肝癌高發家族中的非肝癌成員血清IL-24水平觀察

席玉梅，吳繼周，李國堅，彭金林

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

原發性肝細胞癌(HCC)的發病率和病死率居高不下。我國HCC發病率居世界前列。HCC位居我國癌癥死亡原因的第二位。研究[1]結果表明，我國肝癌的發生具有明顯的地域差異，廣西是我國肝癌高發區之一。本研究前期研究發現，在廣西少數民族聚集地區的肝癌發病具有明顯的家族聚集現象，并與遺傳存在一定的關系[2]。近年來，肝癌的發生與患者體內免疫失衡的關系越來越受到關注,肝癌的家族聚集性可能與體內免疫微環境有關。白細胞介素24(IL-24)是一種細胞因子，是目前發現的唯一一種具有腫瘤抑制和免疫刺激作用的雙重因子。IL-24作為一個重要因子參與了肝臟免疫調節的過程，但目前關于IL-24在肝癌的家族聚集現象中的作用相關報道罕見。2010年1月～2012年12月，我們觀察了133例肝癌高發家族中非肝癌成員血清IL-24的表達變化，分析血清IL-24表達與肝癌家族聚集性的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在廣西肝癌高發家族(發生2例或2例以上原發性肝癌)中選取133例未患肝癌成員為觀察組，以相同生活環境、相同性別、相同民族、相同HBsAg表達、年齡±5歲作為配對條件，選取133例無癌家族(家族中未發生任何惡性腫瘤)成員為對照組。兩組均為男67例、女66例，年齡2～80(31.8±17.9)歲，其中年齡≤25歲者52例、>25歲者81例；瑤族30例、壯族103例，HBsAg陽性25 例、HBsAg陰性108例。所有研究對象均排除甲肝、丙肝、丁肝、戊肝等其他類型肝炎。觀察組中一級親屬(親緣系數為1/2：父母、子女、同父母的兄弟姐妹)47例，二級親屬(親緣系數為1/4:祖父母、外祖父母、叔、伯、姑、舅、姨)38例，三級親屬(親緣系數為1/8:表兄妹、堂兄妹)48例。高發家族中發生2～3例肝癌的家族成員有63例，發生4例及以上肝癌的家族成員有70例。本研究獲得本院倫理委員會批準同意，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 血清IL-24檢測方法 抽取兩組研究對象空腹外周靜脈血5 mL,采用ELISA試劑盒測定兩組血清IL-24，試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供。嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行操作，使用美國的BIO-RAD的iMark全自動酶標儀進行檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS23.0統計軟件進行數據分析。對各組血清IL-24 水平進行正態性檢驗,偏態分布的資料用M(P25 ,P75)表示，配對資料比較采用Wilcoxon符號秩檢驗，非配對資料兩兩比較采用獨立樣本Mann-Whitney U秩和檢驗，進一步多組比較采用KrusKal-Wallis H 檢驗，高發組血清IL-24水平的影響因素采用多元線性回歸進行分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組、對照組血清IL-24水平分別為304.875 1(203.908 9,456.241 4)、378.332 7(268.792 1,633.006 8)ng/L，二者比較，Z=3.967，P<0.05。觀察組中男、女血清IL-24水平分別為306.129 8(208.428 8,404.476 8)、299.369 1(189.882 5,470.963 8)ng/L，壯族、瑤族血清IL-24水平分別為287.287 8(208.428 8,434.125 2)、401.184 7(188.951 6,585.411 5)ng/L，≤25歲、>25歲者血清IL-24水平分別為301.424 0(181.250 4,452.213 6)、304.875 1(220.060 5，458.063 5)ng/L，HBsAg陽性、陰性者血清IL-24水平分別為315.126 5(240.875 6,462.772 5)184.220 2(151.079 5,421.479 5)ng/L。對照組中男、女血清IL-24水平分別為411.806 5(283.338 3,609.952 7)、372.716 0(237.865 8,692.771 9)ng/L，壯族、瑤族血清IL-24水平分別為355.563 5(245.259 4,568.375 5)、489.615 6(384.906 8,854.101 1)ng/L，≤25歲、>25歲者血清IL-24水平分別為397.096 4(274.562 6,646.321 5)、378.103 3(265.210 0,605.560 4)ng/L，HBsAg陽性、陰性者血清IL-24水平分別為360.593 6(190.418 8,676.086 0)、385.672 0(281.057 9,609.579 0)ng/L。不同性別、年齡、民族、HBsAg表達情況的觀察組血清IL-24水平均低于對照組(P均<0.05)。觀察組中，不同性別、年齡間血清IL-24水平比較差異無統計學意義(Z=-0.115，-0.284；P均>0.05)，不同民族、HBsAg表達情況間血清IL-24水平比較差異具有統計學意義(Z=-2.048，-2.519；P均<0.05)。

肝癌高發家族成員中一級親屬、二級親屬、三級親屬血清IL-24水平分別為252.096 5(161.310 5，450.262 1)、320.620 6(251.409 5,548.999 4)、309.269 0(240.875 6,463.838 2)ng/L,一級親屬、二級親屬、三級親屬血清IL-24水平有顯著差異(P均<0.05)。進一步兩兩比較，一級親屬與二級親屬、三級親屬相比血清IL-24水平有顯著性差異(P均< 0.05)，二級親屬與三級親屬血清IL-24比較無明顯差異(P>0.05)。

肝癌高發家族中患有2～3例肝癌的家族與患有4例及以上肝癌的家族成員血清IL-24水平分別為404.476 8(184.220 2,605.155 4)、277.163 0(206.168 8,338.022 5)ng/L，二者比較，P<0.05。

