生乳體細胞檢測試劑盒方法與現有方法的比較

梁春梅，喻東威，常建軍，宋曉東，解鑫，吳玉秋，趙媛，許璐

（內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司中心實驗室，呼和浩特011500）

0 引 言

體細胞計數是目前較常用的鑒別乳區、牛只和牛群乳房健康狀態的有效方法，生乳中體細胞數量高低對乳產品的質量和風味有很大的影響，特別是乳房炎乳（體細胞含量高）中有含量較多的蛋白酶和脂肪酶，會使長保質期的產品提前變質。本試驗采用間接測定乳中體細胞數(SCC)來診斷隱性乳房炎的方法。其原理是在表面活性物質和堿性藥物作用下，乳中體細胞被破壞，釋放出DNA，進一步作用，使乳汁產生沉淀或形成凝膠,將其收集到透明塑料管中，將內容物體積與生乳中體細胞數量（顯微鏡檢測）建立關系，直接通過管壁上的刻度（數量）得出體細胞數量,以體細胞數量的多少來間接診斷乳房炎和炎癥的程度。該方法，操作簡單，結果準確，判斷客觀，可在牛體旁完成。

1 實驗

1.1 材料與設備

生乳樣品。

尼康E200正立顯微鏡，電子天平，電熱恒溫培養箱，SCC-100體細胞檢測儀，FOSS體細胞快速檢測儀，體細胞（SCC）試劑盒，(包括20個一次性移液管、20個分析試管、20個帶有排水孔的官帽、20根攪拌管、1瓶試劑)。

1.2 檢測方法

（1）直接鏡檢法該法采用農業部行業標準NY/T 800-2004。操作時將待測的生乳樣品涂抹在載玻片上成樣膜，干燥、染色，顯微鏡下對細胞核可被亞甲基藍清晰染色的細胞計數。

（2）SCC-100體細胞檢測儀法和FOSS體細胞快速檢測儀法按照廠家說明書進行操作。

（3）體細胞試劑盒法測試步驟

①向試管中加入2 m L試劑2 m L奶樣,把攪拌管沿試管壁慢慢滑至試管底部，然后提至試管頂部，進行混合。在30秒內重復20次。（請勿搖晃試管，勿將攪拌管的頂部蓋住。）

②牢固的蓋上試管，聽到兩聲咔噠聲后將試管倒置30秒，排除液體。將試管恢復直立位置，等待幾秒鐘，待液體穩定，讀取剩余牛奶的水平刻度。

③解讀結果：試管上牛奶的水平刻度讀數表示體細胞的預計數量（以千數計）。例如水平刻度讀數為205，表示體細胞數為205 000 m L-1。

1.3 準確度實驗

選取大量生乳樣品分別用體細胞（SCC）試劑盒法、NY/T800-2004生鮮牛乳中體細胞測定方法、SCC-100體細胞檢測儀和FOSS體細胞快速檢測儀法檢測體細胞數，分析體細胞（SCC）試劑盒法檢測結果與其它檢測方法是否存在顯著性差異。

1.4 精密度實驗

選取5個不同生乳樣品，采用體細胞（SCC）試劑盒法方法進行精密度檢測試驗，進而驗證體細胞（SCC）試劑盒的精密度試驗是否符合要求。

1.5 數據分析

將菌落計數結果轉化成常用對數值后，對每類樣品進行統計學分析。對對數平均偏差進行配對t檢驗以確定不同方法之間微生物菌落總數是否有顯著性差異。結果分析采用SPSS軟件進行配對t檢驗分析。統計學分析中，P＜0.05表明有顯著性差異。重復性試驗用相對標準偏差進行分析。

2 結果與討論

2.1 準確度試驗

2.1.1 試劑盒法和標準方法以及儀器方法的比對結果

選取生乳樣品，分別用4種方法進行檢測體細胞，共做73個樣品實驗，檢測結果如圖1～圖3和表1～表2所示。

本研究選擇73個生乳樣品進行實驗,共得到292組實驗數據并對數據進行統計分析。從圖1、圖2、圖3可知體細胞（SCC）試劑盒法與國標方法保持很好的一致性，相關系數達到了0.95以上（表1）；與FOSS儀器法之間相關系數為0.925,與SCC-100儀器法之間相關系數為0.919，說明體細胞（SCC）試劑盒法與儀器快檢方法的檢測結果也有很高的相關性。由表2可以看出，體細胞試劑盒方法與標準方法和兩種儀器方法之間均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 成對樣本相關系數

圖1 試劑盒法與NY/T800-2004法對比結果

圖2 試劑盒法與FOSS法對比結果

圖3 試劑盒法與SCC-100法對比結果

2.1.2 快速儀器方法和標準方法的比對

由表3可以看出，標準方法與FOSS儀器方法，標準方法與SCC-100法，FOSS法與SCC-100法之間相關系數均在0.95以上；由表4可以看出，標準方法與FOSS儀器方法，標準方法與SCC-100法，FOSS法與SCC-100法之間均無顯著性差異（P＞0.05）。儀器方法檢測生乳樣品準確度符合要求，與國標方法一致性較好。

表2 成對樣本檢驗

表3 成對樣本相關系數

表4 成對樣本檢驗

2.2 精密度實驗

隨機選取5批生乳樣品，采用IDEXX體細胞（SCC）試劑盒法對不同的生乳樣品進行實驗分析，按照四(1)的操作步驟每個樣品重復測定10次計算相對標準偏差（RSD%）結果如表5所示。

由表5可以明顯得到方法精密度的結果，樣品相對標準偏差均小于10%，樣品1到樣品5相對標準偏差分別為6.18%，4.21%，6.56%，7.20%，8.15%，說明體細胞（SCC）試劑盒法精密度滿足要求。

3 結 論

本研究是對體細胞（SCC）試劑盒法和《NY/T 800-2004生鮮牛乳中體細胞測定方法》中的顯微鏡法，以及市場上現行常用的SCC-100和FOSS快速儀器法進行對比研究，可知該方法的準確度和精密度均符合要求，且相對于其他方法操作簡單，結果準確，特異性強，判斷客觀。

表5 不同體細胞水平生乳樣品重復測定的結果(×104）m L-1

體細胞試劑盒法具有很高的精密度和準確度，能夠滿足生乳中體細胞數快速、準確檢測。可定量測定生乳中的體細胞數，對生乳的質量檢測和監測牛乳房炎都有重要作用。該方法成本低實驗材料攜帶方便，而且不需要復雜的操作，所以既適用于大型奶牛場的專業監測，也同樣滿足奶農對牛奶的日常檢測。