔助化療等方案。本研究在對選取的64例結(jié)腸癌患者進(jìn)行化療前后體內(nèi)的TS及P53表達(dá)的檢測、研究，進(jìn)一步探討化療期間體內(nèi)腫瘤相關(guān)表達(dá)物的變化意義。

1 材料與方法

1.1一般資料

選取2015年1月至2017年3月間在我院行結(jié)腸癌根治術(shù)患者64例,其中男性38例，女性26例，年齡33-69歲，中位年齡45歲，術(shù)前均常規(guī)檢查，均無其他病癥，手術(shù)統(tǒng)一采用結(jié)腸癌根治術(shù)，術(shù)后待切口基本愈合，進(jìn)食普食，無相關(guān)并發(fā)癥，患者基本情況良好后化療。術(shù)后病理診斷為Ⅱ、Ⅲ期結(jié)腸癌。患者基本情況見表1。

1.2方法

檢測64名患者在輔助化療前體內(nèi)TS及P53表達(dá)情況，選用S-P免疫組化試劑盒，采購自福建邁新公司，TS、P53抗體(稀釋比例：1∶100)采購自Santa Cruz生物公司。按照使用說明檢測TS及P53表達(dá)情況并記錄數(shù)值。對患者同意進(jìn)行FOLFOX4輔助化療方案(奧沙利鉑130 mg/m2，靜脈滴注，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，靜脈滴注，d1-d2；5-氟尿嘧啶，靜脈推注，d1-d2；5-氟尿嘧啶600 mg/m2，靜脈持續(xù)滴注，d1-d2)。每2周為1個(gè)療程。在進(jìn)行到第3療程后，再次以同樣方式檢測患者體內(nèi)TS、P53表達(dá)變化情況并同樣記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.3免疫組織化學(xué)染色的判定

由于TS及P53免疫組化染色著色部位位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，其陽性染色呈現(xiàn)的棕黃色沉著顆粒。

表1 實(shí)驗(yàn)對象臨床構(gòu)成情況

故在光鏡(400倍視野)下計(jì)算1000個(gè)腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)。規(guī)定為不表達(dá)或陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性；視野中陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為染色陽性。細(xì)胞染色計(jì)算及判定均由2名未參加本研究的病理科專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立操作，結(jié)果不一致時(shí)由2人協(xié)商決定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0對本研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對輔助化療前后腫瘤分子標(biāo)記物TS、P53在表達(dá)水平上的變化情況，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。規(guī)定檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

輔助化療前患者TS表達(dá)陰性24例，陽性40例，而經(jīng)3周期化療后表達(dá)陰性36例，陽性28例，比較輔助化療前后TS表達(dá)變化數(shù)據(jù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。P53的表達(dá)在化療前陰性27例，陽性37例，而經(jīng)3周期化療后表達(dá)陰性41例，陽性23例，比較輔助化療前后P53表達(dá)變化數(shù)據(jù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 NAC前后P53表達(dá)變化情況

注：該組數(shù)據(jù)表明：TS和P53表達(dá)水平在NAC前后發(fā)生變化，表明NAC對TS和P53表達(dá)水平具有影響。

3 討論

在歷經(jīng)多年對于結(jié)腸癌輔助化療的研究和探索后，目前相關(guān)報(bào)道輔助化療可顯著改善臨床Ⅱ、Ⅲ期患者預(yù)后，結(jié)腸癌患者的3年無病生存率由從前單純手術(shù)治療的44%-52%提高至接受輔助化療后的70%-75%。其中1990年Moertel等人[3]首次提出氟尿嘧啶/左旋咪唑應(yīng)用1年能夠顯著提高Ⅲ期結(jié)腸癌患者無病生存期(DFS)和總生存期(OS)。但對不同病情患者使用相同化療方案是否正確目前仍存在異議。ASCO認(rèn)為對于那些出現(xiàn)腸梗阻、腸穿孔、腫瘤分化程度低、浸潤程度較嚴(yán)重以及出現(xiàn)某器官血管癌栓的患者可以考慮進(jìn)行輔助化療，采用FOLFOX方案，但這種情況下患者長期無病生存獲益低于5%，并且輔助化療會帶來一系列毒副反應(yīng)，反而降低了患者的生活質(zhì)量[4]。

TS是胸苷酸合成的限速酶， TS在DNA合成與修復(fù)、細(xì)胞增殖與分化中有十分重要的作用,也是腫瘤化療藥5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤等重要靶酶。5-氟尿嘧啶進(jìn)入體內(nèi)后被活化成氟尿嘧啶脫氧核苷酸(FdUMP)，F(xiàn)dUMP替代dUMP與TS及CH2FH4形成不易解離的三聯(lián)復(fù)合物從而抑制TS不能合成dTMP，也就不能合成腫瘤細(xì)胞DNA，從而發(fā)揮抗腫瘤的藥理生物學(xué)效果。Temmink等人[5]挑選了對5-氟尿嘧啶繼發(fā)性耐藥的人類結(jié)腸癌細(xì)胞株H630-RI、H630-R10和H630-R與其父系H630細(xì)胞株進(jìn)行比對試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)各耐藥細(xì)胞株對5-氟尿嘧啶耐藥性明顯增加，說明TS表達(dá)水平的增加導(dǎo)致腫瘤組織對5-氟尿嘧啶敏感性降低，TS的過度陽性表達(dá)增加機(jī)體對5-氟尿嘧啶的耐藥風(fēng)險(xiǎn)。

P53是一種腫瘤抑制基因。在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現(xiàn)該基因的突變。Muller等人研究發(fā)現(xiàn)[6]若P53基因突變后，由于其空間構(gòu)象發(fā)生改變，失去了對細(xì)胞生長、凋亡和DNA 修復(fù)的調(diào)控作用，P53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗?，并引起蛋白水平過度表達(dá)。P53與腫瘤相關(guān)性的研究一直是醫(yī)學(xué)界熱點(diǎn)，對于P53表達(dá)水平與結(jié)腸癌輔助化療效果的研究目前較為一致，日本學(xué)者Yamaguchi等人研究發(fā)現(xiàn)[7]在100例結(jié)腸癌患者中，P53表達(dá)陽性患者的復(fù)發(fā)率明顯高于其陰性表達(dá)者(23.8% vs 5.9%，P<0.05)，并且2年生存率明顯低于陰性表達(dá)者(61.8% vs 96.7%，P<0.05)。而Zaanan等人[8]對診斷為Ⅲ期的結(jié)腸癌患者接受FOLFOX化療方案的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)P53表達(dá)能預(yù)測奧沙利鉑在該類患者治療中的療效。

綜上所述，本研究對于在結(jié)腸癌患者輔助化療前后檢測體內(nèi)TS、P53的表達(dá)情況，經(jīng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算后發(fā)現(xiàn)TS、P53表達(dá)水平發(fā)生明顯變化，其前后表達(dá)變化數(shù)值均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在輔助化療后患者體內(nèi)TS、P53發(fā)生變化，而其陽性表達(dá)水平的增高不單單會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥產(chǎn)生，影響近期治療效果，更重要的是此類改變會導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)率升高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和生存時(shí)間。所以，在化療中期檢測患者體內(nèi)TS、P53的表達(dá)情況，適時(shí)、適當(dāng)?shù)恼{(diào)整化療方案。