Th17細(xì)胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達(dá)量檢測對慢性乙型肝炎患者病情評估的價值分析

徐開菊 周巧靈 楊仁國（通訊作者）

（四川省人民醫(yī)院 四川 成都 610072）

臨床上，慢性乙型肝炎十分常見，屬于慢性傳染性疾病的一種，主要治療方式為抗病毒治療[1-2]。慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）中提示，若僅采用抗病毒療法對患者進(jìn)行治療，便難以獲得明顯的治療效果，會導(dǎo)致多數(shù)患者病情遷延，最終發(fā)展成為肝硬化[3]。據(jù)最新研究可知，慢性乙型肝炎患者肝組織和外周血中的Th17（輔助性T細(xì)胞）表達(dá)水平會顯著升高，可以將其作為治療慢性乙型肝炎的的一個新靶點[4]。本研究對Th17細(xì)胞表面的CXCR3（CXC亞族趨化因子受體3）、CCR6（CC趨化因子受體）、CCR4（CC趨化因子受體）表達(dá)量進(jìn)行檢測，以此來分析其和患者病情之間存在的相關(guān)性，報道如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

于2017年1月—2017年12月在我院接受診治的慢性乙型肝炎患者中選取88例，歸為觀察組，從未接受過抗病毒治療，患者平均年齡（36.28±8.29）歲，男性50例，女性38例；病情重度、中度、輕度患者分別有18例、30例、40例。再選取同時期我院86例健康體檢者為對照組，平均年齡（37.05±8.16）歲，男性49例，女性37例。對比兩組基礎(chǔ)資料，差異有對比價值存在，P＞0.05。

1.2 檢測方法

Th17細(xì)胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達(dá)量檢測：抽取所有研究對象5ml清晨空腹靜脈血，在抗凝管中放置，PBMC（外周血單個核細(xì)胞）采用Ficoll密度梯度離心法進(jìn)行分離，采用培養(yǎng)基將無菌PBMC濃度調(diào)節(jié)到1×106個/ml，并且放入到24孔板中，將阻斷劑、伊屋諾霉素以及刺激劑加入之后，在5%二氧化碳、37℃的條件下對其進(jìn)行5h培養(yǎng)，CD8、CD4、CD3表面均標(biāo)記染色固定，在室溫下保持20min靜置，注意避光，細(xì)胞洗滌之后，Thl7細(xì)胞表面趨化因子受體CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)百分率、CD8+Thl7、CD4+Thl7細(xì)胞細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞百分率均采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

肝功能指標(biāo)檢測：抽取患者2ml清晨空腹靜脈血，對其進(jìn)行離心處理，Glo（球蛋白）、Alb（白蛋白）、TBIL（總膽紅素）、ALT（丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶）等肝功能指標(biāo)均采用大型自動生化儀進(jìn)行檢測。

血清纖維化指標(biāo)檢測：抽取患者2ml清晨空腹靜脈血，室溫下放置之后對其進(jìn)行15min離心處理，速度控制為2000r/min，PCⅢ（人Ⅲ型前膠原）、IVc（Ⅳ型膠原）、LN（層黏連蛋白）、HA（透明質(zhì)酸）等纖維化指標(biāo)均采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）法測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

經(jīng)SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件統(tǒng)計，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料行χ2檢驗，P＜0.05時說明差異明顯。

2.結(jié)果

2.1 各組Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量對比

經(jīng)檢驗，慢性乙型肝炎患者外周血Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量均高于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴(yán)重，外周血Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量越高，差異明顯，見表1。

表1 各組Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量對比（±s，%）

表1 各組Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量對比（±s，%）

CD4+Thl7 CXCR3 CCR6 CCR4 CXCR3 CCR6 CCR4對照組（n=86） 31.29±5.72 3.45±0.52 7.12±0.88 21.28±3.58 4.10±0.55 5.28±0.67重度（n=18） 63.28±7.37 10.29±1.53 18.40±2.35 52.37±6.08 19.27±2.52 26.48±3.28中度（n=30） 58.30±7.11 7.10±0.82 13.28±1.42 35.47±4.61 11.26±1.73 15.33±1.90輕度（n=40） 40.23±5.31 5.12±0.58 9.27±0.84 28.37±3.45 6.48±0.75 9.75±0.82 F 9.298 8.390 7.726 10.385 8.265 9.340 P 0.012 0.0013 0.025 0.013 0.020 0.014組別 CD8+Thl7

