氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑增加骨密度作用的研究

郁樺 石根勇 朱勤

【摘要】目的：對氨基葡萄糖硫酸鹽、硫酸軟骨素、維生素D3及碳酸鈣等為主要成分的氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑增加骨密度的功效進行驗證，方法：每天經(jīng)口給予大鼠含有0. 3g/kg. bw、0.6g/kg. bw、1.8g/kg. bw氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑（相當于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍）的飼料90天，同時設一個低鈣對照組（150mg/lOOg飼料）和一個碳酸鈣對照組（與高劑量鈣水平相同的碳酸鈣對照組）。測定大鼠的股骨骨密度、鈣含量及鈣的表觀吸收率；觀察大鼠的生長發(fā)育情況。結果：高劑量組動物實驗末的身長顯著高于低鈣對照組（p<0.05）；高劑量組動物股骨中心及遠心端骨密度、股骨鈣含量、總鈣量顯著高于低鈣對照組（p<0.05）；中計量組和高劑量組大鼠攝入鈣、糞鈣和尿鈣含量顯著高于低鈣對照組，鈣的表觀吸收率和存留率顯著低于低鈣對照組，差異具有顯著性（p<0.05）。高劑量組實驗大鼠的以上各項指標與相應的碳酸鈣對照組比較差異沒有顯著性（p>0.05）。結論：根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》增加骨密度功能檢驗方法的判定標準；氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑具有增加骨密度功能。

【關鍵詞】保健食品 骨密度氨基葡萄糖硫酸軟骨素

【中圖分類號】R9

【文獻標識碼】A

【文章編號】2096-5249（ 2018） 03-023-02

骨質疏松癥是一種由多種原因引起骨量減少和骨組織觀念顯微結構退行性改變?yōu)樘卣?，骨脆性增加、易發(fā)骨折的一種全身代謝性骨病。增加骨密度功能食品是市場需求較大的保健食品，其中以鈣劑輔以氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、維生素D3配方較多見，維生素D3具有促進鈣吸收的作用。氨基葡萄糖是一種氨基單糖，是形成所有結締組織包括軟骨基質葡糖胺聚糖的基本成分[1-2]。硫酸軟骨素是存在于人和動物結締組織中的酸性黏多糖，主要分布于軟骨、骨、肌鍵、肌膜和血管壁中，因具有多種生物活性而得到廣泛應用。硫酸軟骨素能夠預防和改善骨關節(jié)病，對受損的軟骨組織進行修復[3]，本實驗為了驗證其增加骨密度的作用，旨在為補鈣類產(chǎn)品配方評價提供思路，現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料和方法：

1.1 受試物：

氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑，推薦量為60mg/kg.bw，本產(chǎn)品鈣攝人量約460mg/d，氨基葡萄糖硫酸鹽攝入量約800mg/d，硫酸軟骨素攝入量約630mg/d，維生素D3攝人量約6.75μg/d，受試物是以補鈣為主，按照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）增加骨密度功能檢驗方法方案一的檢驗方法設計實驗。

1.2 劑量設計：本實驗設低、中、高三個劑量組，劑量分別為0.3g/kg.bw、0.6g/kg.bw、1.8g/kg.bw，相當于人體推薦量的5、10、30倍，另設一個低鈣對照（ 150mg/lOOg飼料）和一個碳酸鈣對照組，該組與高劑量組鈣含量相同。

1.3 受試物配制：將受試物摻入低鈣飼料中喂養(yǎng)，低鈣基礎飼料配方按《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》推薦方法，飼料攝入量按體重的8%折算。按0.38%、0.75%和2.25%比例，分別將受試物摻人低鈣飼料中制成低、中、高劑量組受試物。另在低鈣飼料的基礎上摻人0.74%碳酸鈣，制成碳酸鈣對照組飼料。

1.4 給予受試物：將摻入不同劑量受試樣品的低鈣飼料分別給予各劑量組大鼠自由攝食，飲用去離子水。

1.5 實驗動物及動物實驗室：SPF級雌性SD健康大鼠，體重70.4±2.7g，由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務部提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2009-0012，飼料由北京綠恒泉營養(yǎng)保健食品技術開發(fā)有限公司提供；動物房為屏障環(huán)境，動物使用許可證號：SYXK（湘）2010-0010，環(huán)境溫度22-24℃，濕度50-56%。

1.6 主要儀器與設備：骨礦物測定儀（SD-1000℃）。

2.方法

2.1 試驗方法：大鼠檢疫3天后，將50只大鼠按體重隨機分成5組，分別為受試物低、中、高三個劑量組，低鈣對照組和碳酸鈣對照組，每組10只，單籠飼養(yǎng)，連續(xù)喂養(yǎng)90天。

