觀察非小細胞肺癌患者循環腫瘤細胞在治療中的動態變化及與預后相關性的前瞻性研究

黃韻堅　徐海鵬　黃誠

【摘要】 目的：探究非小細胞肺癌患者循環腫瘤細胞在治療中的動態變化及相關的預后前瞻性研究。方法：選取本院2014年1月-2017年1月收治的200例晚期非小細胞肺癌患者，在給予治療后，采集患者一線、二線化療前后外周血，采用多重mRNA原位分析法測定患者治療前后循環腫瘤細胞（CTC）計數，采用相關性分析軟件對CTC細胞數變化與無進展生存期（progression-free survival，PFS）、客觀緩解率（objective response rate，ORR）、總生存期（overall survival，OS）的關系進行分析。結果：200例患者治療后CTC細胞陽性率顯著低于治療前，差異有統計學意義（P<0.05）；同時，患者的CTC表達同OS與ORR均呈負相關（P<0.05）。結論：非小細胞肺癌患者采用一線、二線化療時通過捕捉檢測患者外周血中痕量存在的CTC，采用多重mRNA原位分析法動態監測CTC細胞數，有助于評估臨床療效，且與預后具有相關性，有助于指導臨床治療，可進一步分析研究。

【關鍵詞】 非小細胞肺癌； 循環腫瘤細胞； 動態分析； 相關性

A Prospective Study on the Dynamic Changes in the Treatment of Circulating Tumor Cells in Patients with Non-small Cell Lung Cancer and the Correlation with Prognosis/HUANG Yunjian，XU Haipeng，HUANG Cheng，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（14）：037-040

【Abstract】 Objective：To investigate the dynamic changes of circulating tumor cells in patients with non-small cell lung cancer （NSCLC） and to investigate the prognosis of the changes.Method：200 patients with advanced non-small cell lung cancer treated in our hospital from January 2014 to January 2017 were selected.Blood samples were collected before and after the first and second chemotherapy.Determination of circulating tumor cells （CTC） count before and after treatment by multiple mRNA in situ analysis，and correlation analysis software was used to analyze the relationship between CTC cell number and progression-free survival（PFS），objective response rate（ORR），overall survival（OS）.Result：The positive rate of CTC cells in 200 patients after treatment was significantly lower than that before treatment（P<0.05）.Meanwhile，the expression of CTC was negatively correlated with OS and ORR（P<0.05）.Conclusion：Patients with non-small cell lung cancer use the first line and second line chemotherapy to detect the presence of trace CTC in the peripheral blood of the patients，the multiple mRNA in situ analysis is used to dynamically monitor the number of CTC cells，it is helpful to evaluate the clinical effect and be related to the prognosis，which helps to guide the clinical treatment and can be further analyzed.

【Key words】 Nonsmall-cell lung cancer； Circulating tumor cells； Dynamic analysis； Correlation

First-authors address：Fujian Province Tumor Hospital Affiliated to Fujian Medical University，Fuzhou 350014，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.14.009

肺癌是一種臨床上常見的惡性腫瘤，近年來隨著各種環境因素以及我國人均壽命的延長，我國肺癌發生率也隨之上升。其中非小細胞肺癌（NSCLC）占到了肺癌患者的85%左右[1]，并且大多數處于晚期，目前晚期非小細胞肺癌患者死亡率處于我國惡性腫瘤首位，在治療上，傳統的治療方式主要是化療[2]，目前隨著分子生物技術及藥物的發展，出現了靶向治療與免疫治療，使晚期肺癌患者的生存期明顯延長，在肺癌治療中，一般采用影像學進行評價，但存在滯后性，并且無法進行生物學特點的檢測。循環腫瘤細胞（CTC）泛指存在于人體外周血內各類腫瘤細胞的總稱，此類細胞多由于自發性或診療性操作使其在原有實體病灶中脫落，而后進入人體外周血中，多數自行凋亡，僅少數進展為轉移灶，對患者生命安全存在嚴重威脅。CTC能夠準確反映患者的腫瘤基因信息，通過監測患者的CTC類型與數量可了解其腫瘤病灶動態變化情況，并且有助于評估治療效果，輔助開展個體性治療方案。同時，臨床檢測CTC具有良好的簡便性，并且能夠持續進行動態檢測，從而實時給予反饋輔助醫師及時給予治療策略改變，更有助于提升臨床治療效果，延長患者生存時間。既往研究發現，將CTC用于肺癌患者治療評估中效果理想，有助于評估患者預后并指導臨床治療，但不同的研究采用不同的方法界定CTC，且樣本量偏少。本次研究本院主要對NSCLC患者治療中循環腫瘤細胞動態變化做了記錄分析，同時探討了CTC同無進展生存期（progression-free survival，PFS）、客觀緩解率（objective response rate，ORR）、總生存期（overall survival，OS）的關系，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院2014年1月-2017年1月收治的200例晚期非小細胞肺癌患者作為研究對象。納入標準：所有患者經檢查均確診為晚期非小細胞肺癌患者；年齡均≥18歲[3]。排除標準：妊娠或處于哺乳期的患者；研究期間不采取避孕措施的育齡患者；可通過血液等方式傳播免疫缺陷病毒的患者[4]。其中男126例，女74例，年齡39～82歲，平均（62.8±10.2）歲；120例患者有吸煙史，80例患者無吸煙史；TNM分期：ⅢB期62例，Ⅳ期138例；病理類型：腺癌110例，鱗癌90例；ECOG評分：0分128例，1分72例；遠處轉移數目：62例無轉移，60例有1處轉移，28例有2處轉移，50例有2處以上轉移。本研究已經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均簽署了本研究的知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有患者治療前均進行心電圖、血常規、腫瘤標志物及胸腹CT等檢查[5]。根據患者病情醫生選擇藥物化療。化療方案為：一線化療使用順鉑或卡鉑聯合紫杉醇、培美曲塞、吉西他濱和多西紫杉醇進行；二線化療使用多西紫杉醇或培美曲塞單種藥物進行[6-7]。以上化療均3周為1個周期，需化療4～6個周期，并給予隨訪。

