無償獻血者中與免疫性TRALI相關HLA抗體及水平分析

任 俊

廣州血液中心 廣州市醫學 （血液安全）重點實驗室，廣東廣州 510095

TRALI（輸血相關性急性肺損傷) 是一種在輸血后可能會發生的具有致命性的反應類型之一，其臨床表現主要在輸血6h 內發生低氧血癥以及急性呼吸窘迫等，對患者的身心健康影響較大[1-2]。臨床相關研究報道指出，因輸血處理導致TRALI 的患者中超過85% 的供血血樣中均發現白細胞抗體的存在[2]。據不完全統計，TRALI 的發生率約為0.02%，出現死亡等不良情況的概率超過10%，因此有必要對血液樣本進行相應的篩選與檢測處理[3]。我國

表1 無償獻血者中不同類群的HLA發生率情況比較[n（%）]

是人口大國，用血量也相對較高，因此有必要對無償獻血等血液來源方式進行白細胞抗體的篩查工作，改善和提高用血安全性。本研究對2015 年8月～ 2017 年5 月期間296 例合格無償獻血者的HLA 和HNA-3a 抗體進行了檢測與初步分析，獲得了一定的結論，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以296 例于2015 年8 月～ 2017 年5月期間合格的無償獻血者作為主要研究對象。患者中男 159 例，年齡 19 ～ 54 歲，平均（33.4±8.7）歲；女性已婚已育者87 例，年齡28 ～ 54 歲，平均（40.1±6.5）歲；女性未婚未育者共計50 例，年齡19 ～ 26 歲，平均（20.9±2.2）歲。所有患者均抽取5mL 抗凝全血標本，并通過離心分離的方式分離血漿，并將其-20℃保存。

1.2 HLA抗體檢測

利用 Lifecodes（LMX）儀器、Lifecodes（LSA試劑）以及陳大偉等描述的檢測方式對所有患者的HLA 抗體進行篩查檢測，并利用LSA1 以及LSA2對篩查結果為陽性的標本進行HLA 抗體鑒定[4]。即將20μL 磁珠、7μL 待測血清樣本分別加入反應板中混勻，于200r/min、0.5cm 振幅、室溫的條件下孵育30min。然后將120μL 洗液加入反應極并利用真空泵抽吸，重復洗板2 遍，加入PE-IgG 二抗，避光振蕩混勻30min 后，加入120μL 洗液垂懸混勻。最后，利用Luminex 以及Launch MatchIT 對相關數據結果進行收集整理以及基本分析。

1.3 統計學方法

采用SPSS20.0 軟件對數據結果進行統計學分析。計數資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同類群中HLA抗體的發生率概況分析

在本研究中，男性以及已婚已育女性和未婚未育女性三類不同類群無償獻血者的HLA 抗體發生情況存在有一定的差異。其中，已婚已育女性患者整體情況高于男性以及未婚未育女性，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。見表 1。

2.2 女性生育次數對HLA抗體產生具有的影響分析

本研究對不同生育次數的女性進行對比分析發現，其HLA 抗體表現存在一定的差異。經統計學分析發現，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 生育次數與HLA抗體產生的相關情況比較[n（%）]

3 討論

輸血處理后患者發生嚴重的臨床并發癥甚至死亡等情況與TRALI 具有較高的相關性[4，7]。相關研究報道指出，TRALI 導致的不良情況與血液成分中的某些致病因素具有一定聯系，而結合病理因素類型可大致劃分為免疫性與非免疫性TRALI 兩類[8-9]。目前非免疫性TRALI 的發病主要機制尚未明晰，但免疫性TRALI 與抗體具有密切相關性[9]。相關研究報道指出，受到血液樣本提供方與接受方存在的抗原抗體反應影響，患者機體內中性粒細胞與氧自由基以及蛋白酶等多種活性物質發生異常性的變化，從而致使肺毛細血管出現一定程度的損傷，出現液體外滲的情況，致使肺水腫的發生[10]。有調查研究表明，約65% ～ 89% 的TRALI 患者輸注的血液樣本中均存在以HNA-3a 以及HLA- Ⅱ抗體類型為主的白細胞抗體，因此其可能與重癥TRALI的發生具有較高的相關性[5，11]。在本研究中，36例無償獻血者血液樣本的HLA 抗體檢測為陽性，占12.2%（36/296）。HLA 抗體檢測陽性中HLA- Ⅰ相對較高，共計19 例，占52.8%（19/36）。雖然本研究中HLA- Ⅰ的檢出率相對較高，但相關研究報道指出，在相關因素與發生TRALI 的相關性方面，HLA- Ⅰ較低，HLA-II 則較高[6，12]。中性粒細胞以及內皮細胞雖然不具備HLA-II 抗原的表達能力，但HLA- Ⅱ抗體以及具有HLA- Ⅱ抗原表達能力的單核細胞可能發生結合作用，從而釋放TNF-α等多種活性因子，使得中性粒細胞被激活，進而誘導患者出現TRALI[12]。在本研究中，通過對不同類群下 HLA- Ⅰ與 HLA- Ⅱ以及 HLA- Ⅰ +HLA- Ⅱ抗體類型的患者進行統計分析發現，已婚已育女性無償獻血者其HLA 抗體發生率達到26.4%，而男性無償獻血者為6.3%，女性未婚未育無償獻血者為6.0%。男性與未婚未育女性的差異無統計學意義（P＞ 0.05），而已婚已育女性與男性和未婚未育女性比較，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。此外，有研究報道指出，具有多次生育史的女性獻血者血液樣本HLA 抗體呈陽性的概率較高，因而輸血后誘發TRALI 的風險性相對較高[13]。本研究中，兩次及以上生育次數的女性獻血者其HLA 抗體陽性率為38.1%，高于一次生育者的22.7%，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。相關結果與現有報道一致。

有相關統計分析發現，在TRALI 的發生中約80% 的患者是因輸注血液中存在治病因素有關，其中以血液樣本來源為具有生育史的女性為甚[15]。應對此種情況，國外發達國家通常采用男性血液樣本以用于血液輸注，效果較好[12，15]。然而我國的用血量相對較高，若血液輸注操作中僅僅采集與使用男性血液樣本，可能導致供血緊張的不良情況發生。TRALI 另一類主要誘導抗體類型為HNA-3a[7，10]。有相關研究報道指出，大約80% 的高加索人群存在HNA-3a 表達，其中基因型為HNA-3bb的女性懷孕過程中機體內會產生一定量的HNA-3a 抗體，而當其血液樣本被應用于輸血后，則該成份進入受血者機體血液中導致中性粒細胞的異常變化，致使肺部內皮細胞受損，從而發生TRALI[14]。因此在后續研究中可通過進行HNA-3a 抗體的檢測以及分析工作，從而獲得更為精確的結果。

綜上所述，在臨床實踐中可通過對女性獻血者免疫性TRALI 相關的抗體進行篩查，進而選擇適合輸注的血液樣本，緩解或者避免供血緊張局面的發生，亦可以保障用血安全，降低TRALI 發生率。