正常妊娠女性血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間的建立

賀江，郭永燦，劉育欣，邱厚兵，鐘毓?jié)崳醮海R彥納

(1.瀘州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646000)

血細(xì)胞分析對(duì)篩查血液性疾病，了解機(jī)體感染、貧血狀況及常規(guī)止血功能，尤其是對(duì)評(píng)估孕婦的健康水平及監(jiān)測(cè)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育有著不可替代的作用。然而，目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析都是引用儀器廠家或《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的生物參考區(qū)間，這類參考區(qū)間都是以正常成年人為研究對(duì)象確立的，由于妊娠期女性血液分布發(fā)生了明顯的變化，若采用一般人群的生物參考區(qū)間去判斷妊娠女性的血細(xì)胞分析結(jié)果往往容易導(dǎo)致誤判。本研究依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)文件C28-A3《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義、建立和確認(rèn)》以及我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402-2012《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間制定》[1]，對(duì)不同孕期婦女的血細(xì)胞分析結(jié)果進(jìn)行分析，旨在建立正常妊娠女性血細(xì)胞分析的參考區(qū)間，為臨床診斷和評(píng)估提供可靠的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

為減小個(gè)體差異，本研究采用縱向序貫研究的方法[2]，選擇2016年6月至2016年12月到本院定期進(jìn)行產(chǎn)前檢查并順利分娩的589例孕婦為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)內(nèi)、外科和婦科疾病，無(wú)妊娠并發(fā)癥，追蹤其整個(gè)妊娠結(jié)局，剔除439例不符合本次研究范圍的檢測(cè)對(duì)象，最終篩選出150例正常孕婦作為本次最終研究對(duì)象，年齡18～37歲，平均(26.9±4.1)歲，孕期其它實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均正常，未使用過(guò)藥物，孕期順利，無(wú)明顯的貧血癥狀，無(wú)明顯的內(nèi)科感染指征。按照孕周不同將其分為孕早期(≦12周)和孕晚期(≧28周)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組，對(duì)上述最終確定的150名正常孕婦，分別在孕早期、孕晚期各采一次靜脈血進(jìn)行血細(xì)胞分析，同時(shí)隨機(jī)選取150例同期到本院進(jìn)行健康體檢的非孕健康育齡婦女作為對(duì)照組，入圍對(duì)照組人群無(wú)內(nèi)、外科和婦科疾病病史，且在非月經(jīng)期內(nèi)，年齡19～39歲，平均(27.3±4.2)歲，年齡與妊娠女性組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有受試對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的所有血細(xì)胞分析數(shù)據(jù)雙人核對(duì)錄入Excel 2007，以備導(dǎo)入SPSS 19.0軟件統(tǒng)計(jì)使用。

1.2 主要試劑與儀器

使用 Sysmex XS-1000i 全自動(dòng)血液分析儀及原裝配套試劑，使用美國(guó)伯樂(lè)公司生產(chǎn)的質(zhì)控品，采血所用的乙二胺四乙酸二鉀(K2 EDTA)真空采血管，由江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測(cè)方法

儀器按規(guī)定由廠家每6個(gè)月進(jìn)行1次校準(zhǔn)，使用的儀器和檢測(cè)項(xiàng)目操作均按本室制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)文件執(zhí)行，檢測(cè)系統(tǒng)參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng)合格，室內(nèi)質(zhì)控各評(píng)價(jià)指標(biāo)的變異系數(shù)均在允許范圍內(nèi)，同時(shí)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室不同的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行定期的比對(duì)試驗(yàn)，使不同儀器間的結(jié)果具有可比性。每日開(kāi)機(jī)后，使用雙水平全血質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控檢測(cè)，測(cè)定的質(zhì)控結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)才開(kāi)始檢測(cè)臨床標(biāo)本。采用K2 EDTA抗凝真空采血管空腹采集靜脈血2 mL，立即充分混勻，置室溫(25 ℃左右)保存，2 h內(nèi)完成測(cè)定。檢測(cè)項(xiàng)目包括：白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(NEU%)、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(LY%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(EOS%)、嗜堿性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(BASO%)、單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(MO%)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞比容(Hct)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板比容(PCT)、血小板體積分布寬度(PDW)、大血小板比率(P-LCR)等19項(xiàng)參數(shù)。

