骨肉瘤中cyclinD1和p53蛋白的表達及其意義

宇洪浩,原 泉,王 歡,安春厚,林新宏

(中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院 第二骨科脊柱外科，遼寧 沈陽110004)

骨肉瘤是原發(fā)惡性骨腫瘤，青少年多見，男性略多于女性，臨床表現(xiàn)為疼痛、腫塊、功能障礙、病理性骨折、貧血等，多采取手術(shù)切除結(jié)合放化療治療，但復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均較高，預后差，死亡率高[1]，早期診斷及治療具有重要意義。骨肉瘤發(fā)生機制可能與多種基因同時改變有關(guān)，cyclinD1蛋白能夠調(diào)節(jié)細胞周期，p53蛋白調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，抑制細胞增殖，兩種蛋白在骨肉瘤細胞增殖、遷移過程中發(fā)揮著積極的不可替代的作用。本文采用免疫組化法檢測血清cyclinD1與p53表達水平，分析其與骨肉瘤病理相關(guān)性，以便指導臨床診斷，改善患者預后。

1 資料與方法

1.1臨床資料選擇2017年5月-10月來我院治療的48例為脊柱骨肉瘤患者作為觀察組，所有患者術(shù)前未進行任何治療，男27例，女21例；年齡36-67歲，平均(55.29±6.14)歲，骨肉瘤均經(jīng)病理證實。選擇同期手術(shù)切除脊柱骨樣瘤組織的患者48例作為對照組，其中男26例，女22例，年齡38-66歲，平均(54.39±7.25)歲。 骨樣瘤組織均經(jīng)術(shù)后病理證實。

1.2方法生理鹽水清洗標本組織，用錫箔紙包裹，在液氮中冷凍10 min，再裝入EP管中，保存-70℃。兔抗人cyclinD1多克隆抗體由北京萬域美瀾科技有限公司生產(chǎn)，鼠抗人p53單克隆抗體由武漢華美生物工程有限公司生產(chǎn)，SP試劑盒由上海嶸崴達實業(yè)有限公司生產(chǎn)。 按試劑盒說明書操作。

1.3結(jié)果判定[3]由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片。p53陽性表達為棕黃色顆粒，在細胞核和細胞漿聚集。CyclinD1陽性表達為棕褐色顆粒，細胞核內(nèi)聚集。染色陽性細胞比例評分:0%-5%計為0分，6%-25% 計為1分，26%-50%計為2分，51%-75% 計為3分，大于75%計為4分；將“+”、“++”、“+++”均視為陽性，根據(jù)相加總分進行結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1表達水平比較觀察組cyclinD1陽性率高于對照組(83.33%vs16.67%)，p53蛋白陽性率低于對照組(31.25%vs68.75%)(P均<0.05)。見表1。

2.2表達水平與病理相關(guān)性骨肉瘤組織中cyclinD1呈高表達，p53呈低表達，二者均具有相關(guān)性(P<0.05)。見表2。

表1 兩組患者組織中cyclinD1、p53表達量比較%]

表2 cyclinD1、p53蛋白表達與骨肉瘤相關(guān)性%]

3 討論

CyclinD1是一類蛋白家族，調(diào)節(jié)細胞周期，其表達水平可隨細胞周期變化，參與干細胞的自我更新，促進細胞周期的進程，能夠與基因特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)多種基因表達，同時還能促進細胞的增殖[4]，對細胞發(fā)生突變、異常增殖及浸潤轉(zhuǎn)移具有重要意義[5]。CyclinD是G1期的主要調(diào)控蛋白，在G1期其數(shù)量恒定，cyclinD1的過量表達導致G1期縮短，同時細胞對血清的需求減少，促癌基因被激活，抑癌基因失活，導致癌細胞增殖增加、凋亡減少，從而導致惡性病變并進一步進展，目前已被確定為原癌基因[6]，檢測到在乳腺癌、食管癌、肝細胞癌、胃腸癌、甲狀旁腺癌等組織內(nèi)均有cyclinD1的過度表達[7]。其過度表達使抑癌基因Rb的功能失活，對細胞周期的負性調(diào)節(jié)失控，細胞無節(jié)制性生長。在骨肉瘤中cyclinD1出現(xiàn)高表達提示其與骨肉瘤細胞的過度增殖密切相關(guān)，G1期cyclinD1的去調(diào)控與骨肉瘤的形成和發(fā)生有關(guān)[8]，表達越高預后越差。p53蛋白能夠修復DNA，保證DNA穩(wěn)定遺傳；調(diào)節(jié)細胞周期，抑制細胞增殖；調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與癌細胞的衰老、凋亡。p53蛋白調(diào)控靶細胞，這類非侵入性相關(guān)基因起到抑癌基因的作用，p53蛋白水平升高，DNA細胞在G1期阻滯不前，不能繼續(xù)生長，故p53具有抑制細胞異常增殖、促進細胞凋亡的作用，p53水平降低，促進了細胞突變、異常增殖，促進骨肉瘤的發(fā)生[9]。提示血清中存在腫瘤特異性cyclinD1和p53兩種蛋白，可檢測二者的表達水平，作為骨肉瘤的診斷指標，指導臨床治療。

本研究發(fā)現(xiàn)觀察組cyclinD1蛋白表達水平明顯增高，p53明顯降低，這表明二者參與了癌細胞的分裂、生長和遷移，導致癌細胞無限制的增殖，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子，抑制基因的轉(zhuǎn)錄[10]，增強細胞運動能力，造成骨肉瘤細胞浸潤性生長，引起癌細胞向淋巴、血液等遠處侵襲，并向細胞間質(zhì)外轉(zhuǎn)移[11]。研究還發(fā)現(xiàn)骨肉瘤與cyclin D1高表達及p53低表達具有相關(guān)性，提示二者在骨肉瘤細胞的生成、增殖、侵襲有促進作用，高表達的cyclin D1在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中起著不可缺少的調(diào)控作用，提示檢測cyclinD1及p53蛋白可做為高風險腫瘤的標志物，有效評估患者的預后，二者聯(lián)合可提高檢出率。