將血清IL-24的對數值設為因變量，將性別、年齡、民族、HBsAg感染、先證者、親屬級別設為自變量進行多元線性回歸分析，結果顯示，民族、HBsAg感染、先證者、親屬級別對高發家族成員血清IL-24水平有影響(P均<0.05)。見表1。

表1 肝癌高發家族成員血清IL-24表達的影響因素分析結果

3 討論

IL-24又稱為黑色素瘤分化相關基因-7(MDA-7)，是一種新發現的分泌型細胞因子[3]。IL-24基因位于人1號染色體1q32.2-1q41位點，由7 025個堿基組成，有7個外顯子和6個內含子，cDNA全長為1 718 000，其主要閱讀框架編碼了一種由206個氨基酸組成的新蛋白質[4]。IL-24表達于人體免疫器官(胸腺、脾臟等)、免疫細胞(T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞、單核細胞、巨噬細胞等)及正常的黑色素細胞和早期黑色素瘤細胞中。MDA-7/IL-24是一種新型細胞因子類抑癌基因，具有抑制腫瘤細胞生長、促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞侵襲及轉移、抑制腫瘤新生血管生成，增強放化療敏感性、誘導細胞自噬、免疫調節等多種生物學活性[5,6]。IL-24是至今為止發現的唯一一個既具有多種抗腫瘤生物活性又能調節腫瘤免疫微環境的細胞因子。Bhutia等[7]用IL-24注射乳腺癌裸鼠的一側進行治療，發現不僅抑制了注射部位的乳腺癌干細胞，而且對另一側的乳腺癌細胞也有抑制作用。Ma等[8]在小鼠結腸癌模型中發現IL-24可以促進CD4+T細胞和CD8+T細胞分泌IFN-γ，改變腫瘤免疫微環境，激活體內免疫反應，從而發揮抗腫瘤效應。 Chada等[9]的研究發現，IL-24的抗腫瘤“旁觀者效應”與體內的免疫刺激、抗血管生成和受體介導的細胞毒性等有關，mda-7/IL-24是一種獨特的多功能細胞因子。輔助性T細胞(Th細胞)主要分為Th1細胞和Th2細胞。Th1細胞主要分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ，負責細胞免疫反應，具有抗腫瘤作用。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，負責體液免疫反應。Th1/Th2細胞平衡在調節腫瘤免疫環境中發揮重要作用[10]。如果Th1/Th2細胞平衡遭到破壞，向Th2方向發生漂移，則腫瘤細胞會發生免疫逃逸，促進腫瘤的發生。盧庭婷等[11]研究發現，廣西肝癌高發家族成員中Th2 型細胞反應占優勢狀態，Th1/Th2 細胞平衡遭到破壞，機體抗腫瘤及清除自身癌變細胞的能力下降，從而使癌細胞得以生存發展。推測在IL-24的作用下機體免疫系統被激活，Th1細胞因子表達水平增高，Th1/Th2平衡遭到破壞，向Th1方向發生了漂移，從而發揮抗腫瘤效應。本研究顯示，肝癌高發家族成員的總體血清IL-24水平低于無癌家族成員，進一步從不同人口結構分層比較，肝癌高發家族成員的血清IL-24水平仍低于無癌家族成員。說明肝癌高發家族成員的血清IL-24水平低于正常水平，推測肝癌高發家族成員的免疫微環境發生了微弱變化，IL-24表達減少，Th1細胞因子減少，Th1/Th2平衡向Th2方向發生漂移，使高發家族成員的抗腫瘤能力下降，發生肝癌的機會增加。

HBsAg感染是肝癌發生最重要的誘發因素，HBV患者被列為肝癌的高危人群[12]。本研究對肝癌高發家族成員中HBsAg感染與肝癌易感性的關系進行分析，比較結果顯示高發家族成員中HBsAg陽性與HBsAg陰性成員的血清IL-24水平存在差異，差異有統計學意義。為排除其他因素的干擾進一步的多元線性回歸分析結果也證明HBsAg是高發家族成員血清IL-24水平發生變化的影響因素之一。這提示HBV感染成員體內的免疫微環境發生了微弱變化，Th1/Th2細胞平衡受到破壞。但是HBV感染與免疫微環境的變化之間的相互影響機制還不清楚，到底是HBV感染導致高發家族成員的免疫微環境發生變化，還是高發家族成員的免疫微環境發生變化之后導致了HBV的易感性需要進行深入研究。本研究還發現，不同的民族對肝癌高發家族成員血清IL-24水平的影響不同，壯族成員血清IL-24水平顯著低于瑤族成員，與進一步的多元線性回歸分析結果相一致。推測壯族人群中更容易發生免疫逃逸而發生肝癌，具體的免疫微環境調節機制需要更深入的研究。但是本研究中壯族成員明顯多于瑤族成員，所以也不排除樣本量的影響。另外，性別和年齡對高發家族血清IL-24水平沒有顯著性影響，推測IL-24水平與肝癌家族聚集的關系與性別和年齡不存在密切相關性。

此外，本研究對高發家族成員的親屬級別和家族史進行分析發現，一級親屬的血清IL-24表達水平低于二級親屬、三級親屬。但是二級親屬的血清IL-24表達水平與三級親屬沒有呈現出差異，推測可能是由樣本量不足導致的。多因素分析結果也顯示肝癌高發家族血清IL-24水平受到親屬級別的影響。與此同時，本研究還發現隨著先證者例數的增多，高發家族成員血清IL-24表達水平呈現減少的趨勢，提示肝癌家族聚集現象與家族史和親緣關系密切相關，表明遺傳因素在其中起重要作用。

綜上所述，肝癌高發家族中非肝癌成員血清IL-24水平降低，且受到民族，HBsAg感染、先證者例數及親屬級別的影響，說明IL-24水平與肝癌家族聚集可能呈負相關，且受到遺傳因素的影響。