1.4 參考區(qū)間的驗(yàn)證

根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)C28-A2 文件，隨機(jī)選取20名正常孕婦的孕早期及孕晚期血細(xì)胞分析結(jié)果驗(yàn)證兩組生物參考區(qū)間，若各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果不超過(guò)2個(gè)數(shù)值(10%)落在新建參考區(qū)間以外，則表明驗(yàn)證有效，接受所建立的參考區(qū)間[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)照組的LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、PLT、MPV、PCT；孕早期組的NEU%、LY%、PLT、MPV；孕晚期組的NEU%、LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MPV、P-LCR數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，其它數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布。WBC、NEU%、LY%、EOS%、RBC、Hb、Hct、MCHC、RDW-SD、MPV、P-LCR3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BASO% 、MCV、PCT、PDW孕早期組與對(duì)照組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BASO%、MO%、MCH、RDW-CV、PCT孕晚期組與對(duì)照組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MO%、MCH、RDW-CV、PDW孕早期組與孕晚期組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 150例正常孕婦不同孕期血細(xì)胞分析檢測(cè)結(jié)果[正態(tài)分布數(shù)據(jù)非正態(tài)分布數(shù)據(jù)(P2.5～P97.5)]

*：數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布；P1：孕早期組與對(duì)照組比較；P2：孕晚期組與對(duì)照組比較；P3：孕早期組與孕晚期組比較。

2.2 各參數(shù)參考區(qū)間的確定方法

表2 孕早期、孕晚期組19項(xiàng)血細(xì)胞分析參數(shù)參考區(qū)間

2.3 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

本研究建立的正常孕婦孕早期、孕晚期組血細(xì)胞分析19項(xiàng)參數(shù)參考區(qū)間均通過(guò)驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表3 孕早期組血細(xì)胞分析參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

表4 孕晚期組血細(xì)胞分析參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

妊娠期母體血液系統(tǒng)會(huì)發(fā)生一系列生理變化以適應(yīng)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育，血液總?cè)萘吭黾硬⒂幸欢ǔ潭鹊难合♂尅１狙芯拷Y(jié)果顯示，RBC、Hb、Hct逐漸降低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與張雪琳[5]報(bào)道的結(jié)果相同，很好的印證了妊娠女性這一生理變化過(guò)程。

近年來(lái)，血紅蛋白、紅細(xì)胞比容、甲狀腺功能等因素對(duì)妊娠結(jié)局及胎兒的影響越來(lái)越受到關(guān)注，血細(xì)胞分析等檢測(cè)項(xiàng)目已成為常規(guī)產(chǎn)前檢查內(nèi)容。婦女在妊娠期間，母體體重和血液容量會(huì)增加，相對(duì)稀釋了血液，會(huì)出現(xiàn)生理性貧血[6]，但不會(huì)造成不良的妊娠結(jié)局[7]。孫德華等[8]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠婦女當(dāng)中，孕早期Hb<100 g/L的比例為7.14%，孕中期為25.10%，孕晚期時(shí)則達(dá)到了45.36%。本研究結(jié)果顯示，正常孕婦孕晚期的Hb參考區(qū)間為92.8～131.2 g/L，而目前我國(guó)臨床仍普遍采用Hb<100 g/L[9]作為診斷妊娠期貧血的標(biāo)準(zhǔn)，忽視了妊娠期生理性貧血的存在，就會(huì)把一部分處于生理性貧血的孕婦歸于貧血組，容易造成誤診和不必要的治療。同時(shí)，妊娠期高濃度Hb也會(huì)對(duì)妊娠結(jié)局有不利影響，一些學(xué)者以 Hb>130 g/L作為妊娠期高濃度Hb的判斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，高濃度Hb常常被誤認(rèn)為機(jī)體處于良好的血鐵狀況而沒(méi)有得到足夠重視，Little等[11]對(duì)妊娠婦女進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，高濃度Hb與圍生期死亡率、早期新生兒死亡率和死產(chǎn)有關(guān)。另外，Hct增高對(duì)孕婦妊娠并發(fā)癥的發(fā)生也有重要關(guān)系，羅雪娟等[12]研究發(fā)現(xiàn)，孕晚期Hct≥35% 提示存在明顯的易栓癥趨勢(shì)，從而增加深靜脈血栓形成、肺栓塞的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。吳曼禎等[13]報(bào)道，孕晚期Hct≥35%，發(fā)生妊娠高血壓綜合征的幾率將大大增加。此外，俞琳等[14]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病(GDM)的發(fā)生率也隨著RBC、Hb、Hct水平的增高而增加，利用血細(xì)胞參數(shù)對(duì)GDM進(jìn)行早期預(yù)測(cè)和篩選，可以早發(fā)現(xiàn)早治療，是減少不良妊娠結(jié)局發(fā)生的有效手段。由此可見(jiàn)，建立妊娠女性紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間，對(duì)于篩查妊娠貧血患者，預(yù)測(cè)妊娠并發(fā)癥、監(jiān)測(cè)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育有非常重要的作用。