2.2 觀察指標

2.2.1 體重：每周稱重一次。

2.2.2 股骨重量測定

大鼠喂養(yǎng)90天后處死，剝離出右側股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，稱量骨干重。

2.2.3 股骨骨密度測定

用骨礦物測定儀測量左側股骨骨中點及遠心端的骨密度。

2.2.4 骨鈣含量及飼料含鈣量測定

用原子吸收法測定。

2.2.5 鈣吸收實驗

2.2.5.1 生長發(fā)育

大鼠從單籠給予受試物始至4周，每周測量身長、稱重1次。

2.2.5.2 代謝實驗

實驗3周后進行3天鈣代謝實驗，記錄3天進食量，收集72小時糞便，用原子吸收法測定飼料及糞便中鈣含量。

攝入鈣（mg/天）=飼料中鈣含量（mg/g）×飼料消耗量（g厭）

糞鈣（mg/天）=糞便中鈣含量（mg/g）×糞便非出量（g/天）

鈣的表觀消化率（%）=（攝入鈣一糞鈣）/攝入鈣×100%

2.3 統(tǒng)計處理

數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進行方差分析，按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊計算F值，F(xiàn)值（F0.05，結論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行研究適當?shù)淖兞哭D換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行研究統(tǒng)計。

3 結果

3.1 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對大鼠體重的影響（見表1）。實驗前各組大鼠的起始體重差異沒有顯著性（P>0.05）；實驗末各劑量組大鼠的體重和體重增加值與低鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量實驗組大鼠的終體重及其凈增加值與碳酸鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.2 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對大鼠身長的影響（見表2）。實驗前各組大鼠的起始身長差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量組大鼠實驗末的身長顯著高于低鈣對照組（P<0.05）；高劑量組實驗末大鼠的終身長及其凈增加值與碳酸鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.3 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對大鼠股骨長度和骨密度的影響（見表3）。實驗前各組大鼠的起始股骨長度差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量組大鼠實驗末的股骨遠心端骨密度、股骨中心骨密度顯著高于低鈣對照組（P<0.05）；高劑量組實驗末大鼠的股骨遠心端骨密度、股骨中心骨密度與碳酸鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.4 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對大鼠股骨長度和骨密度的影響（見表4）。實驗前各組大鼠的起始股骨長度差異沒有顯著性（P>0.05）；碳酸鈣對照組大鼠實驗末的股骨總鈣量顯著高于低鈣對照組（P<0.05）。高劑量組大鼠實驗末的股骨鈣含量、總鈣量顯著高于低鈣對照組（P<0.05）；商劑量組實驗末大鼠的股骨重量、股骨鈣含量及總鈣量與相應的碳酸鈣對照組相比沒有顯著性差異與碳酸鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.5 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對大鼠攝入鈣、糞鈣、尿鈣的影響（見表5）。中高劑量組、碳酸鈣對照組大鼠攝入鈣、糞鈣及尿鈣含量顯著高于低鈣對照組（P<0.05）；高劑量實驗組大鼠的攝入鈣、糞鈣和尿鈣含量與相應的碳酸鈣對照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.6 氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑對鈣表觀吸收率和鈣存留率的影響（見表6）。中、高劑量組、碳酸鈣對照組大鼠鈣的表觀吸收率及鈣的存留率與相應碳酸鈣對照組相比沒有顯著性差異（P>0.05）。

4.討論

氨基葡萄糖硫酸鹽復合制劑按其推薦劑量，鈣攝入量約460mg/d，氨基葡萄糖硫酸鹽攝人量約800mg/d，硫酸軟骨素攝入量約630mg/d，維生素D3攝入量約6.75μg/d，對于改善骨質疏、增加骨密度，效果顯著。高劑量組大鼠股骨中點及遠心端骨密度高于低鈣對照組（P<0.05），且與碳酸鈣對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》評價標準，可以認定該產(chǎn)品具有增加骨密度作用。

參考文獻：

【1】劉茵，顏耀東，張娟等.氨基葡萄糖，硫酸軟骨素與膠原蛋白治療骨關節(jié)炎的研究工作進展[J].慢性病學雜志：2013 ，14（12）：919-921.

【2】王亞，陳彥，戛樹開等硫酸軟骨素制備工藝的純化[J].中國生化藥物雜志，2006，27（1）： 12-14.

【3】魏慶宏硫酸軟骨抑制實驗性骨關節(jié)炎軟骨細胞凋亡的體內研究[J].中國生化藥物雜志，2016，5（36）：47-50.