HPLC法同時測定胃康靈膠囊中芍藥苷和甘草次酸含量

龍玉瓊

（吉安市食品藥品檢驗檢測中心化學室，江西 吉安 343000）

胃康靈膠囊由白芍、白及、甘草等八味中藥提取加工制成，具有柔肝和胃，散瘀止血，緩急止痛，止痛生新的功效[1]。其是急慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍，胃出血常用藥，是近幾年治療胃炎、胃潰瘍很好的一種中藥復方制劑，其處方出自張仲景《傷寒論》中記載的芍藥甘草湯，經過現代工藝加工而成。其中臣藥甘草具有抗炎、抗菌作用，也具有抗潰瘍、解痙和促進胰腺分泌的作用，因此很有必要保證胃康靈中甘草的含量[2]。其現行國家檢驗標準為2015年版藥典，其標準中僅針對君藥白芍的芍藥苷成分進行含量測定，為提高藥品質量，保證用藥安全，且同時提高檢驗效率，參考文獻[1-5]建立本HPLC方法，同時檢測了君藥白芍中芍藥苷和臣藥甘草中甘草次酸的含量，獲得了滿意的結果。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；BP211D電子分析天平（賽多利斯公司）；AR2140電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KW-1000DC恒溫水浴鍋 (金壇市中大儀器廠)；色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm ，4.6×150 mm；DAD檢測器；芍藥苷對照品（中國科學院成都生物研究所，批號MUST-17031901，純度99.3%），甘草次酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110723-201514，純度99.3%），乙腈為色譜純；水為超純水；磷酸為分析純；胃康靈膠囊樣品共3批，均由當地藥店購買。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5μm，4.6×150 mm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：5μL；流動相：0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脫（見表1）；檢測器：二極管陣列檢測器，檢測波長：230 nm，以及190～400 nm紫外掃描光譜。此色譜條件下，2種待測化學物質的對照品分離度大于1.5，拖尾因子符合要求，典型的色譜圖見圖1。

表1 0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脫

2.2 供試品溶液的制備 取樣品內容物，研細，混勻，精密稱取0.8 g，置50 mL燒瓶中，加入鹽酸1 mL，氯仿20 mL，水浴回流提取1 h，過濾，濾液蒸干，用乙醇10 mL溶解，即為A液，備用。取上述濾渣揮干后，轉移置燒瓶中，加乙醇15 mL，回流1 h，濾過，即為B液，合并A液和B液置25 mL量瓶中，用乙醇定容，混勻，微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液。

2.3 混合對照品溶液的制備 取各對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL中含芍藥苷0.25 mg、甘草次酸0.26 mg，即得混合對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按處方量制備不含芍藥和甘草的陰性樣品，按2.2項下方法制得。

2.5 測定法 分別精密吸取上述混合對照品溶液，供試品溶液、陰性對照溶液、按2.1項下色譜條件分別進行檢測，結果表明混合對照品分離度好，陰性對照溶液無干擾，陽性對照溶液能達到分離 (見圖1～3)。

圖1 混合對照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性溶液色譜圖

2.6 線性關系的考察 分別精密稱取芍藥苷，甘草次酸2種對照品，加乙醇稀釋成一系列標準溶液，以對照品濃度為橫坐標X，各自對應的峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，2種化學成分的線性回歸方程、r值及線性范圍見表2。

表2 2種成分的線性范圍、r值及回歸方程

2.7 精密度試驗 精密吸取2.3混合對照液，按2.1項下色譜條件和方法，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測定芍藥苷和甘草次酸的峰面積，并以芍藥苷和甘草次酸的峰面積分別計算相對標準偏差RSD為1.36%和1.17%。2.8重現性實驗 取批號201609014供試品，分別多次進行含量的測定，考察實驗的重現性，并以芍藥苷和甘草次酸含量測定結果分別計算相對標準偏差RSD為1.42%和1.21%。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的制劑（批號：201609014；芍藥苷含量：0.439%；甘草次酸含量：0.234%）約0.8 g樣品9份，精密稱定，分別精密加入精密稱定的對照品，照2.2項下方法制備成供試品溶液，按上述方法進行測定芍藥苷、甘草次酸，分別計算其回收率（見表3），平均回收率分別99.5%和98.8%，其RSD分別為0.43%和0.82%。

2.10 穩定性試驗 取2.3項下混合對照液，按2.1項下色譜條件和方法，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h分別進樣測定，記錄色譜圖，測得芍藥苷、甘草次酸2種成分的峰面積在24 h內無明顯變化，并以芍藥苷和甘草次酸峰面積計算相對標準偏差RSD分別為1.73%和1.47%。

2.11 樣品的測定 取市售3批胃康靈膠囊，分別按2.2項下方法提取各樣品供試品溶液，按2.1項下色譜條件及方法測定，結果見表4。

表4 樣品中芍藥苷、甘草次酸含量測定

3 討論

3.1 提取方法的選擇 本研究對樣品的提取條件進行了考察，因甘草次酸顯弱酸性，采用鹽酸酸化后用氯仿提取，提取回收率高，重現性好，芍藥苷直接用溶劑乙醇提取，有良好的回收率和重現性。故本法用鹽酸酸化后用氯仿提取后濾過，濾渣再用乙醇提取，該提取方法甘草次酸和芍藥苷均有良好的回收率和重現性。

表3 芍藥苷、甘草次酸回收率

3.2高效液相色譜法檢測波長的選擇 參照中國藥典2015年版一部及有關文獻報道[2-5]，芍藥苷在230 nm處有最大吸收，甘草次酸在249 nm處有最大吸收，本實驗采用DAD檢測器，同時選取230 nm和249 nm兩個參比波長進行比較，通過光譜圖對比，230 nm兩個成分峰型較好，峰高響應值相當，最后選定檢測波長為230 nm。

3.3 流動相的選擇 參照中國藥典2015年版一部及有關文獻報道[2-5]，用0.1%磷酸溶液-乙腈為流動相按不同時間、不同比例分別實驗記錄圖譜，比較圖譜，結果以表1的梯度洗脫得到的圖譜最為滿意，兩種化學成分在15 min內均出峰，且有良好的峰型及分離度。

3.4 本方法的實用性 該方法在一個色譜條件下，可同時檢測胃康靈膠囊中的芍藥苷和甘草次酸兩種成分，且重現性好，靈敏度高，方法簡便快捷，可以作為胃康靈膠囊的質量控制。