1.2.2 檢測方法 樣本采集：采集一線/二線化療前后外周血，化療前3 d進行第一次血液采集，且將其定為基線，第二周期化療前3 d進行第二次采集，第三周期化療前3 d進行第三次采集，若化療過程中進展，則進行采血（第四次）；入組后6個月未見進展則終止采血[8]。CTC檢測：應用廣州益善生物醫藥科技公司開發的CanPatrolTM方法（多重mRNA原位分析法），采用人外周血非血源細胞分型檢測試劑盒（多重mRNA原位分析法）開展CTC檢測。首先，提取患者外周血5 mL，對標本進行裂解紅細胞，再由納米過濾技術截留CTC，通過多重RNA原位分析與掃描獲得最終檢測結果[9-10]。檢測所應用核酸探針及其序列，見表1。檢驗后由2名檢驗醫師評定CTC計數，其中陽性表示CTC計數>2，陰性表示CTC計數等于1。

1.3 觀察指標 （1）CTC細胞數量：測量并記錄肺癌患者治療前后的CTC細胞數量（CTC計數由廣州益善生物醫藥科技有限公司所研發的診斷系統進行記錄）[11]。（2）相關性分析：分析治療前后CTC計數變化及其與PFS、ORR、OS的關系。CTC與PFS、ORR、OS的相關性采用Spearmans rank系數分析[12-13]。

1.4 統計學處理 數據應用SPSS 18.0進行分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，相關性分析應用Spearmans rank系數，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 200例患者治療前后的CTC陽性率比較 200例患者治療后CTC細胞陽性率為42.5%（85/200），明顯低于治療前的71.0%（142/200），差異有統計學意義（字2=6.463，P<0.05）。

2.2 患者CTC和ORR、OS的相關性分析 由Spearmans rank系數對比，患者CTC與PFS、ORR及OS均存在負相關（P<0.05），見表2。隨著總生存率的不斷降低，CTC陰性率和陽性率均呈現降低趨勢，見圖1。隨著客觀緩解率的升高，CTC陰性率和陽性率均呈現升高趨勢，見圖2。

3 討論

本次研究通過對200例非小細胞肺癌患者開展CTC檢測發現，治療前CTC陽性共142例，陽性率為71.0%；治療后CTC陽性85例，陽性率為42.5%，治療后CTC陽性率明顯降低，表現其化療方案有助于抑制CTC表達，而CTC表達情況也能對臨床治療起到輔助作用。同時，本研究結果顯示，患者的CTC表達同期PFS、ORR與OS存在密切相關性，CTC陽性患者的OS明顯短于陰性患者，并且CTC陽性患者的ORR明顯低于陰性患者，表現出CTC表達對患者的預后情況有良好預估效果。Mokhles等[14]主要分析了Ⅲ期和Ⅳ期患者一個周期化療前后的CTCs數據，得出肺癌分期和CTCs之間存在一定關系，Ⅳ期患者檢測出的CTCs明顯多于Ⅲ期患者；另外，經多因素分析表明CTCs與PFS、OS和ORR存在一定相關性[15-17]。陳昌南等[15]研究結果中也表明了CTCs的數量變化與CT檢查結果相同，提示可根據CTCs數量變化進行病情診斷。以上研究均與本研究結果一致。CTCs的研究依賴于CTC-Chip技術，其原理主要是將腫瘤細胞的EpCAM作為靶抗原，從而設計相對應的抗體，達到捕獲CTC的目的[16-17]。而腫瘤細胞在其生長發展過程中會發生上皮-間質轉化（EMT），所以CTC-Chip在捕獲CTC過程中出現遺漏，從而降低結果的準確性，另外有大量研究表明，CTC-Chip技術捕獲效率較低，對非小細胞肺癌的捕獲率僅25%左右[18-19]。為了避免上皮標志物鑒別法帶來的局限性，因此，本次研究筆者采用的是多重mRNA原位分析法來捕獲CTC細胞，采用多重RNA探針，分別針對多種CTC特異性基因，來捕捉CTC細胞。CanPatrolTM系統的檢測技術是目前唯一可以同步實現CTC形態分型、細胞分型以及分子分型的方法，通過納米過濾技術來富集CTC，而不需要依賴特異生物標志物（如EpCAM），進而減少非小細胞肺癌患者CTC細胞的丟失，具有可重復性、高特異性、高靈敏度等優點[20]。這同以往的CTC-Chip技術不同，這是基于分子水平上的檢測，相比較而言結果準確。

綜上所述，非小細胞肺癌患者采用一線、二線化療時動態監測CTC細胞數有助于評估臨床療效，且與預后具有相關性，有助于指導臨床治療，值得推廣應用。

參考文獻

[1]涂長玲，朱穎，董堅，等.晚期非小細胞肺癌循環腫瘤細胞EGFR表達與細胞免疫的相關性研究[J].西部醫學，2016，28（9）：1221-1226.