核酸檢測(cè)與酶聯(lián)免疫法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液中HBV HIV梅毒的檢測(cè)效果分析

湛玉武

作者單位：516003 廣東 惠州，惠州市中心血站

近年來(lái)，通過(guò)輸血而患各種傳染病患者的數(shù)量明顯增加，血液中含有的病毒，如乙型肝炎病毒(HBV)、梅毒及艾滋病病毒(HIV)等，可通過(guò)輸血而導(dǎo)致受血者感染[1]。導(dǎo)致這種情況發(fā)生的主要原因是在采血時(shí)沒(méi)有檢測(cè)到血液中的病毒。血液病毒通常應(yīng)用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測(cè)，但該方法具有一定的局限性，多種外界因素可影響其檢測(cè)結(jié)果[2]。因此，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者的血液采取抗體和(或)抗原檢測(cè)，并選取合適的檢測(cè)方法對(duì)控制疾病的傳播具有非常重要的意義[3]。強(qiáng)化血液抗原和抗體檢測(cè)是血液篩查中關(guān)鍵的一步，可以有效防止因輸血而導(dǎo)致的病毒感染[4]。本研究對(duì)2015年5月—2017年9月我站采集的21 500份血液標(biāo)本的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行回顧性分析，探討核酸檢測(cè)和酶聯(lián)免疫法在無(wú)償獻(xiàn)血者血液病毒HBV、HIV和梅毒檢測(cè)中的效果。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 21 500份血液樣本中，男性供血者12 862例、女性供血者8 638例；年齡20～35歲，平均(25.8±3.4)歲。在5～8 ℃環(huán)境下，將所有血液樣本放置于5 mL和7 mL真空抗凝管中，5 mL真空抗凝管血液樣本血漿分離時(shí)間≤3 h，然后進(jìn)行核酸檢測(cè)；7 mL真空抗凝管血液樣本血漿分離時(shí)間≤24 h，予以酶聯(lián)免疫法檢測(cè)。在血液采集72 h內(nèi)完成兩種檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑 儀器包括自動(dòng)加樣機(jī)(瑞士哈密頓公司生產(chǎn))、全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(瑞士哈密頓公司生產(chǎn))、核酸提取儀(華益美生物科技有限公司)、PCR儀(上海賽默科技生物發(fā)展有限公司生產(chǎn))；試劑包括HIV試劑、HBV試劑及梅毒試劑(由上海科華生物技術(shù)有限公司提供)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 酶聯(lián)免疫檢測(cè)法 將7 mL真空抗凝管血液樣本在室溫下(20～29 ℃)按照試劑操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行處理。首先以3 000轉(zhuǎn)/min的速度離心約20 min，隨后保存在2～8 ℃冰箱中。血液樣本離心結(jié)束后，用全自動(dòng)加樣儀進(jìn)行加樣。最后使用全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀進(jìn)行分析，并記錄最終的檢測(cè)結(jié)果。為保證血液樣本的準(zhǔn)確性，可以對(duì)其進(jìn)行二次確診，確診標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性為波長(zhǎng)A值＜1，反之為陰性。

1.3.2 核酸檢測(cè)法 對(duì)5 mL真空抗凝管血液樣本在室溫下(22～29 ℃)以3 000轉(zhuǎn)/min的速度離心約20 min，隨后保存在2～8 ℃冰箱中。常規(guī)檢查血液樣本，如果檢查結(jié)果未發(fā)現(xiàn)異常，且符合檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)后將其放置在樣品條架上，并依據(jù)一級(jí)分配試劑程序按照說(shuō)明書(shū)對(duì)其進(jìn)行常規(guī)操作，具體如下：將600 μL結(jié)合液、50 μL磁珠加入到A號(hào)96孔深孔板中，將100 μL洗脫液及100 μL A、B洗液加入到B號(hào)96孔深孔板中，對(duì)血液樣本進(jìn)行裂解；裂解結(jié)束后，按照三級(jí)程序從A號(hào)、B號(hào)96孔深孔板中提取核酸，與此同時(shí)配備擴(kuò)增核酸反應(yīng)液。結(jié)合血液樣本量，按照四級(jí)核酸擴(kuò)增程序進(jìn)行擴(kuò)增，并將提取核酸后的結(jié)合液加入到八聯(lián)管中，使用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，詳細(xì)、準(zhǔn)確記錄擴(kuò)增結(jié)果，挑出結(jié)果為陽(yáng)性的血液樣本，之后進(jìn)行拆分實(shí)驗(yàn)，確定血液樣本的陽(yáng)性率。