利用地貧的初篩標(biāo)準(zhǔn)：MCV<82 fL和/或MCH<27 pg[15]，可有效地篩查出妊娠期地貧攜帶者[16]，但應(yīng)考慮妊娠期生理性貧血因素的存在，否則會(huì)將部分正常孕婦納入地貧組，造成誤診和不必要的治療。同時(shí)關(guān)注MCV、MCH變化幅度，可以發(fā)現(xiàn)妊娠期間的β地貧女性MCV、MCH較正常妊娠及缺鐵性貧血女性均有明顯變化，如果聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)監(jiān)測(cè)，還能夠明顯地提高鑒別診斷β地貧妊娠和缺鐵性貧血妊娠的能力[15]。因此，建立妊娠女性紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間，對(duì)于鑒別貧血類型、及時(shí)采取相應(yīng)的治療措施、促進(jìn)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育有非常重要的作用。

外周血WBC對(duì)于感染、炎癥、白血病等診斷和療效評(píng)估有一定的臨床價(jià)值，妊娠女性WBC從懷孕7～8周開(kāi)始增加，30周達(dá)高峰，有時(shí)可達(dá)15.0×109/L，主要為NEU %增多[17]。WBC在孕期的增高機(jī)制目前尚不清楚，但有研究表明孕期外周血WBC 升高的現(xiàn)象，可能與邊緣池的WBC釋放相關(guān)[18]。本次研究結(jié)果顯示，從孕早期到孕晚期，孕婦WBC、NEU %逐漸升高，LY%相對(duì)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，因此，建立正常妊娠婦女WBC相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間能有效的區(qū)分生理性和病理性增高，幫助臨床醫(yī)生作出及時(shí)有效的判斷及處理。

本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組、孕早期組與孕晚期組PLT結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，整個(gè)妊娠過(guò)程PLT變化不明顯，而孫德華等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，妊娠期間，PLT水平升高；石艷艷等[19]研究顯示，隨著孕期的增長(zhǎng)，PLT水平逐漸下降。有文獻(xiàn)報(bào)道，孕婦機(jī)體處于生理保護(hù)性高凝狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致PLT升高，而血液稀釋性減少以及妊娠期雌激素水平升高增加肝臟對(duì)血小板吞噬和破壞作用，會(huì)導(dǎo)致PLT降低[8]。孕婦PLT水平受多因素調(diào)節(jié)處于動(dòng)態(tài)平衡，維持孕期凝血狀態(tài)。本次PLT研究結(jié)果與其他學(xué)者報(bào)道不完全一致，目前已有的研究報(bào)道多為橫斷面研究[8,19]，即不同孕期的研究對(duì)象為不同的孕婦，受個(gè)體差異影響較大，而本研究采用縱向序貫研究方法，可以消除因個(gè)體差異帶來(lái)的誤差。但由于受樣本量與單一實(shí)驗(yàn)室的局限，且影響PLT檢測(cè)因素較多，研究不同孕期PLT的變化規(guī)律還需要多中心多樣本不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)數(shù)據(jù)予以驗(yàn)證。

本研究建立的正常妊娠女性孕早期和孕晚期血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間，更符合孕期的生理變化特點(diǎn)，有利于臨床更好的評(píng)估正常妊娠婦女的健康水平，可作為正常孕婦的血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間。