三陰性乳腺癌中P53和Ki67表達情況的相關研究

沈恩超，黃中晶，趙志泓

(江蘇大學附屬醫院甲乳外科，鎮江 212001)

三陰性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌的一種類型，是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)以及人類表皮生長因子受體2(HER-2)三者均為陰性的乳腺癌[1，2]。據報道統計TNBC在所有乳腺癌病例中占的比例約為20%。TNBC的組織學分級和惡性程度較高，侵襲性強，容易發生轉移，因此具有高復發率、低生存率以及預后差的特點[3，4]。目前臨床對于TNBC的患者缺乏行之有效的治療方案，內分泌治療以及靶向治療的效果也不夠理想，是臨床治療較為棘手的疾病。有研究認為TNBC與P53、Ki67的表達情況之間存在密切的聯系，p53、Ki67的高表達是TNBC的特點之一[5，6]。本次研究收集2014年1月-2017年12月我院確診收治三陰性乳腺癌以及非三陰性乳腺癌患者的P53和Ki67的表達情況進行相關分析研究，進一步探討TNBC患者的P53和Ki67的表達情況以及臨床意義，為TNBC的治療提供更多的信息。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1月-2017年12月我院確診收治的71例三陰性乳腺癌患者作為研究對象，并選取同期確診的71例非三陰性乳腺癌患者，所有患者均經外科病理或者穿刺病理學確診組織病理學分級G2-G3，術前均未接受過放化療以及內分泌治療。已排除患有精神疾病以及嚴重臟器功能異常的患者。三陰性乳腺癌組患者年齡29-58歲，平均年齡（43.8±6.5）歲，其中絕經后期 16例，絕經前期 55 例，腫瘤大小（3.9±1.1）cm，其中 TNM分期Ⅰ期19例，Ⅱ期30例，Ⅲ期22例。非三陰性乳腺癌組患者年齡28-57歲，平均年齡（43.5±6.3）歲，其中絕經后期18例，絕經前期53例，腫瘤大小（3.7±1.0）cm，其中TNM分期Ⅰ期18例，Ⅱ期32例，Ⅲ期21例。兩組患者的資料比較無統計學差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法 對采集的所有標本采用10%甲醛固定后進行包埋切片，切片厚度約3μm，然后采用免疫組織化學EnVision二步法進行檢測。先對標本進行脫蠟水化，然后在pH 6.0的枸櫞酸煮沸8-10min并保溫10min左右。待其冷卻后分別加入福建邁新生物技術開發公司的鼠抗人P53以及Ki67蛋白免疫組織化學單克隆抗體孵育過夜，次日采用PBS沖液沖洗后加入生物素標記的二抗并進行室溫孵育20min。接著通過二氨基聯苯胺（DAB）顯色沖洗后以蘇木精復染并封片。以辣根酶標記鏈霉卵白素代替一抗作為實驗的陰性對照，并設陽性對照。由兩名資深的病理科醫師采用雙盲法進行觀察切片并根據實驗手冊的說明進行結果判讀：P53陽性細胞比例超過10%即視為陽性（＋），否者為陰性（-）。Ki67陽性細胞的比例低于14%即視為陰性（-），比例在 14%-25%為（＋），比例在 26%-50%為（＋＋），比例超過 50%為（＋＋＋）。

1.3 觀察指標 比較P53和Ki67在兩組中的表達情況，分析三陰性乳腺癌（TNBC）的P53和Ki67表達水平與患者臨床病理學特征的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件進行統計學分析，計數資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 P53和Ki67在三陰性乳腺癌、非三陰性乳腺癌中的表達情況 P53在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌的陽性表達率分別為64.8%（46/71）和28.2%（20/71），Ki67在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌的陽性表達率分別為76.1%（54/71）和32.4%（23/71）。三陰性乳腺癌組的P53和Ki67表達陽性率均明顯高于非三陰性乳腺癌組，差異存在統計意義（P＜0.05）。 見表 1。

2.2 TNBC患者的P53、Ki67表達情況與臨床病理參數的關系 TNBC患者的P53表達陽性與腫瘤的直徑、組織學分級、脈管內癌浸潤以及淋巴結轉移情況有關(P＜0.05)，與患者的年齡無關（P＞0.05)；而Ki67的表達陽性則與腫瘤的組織學分級有關(P＜0.05)，與患者的其他病理參數無關(P＞0.05)。見表2。3討論

表1 P53和Ki67在三陰性乳腺癌、非三陰性乳腺癌中的表達情況[n(%)]

表2 TNBC患者的P53、Ki67表達情況與臨床病理參數的關系

TNBC在組織形態學以及免疫表型學方面與其他類型的乳腺癌存在較大的差異，其特殊的三陰性以及高度異質性，導致內分泌方面治療以及HER-2分子靶向治療效果不佳，臨床治療困難，預后較差，成為目前臨床研究的焦點所在[7]。有學者認為P53以及Ki67基因的高表達是TNBC的特點之一，與患者的病情發展、疾病預后存在著緊密關系[8]。P53是一種腫瘤抑制基因包括野生型和突變型兩類，它對腫瘤的增殖分化能起到調控的作用，并且還參與腫瘤細胞的凋亡過程，在防止腫瘤發生、消除突變細胞方面擔任著重要角色。野生型的P53基因具有抑癌作用，其表達的產物半衰期較短，使用免疫組織化學染色法無法檢測到。而發生突變的P53基因則失去了抑癌的功能，還會促進細胞惡化，延遲腫瘤細胞凋亡，其基因產生的產物半衰期明顯延長，能夠被免疫組織化學染色法所檢測到[9，10]。研究發現近60%的乳腺癌患者P53基因有發生突變的風險，而發生P53基因突變的乳腺癌腫瘤組織侵襲性強，容易發生轉移，而且對放化療治療不敏感，因此多數學者認為P53基因的突變與乳腺癌患者預后不良相關[11]。Ki67是存在于增殖細胞中的一種核抗原，與細胞周期有著密切聯系，除了在細胞增殖周期中G0期沒有表達，其他時期均有明確表達，臨床多用其作為評估細胞增殖活性的標志。目前臨床研究表明Ki67在乳腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中的表達水平均大幅度提高，提示Ki67與多種惡性腫瘤的發生、發展及轉歸有關，對于判斷腫瘤的增殖狀態和危害程度有重要意義[12，13]。

而在本次研究發現TNBC患者的P53以及Ki67基因均呈現出高水平表達，與非三陰性乳腺癌相比表達陽性明顯提高，而且P53表達陽性與TNBC腫瘤大小、組織學分級、脈管浸潤以及淋巴結轉移有關，Ki67表達陽性與TNBC腫瘤組織學分級有關，表明TNBC患者的P53以及Ki67高表達與腫瘤的惡性程度有關，與管小青等[14，15]的研究結論一致。相信隨著臨床研究的深入，通過對Ki67及P53蛋白在TNBC中表達以及TNBC的基因譜的進一步探究，有可能會找到潛在的治療靶點[16-18]，為TNBC治療提供新的思路。由于時間限制，本次研究沒有比較P53以及Ki67高表達在三陰性乳腺癌患者預后方面的影響。

綜上，三陰性乳腺癌患者的P53和Ki67的表達陽性情況均有所上調。P53和Ki67表達與腫瘤的惡性程度、增殖能力有關，對于患者的病情判斷具有一定的指導意義。