1.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 以羅氏定量檢測(cè)作為兩種檢測(cè)方法判定的“金標(biāo)準(zhǔn)”，從而判斷兩種檢測(cè)方法在血液病毒檢測(cè)中的效果。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察兩種檢測(cè)方法對(duì)血液樣本HBV、HIV及梅毒的敏感度和特異度，對(duì)比兩種檢測(cè)方法的效果。敏感度=真陽(yáng)性人數(shù)/(真陽(yáng)性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%。特異度=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陽(yáng)性人數(shù))×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法對(duì)HBV的檢測(cè)結(jié)果比較 核酸檢測(cè)法的敏感度和特異度分別為95.31%和91.03%；酶聯(lián)免疫法的敏感度和特異度分別為89.06%和89.42%；兩種檢測(cè)方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為12.254和14.218，P值均＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 兩種方法對(duì)HIV的檢測(cè)結(jié)果比較 核酸檢測(cè)法的敏感度和特異度分別為96.77%和91.64%；酶聯(lián)免疫法的敏感度和特異度分別為85.48%和85.01%；兩種檢測(cè)方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.127和15.315，P值均＜0.05)。見(jiàn)表2。

表1 兩種檢測(cè)方法對(duì)HBV的檢測(cè)結(jié)果 (份)

表2 兩種檢測(cè)方法對(duì)HIV的檢測(cè)結(jié)果 (份)

2.3 兩種方法對(duì)梅毒的檢測(cè)結(jié)果比較 核酸檢測(cè)法的敏感度和特異度分別為96.88%和91.07%；酶聯(lián)免疫法的敏感度和特異度分別為87.5%和89.41%；兩種檢測(cè)方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為13.524和13.276，P值均＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩種檢測(cè)方法對(duì)梅毒的檢測(cè)結(jié)果 (份)

3 討論

傳染病的重要傳播途徑之一就是通過(guò)血液傳播，如乙肝、艾滋病、梅毒等，對(duì)人們的健康造成極大威脅，而輸血也成為傳染病通過(guò)血液傳播的一種特殊形式。加強(qiáng)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液的檢測(cè)，可以降低因輸血而罹患傳染病的發(fā)生率。目前，我國(guó)大部分血站通常采用酶聯(lián)免疫法對(duì)血液進(jìn)行檢測(cè)，但是單純應(yīng)用該檢測(cè)方法容易出現(xiàn)漏檢、誤檢等情況，且存在一定的缺陷，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)的整體質(zhì)量不是十分理想[5]。

臨床研究發(fā)現(xiàn)，血液病毒感染的大部分患者在前期無(wú)明顯臨床癥狀，且短期內(nèi)無(wú)發(fā)病征象，甚至由于部分患者體內(nèi)的抗體濃度過(guò)低而得不到有效檢測(cè)[6]。如果對(duì)有血液傳播疾病患者的血液出現(xiàn)漏檢、誤檢等，而此類血液輸入到其他人體內(nèi)，則可導(dǎo)致受血者被感染。HBV、HIV、梅毒等為臨床常見(jiàn)可經(jīng)血液傳播病毒，且此類病毒具有潛伏期長(zhǎng)的特點(diǎn)，很多患者在不知情的情況下已經(jīng)被感染。對(duì)于已經(jīng)被感染卻不知情的患者，如果獻(xiàn)血，且在獻(xiàn)血檢測(cè)中沒(méi)有被準(zhǔn)確排查，則會(huì)提高血液病毒的傳播率。

核酸檢測(cè)是采取病毒核酸擴(kuò)增技術(shù)，在檢測(cè)中可以使病毒直接擴(kuò)增，并匯集到陽(yáng)性孔內(nèi)。核酸檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)如下：①可以縮短病毒感染的窗口期[7]；②具有較高的特異性和敏感性；③可以避免病毒變異、人工操作導(dǎo)致的漏診情況發(fā)生[8]。核酸檢測(cè)的缺點(diǎn)包括：①進(jìn)口試劑的價(jià)格相對(duì)較高；②需要多份血液標(biāo)本混合篩查；③國(guó)產(chǎn)試劑雖然價(jià)格不高，但是靈敏度稍差。

酶聯(lián)免疫法的檢測(cè)目標(biāo)主要是血液中的病毒抗原[9]，如果患者體內(nèi)存在血液病毒，其波長(zhǎng)會(huì)發(fā)生變化，實(shí)驗(yàn)人員可以根據(jù)波長(zhǎng)的具體變化情況判斷患者的病情變化。酶聯(lián)免疫法的優(yōu)勢(shì)如下：①檢測(cè)速度快；②費(fèi)用相對(duì)較低；③選擇性強(qiáng)、靈敏度高。酶聯(lián)免疫法的缺點(diǎn)包括：①操作繁瑣；②漏診率高；③其檢測(cè)結(jié)果受溫度等多種外界因素的影響。很多血液病毒存在潛伏期，只有過(guò)了潛伏期，該病毒才可以被檢測(cè)到，臨床通常將該時(shí)期稱之為“窗口期”，酶聯(lián)免疫法對(duì)處于窗口期的血液病毒不能進(jìn)行有效檢測(cè)[10-11]，如HIV的潛伏期較長(zhǎng)，非常容易出現(xiàn)漏診。

本研究結(jié)果顯示，核酸檢測(cè)法在無(wú)償獻(xiàn)血者血液HBV、HIV、梅毒的檢測(cè)中，其敏感度和特異度均優(yōu)于酶聯(lián)免疫法。綜上，推薦使用核酸檢測(cè)法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液HBV、HIV、梅毒進(jìn)行檢測(cè)。