2.2 各組肝功能對比

經(jīng)檢驗，慢性乙型肝炎患者Alb、TBIL、ALT均高于對照組，Glo低于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴(yán)重，Glo水平越低，Alb、TBIL、ALT水平越高，差異明顯，見表2。

表2 各組肝功能指標(biāo)對比（±s）

表2 各組肝功能指標(biāo)對比（±s）

組別 Glo（g/L）Alb（g/L）TBIL（μmol/L）ALT（IU/L）對照組（n=86） 35.22±4.93 6.48±0.84 19.28±3.27 15.96±2.07重度（n=18） 3.40±0.91 54.29±7.10 118.47±15.46398.56±49.62中度（n=30） 18.22±2.10 32.49±4.36 83.27±9.41 109.65±18.96輕度（n=40） 25.37±3.47 13.28±1.74 41.29±5.32 49.26±6.15 F 8.326 7.368 9.370 13.625 P 0.015 0.018 0.012 0.010

2.3 各組血清纖維化指標(biāo)對比

經(jīng)檢驗，慢性乙型肝炎患者PCⅢ、IVc、LN、HA均高于對照組，差異顯著，P＜0.05；慢性乙型肝炎患者病情越嚴(yán)重，PCⅢ、IVc、LN、HA水平越高，差異明顯，見表3。

表3 各組血清纖維化指標(biāo)對比（±s，ng/ml）

表3 各組血清纖維化指標(biāo)對比（±s，ng/ml）

組別 PCⅢ IVc LN HA對照組（n=86） 6.19±0.92 15.29±2.65 17.19±3.08 19.29±3.52重度（n=18） 153.69±32.4213.56±30.25183.68±30.42154.89±28.62中度（n=30） 58.36±7.20 76.98±9.56 92.40±12.36 79.56±10.25輕度（n=40） 14.62±2.12 28.56±4.09 31.58±4.82 38.02±5.11 F 9.625 12.658 11.295 9.6258 P 0.013 0.001 0.015 0.012

2.4 Thl7細(xì)胞表面趨化因子受體表達(dá)量和患者病情之間的相關(guān)性分析

相關(guān)分析結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量和Gl之間存在負(fù)相關(guān)性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之間存在正相關(guān)性，P＜0.05。

3.討論

臨床上，乙肝病毒在肝細(xì)胞破壞過程中不發(fā)揮作用，屬于非細(xì)胞毒性病毒的一種，但是在肝細(xì)胞免疫病理損傷中則具有十分重要的作用。肝組織中處于激活狀態(tài)的淋巴細(xì)胞可以對特定受體分子進(jìn)行表達(dá)，并向靶器官進(jìn)行遷移，促使炎癥反應(yīng)與免疫應(yīng)答出現(xiàn)。研究顯示，慢性乙型肝炎患者肝組織和外周血中的Th17表達(dá)水平會呈現(xiàn)顯著升高現(xiàn)象，這可能是受到肝損傷的影響。Thl7細(xì)胞產(chǎn)生的三種趨化因子受體包括CXCR3、CCR6、CCR4，受體上G蛋白與趨化因子會在炎癥過程中偶聯(lián)，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥細(xì)胞活化與遷移，釋放胞內(nèi)鈣離子，激活蛋白激酶c。為了將慢性乙型肝炎患者中Thl7細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)情況具體明確，本研究對健康者和不同病情嚴(yán)重程度的慢性乙肝患者進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎患者病情越嚴(yán)重，外周血Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量越高，可知Thl7細(xì)胞表面趨化因子受體的高表達(dá)現(xiàn)象確實存在于慢性乙型肝炎患者中，并且趨化因子受體表達(dá)量會隨著患者病情加重而增加，提示慢性乙肝病情加重的內(nèi)在原因為趨化因子受體表達(dá)增加。其次，Th17細(xì)胞表面CXCR3、CCR6、CCR4表達(dá)量和Glo之間存在負(fù)相關(guān)性，和Alb、TBIL、ALT、PCⅢ、IVc、LN、HA之間存在正相關(guān)性，提示Thl7細(xì)胞表面趨化因子受體表達(dá)量增加會對慢性乙肝患者病情進(jìn)展產(chǎn)生直接影響，炎癥相關(guān)趨化因子增加會進(jìn)一步提高趨化因子受體表達(dá)量，最終形成一種惡性循環(huán)。

綜上所述，Th17細(xì)胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表達(dá)量檢測在慢性乙型肝炎患者病情評估的應(yīng)用價值顯著，可推廣。