新兵HIV抗體篩查酶聯(lián)免疫法和金標法的比較

李鵬宇，采 云，郗 科

艾滋病(AIDS)，又稱獲得性免疫缺陷綜合征，主要是由艾滋病病毒(HIV)攻擊人體免疫系統(tǒng)而引起的[1]。近年來，我國艾滋病流行趨勢正處于上升階段，對部隊選取健康兵員，保證戰(zhàn)斗力提出了嚴峻的考驗。為此部隊投入了大量的人力物力來對新兵進行健康復檢工作，艾滋病的篩查就是其中非常重要的一項內容。實驗室診斷HIV感染的常規(guī)手段是檢測HIV抗體，以往經(jīng)典的檢測方法是酶聯(lián)免疫法，隨著技術的發(fā)展，金標法也逐漸被醫(yī)院和體檢中心等機構應用于HIV抗體篩查工作中。筆者對兩種方法檢測HIV抗體的結果進行比較分析，以為新兵復檢工作提供可靠的檢驗方法。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇武警某部2017年度新兵共9325例為檢測者，其中男9275例，女50例，年齡18～21歲，平均為18.9歲，檢測時間為2017年9—10月。收集檢測者3～5 ml靜脈血樣本，離心分離出血清備用。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 選用北京金豪公司的ELISA-雙抗原夾心法試劑，儀器為 Anthos2010型酶標儀，全自動洗板機，進口10～200 μl規(guī)格的微量移液器，37 ℃水浴恒溫箱。金標法采用廈門英科新創(chuàng)公司的HIV抗體膠體金免疫層析快速診斷試劑。

1.2.2 檢測方法 (1)酶聯(lián)免疫法：嚴格按照試劑盒中的操作規(guī)程進行檢測，使用酶標儀對樣品的吸光度(A)值進行測量，并和所用試劑的臨界值(CUT OFF)進行對比，使用比較得出的S/CO值對檢測結果進行判斷,所測定的A 值高于CO值則判斷為陽性[2]。陽性標本排除溶血、血清分離不完全等干擾因素，單獨進行復測，并采用手工洗板，判定標準不變。(2)金標法嚴格按照說明書來進行檢測和判斷結果，初篩陽性結果同樣排除干擾因素進行復測，標本不合格的重新抽血進行檢測。用兩種方法分別對9325份標本進行檢測，測試人員有操作經(jīng)驗并相對固定，試劑批號為同一批號。兩種方法復測后的陽性標本送上級確證實驗室進行結果確認。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

1.4 結果 酶聯(lián)免疫法初篩首次陽性標本為18例，出現(xiàn)假陽性原因分別為洗板機清洗不徹底8例，嚴重溶血5例，血清分離不完全2例。初篩陽性標本排除干擾因素(重新抽血、離心徹底、手工洗板)在使用相同試劑的情況下進行復檢，初篩陽性率0.032%；金標法首次初篩檢測出陽性標本10例，初篩陽性率0.096%。兩種方法的篩查陽性率比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。由表1可以看出，酶聯(lián)免疫法的初篩陽性率較高，排除干擾后假陽性率為0.021%(2/9325)，金標法假陽性率為0.086%(8/9325)，兩種方法對比，酶聯(lián)免疫法假陽性率較低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 9325例新兵酶聯(lián)免疫法和金標法HIV抗體篩查結果 (n; %)

注：與金標法相比，①P<0.05

2 討 論

新兵是一個特殊的群體，具有年輕，身體健康狀況普遍良好的特點，因此新兵的HIV抗體篩查既要保證檢測質量、避免漏檢，又要減少經(jīng)濟消耗，選擇高效、高質量的篩查手段尤為關鍵。

金標法在進行HIV抗體檢測時，具有敏感性高、快捷、方便等優(yōu)點，不需要特殊的儀器設備，所以衛(wèi)生隊(所)的衛(wèi)生員經(jīng)簡單培訓就能熟練掌握，適用于平時小批量的標本或遠離體系醫(yī)院的偏遠地區(qū)使用。不過金標法也具有特異性低、假陽性率高等缺點[3]。新兵入伍集訓人員較集中，檢測量較大，這就對檢測方法的特異性和經(jīng)濟性提出較高的要求，因此金標法不太適用于新兵的HIV抗體集中篩查。

酶聯(lián)免疫法的特異性及敏感性都相對金標法要高，且試劑成本低，可以批量操作，通量較大，因此是新兵HIV抗體篩查的首選方法。本實驗中我們選用的ELISA試劑為HIV三代試劑盒，主要檢測HIV(1+2)抗體。近年來，隨著HIV檢測技術的提高，ELISA方法的HIV四代試劑正逐漸取代HIV三代試劑，它能在同一個檢測系統(tǒng)同時檢測HIV(1+2)抗體與P24抗原[4]。HIV感染機體后，自身各種抗原隨著感染時間的延長而先后出現(xiàn)，其中P24抗原為早期感染的檢測指標。P24抗原是HIV的核心蛋白，主要特點在于急性感染的開始階段其滴度相當高，而且其出現(xiàn)早于特異性抗體[5]。比較第三代試劑，第四代試劑可以大大縮短窗口期，檢測時間提前了8～10 d。P24抗原檢測用于HIV感染的早期檢測和HIV新近感染的檢測都具有積極的意義[6,7]。酶聯(lián)免疫法也存在局限性，比如操作相對復雜，干擾因素多，需要各種儀器設備，且要求操作人員具有一定的專業(yè)技能等[8]。

針對上述問題，我們總結出幾點處理措施：(1)制訂完整的操作規(guī)范，認真對待工作中的每一個細節(jié)，保證高效率地完成檢測工作；(2)選擇靈敏度高、特異性好的三代乃至四代試劑，從而避免由于檢測中所用試劑的原因造成假陽性結果和窗口期漏檢的發(fā)生；(3)先期對工作人員進行培訓，以保證采集血液樣本的合格率，標本處理流程的科學性，完善試驗條件的同一性，最大限度地提高實驗準確率、減少假陽性率。