玉容消痤顆粒對金黃地鼠性激素水平與皮脂腺斑的影響研究

李秀玉，李 靜，李 昕，李超群，袁向章

玉容消痤顆粒(Yurong Xiaocuo granules,YRXC)是基于經(jīng)驗方玉容消痤湯[1-2]的新藥開發(fā)。原方在臨床應用近20年，對尋常痤瘡(以下簡稱痤瘡)各型皮損均有顯著療效，且無明顯不良反應。該方為由丹參、葛根、連翹、浙貝母、蒲公英、白花蛇舌草、當歸、枇杷葉、桑白皮9味中藥組成，具有清熱解毒，清肺瀉火，活血化瘀，消癰散結之功效，藥味簡單，但效專力宏。

痤瘡是毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，易診難治，痤瘡可影響近85%的青少年[3]，成年人患病率為3%～8%，成年女性患病率較男性高，達12%。該病屬損容性皮膚病，除造成病變局部的不適外，更重要的是因影響儀容美所帶來的心理壓力，研究顯示其對心理和社交的影響甚至超過了哮喘和癲癇[4]。目前西醫(yī)治療痤瘡的主要藥物有抗生素、維A酸制劑、抗雄性激素藥物等，但都存在不良反應，如抗生素的耐藥問題，維A酸制劑的維A酸皮炎等，且近年鮮有新藥問世，迄今為止尚無大家公認的療效好而副作用少的治療方法。因此開發(fā)研究安全有效的痤瘡藥物，是臨床研究熱點之一。

已知雄激素在痤瘡的發(fā)生發(fā)展和維持中起重要作用，產(chǎn)生痤瘡的解剖基礎皮脂腺的發(fā)育和皮脂的分泌直接受雄激素支配，抗雄治療是痤瘡的有效療法之一。金黃地鼠側腹皮脂腺斑是雄激素靶器官，包含有大量皮脂腺結構，對雄激素刺激的反應上與人相似，是目前研究藥物抗雄激素及抗皮脂腺增生活性的理想動物模型[5-6]。作者探討YRXC對金黃地鼠性激素水平與皮脂腺斑的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與藥物 健康雄性金黃地鼠60只，體重80～100 g；等級為SPF/VAF；繁育單位為北京維通利華實驗動物技術有限公司。飼養(yǎng)管理：溫度為19～26 ℃，相對濕度為30%～70%，光照為150～300 Lux，環(huán)境設施合格證號【魯動環(huán)字H2002100112】；飼料：全價顆粒飼料；由山東大學實驗動物中心提供動物飲水，自來水，自由飲取。丙酸睪酮注射液(批號：0607141,規(guī)格：25 mg/mL，天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn))。螺內酯片(國藥準字H33020070)：20 mg/片，生產(chǎn)單位：杭州民生藥業(yè)有限公司。YRXC(批號：070801)，由解放軍第302醫(yī)院中醫(yī)藥研究所提供[1]：16 g相當于生藥材86 g，每克藥粉含糊精0.044 g，丹參酮ⅡA 1.06 mg，葛根素14.46 mg。性狀：棕色固態(tài)粉末。溶媒：蒸餾水。

1.2 試驗儀器 顯微鏡：DMLSZ型(德國Leica公司)；組織包埋機：EG1150型(德國Leica公司)；全自動組織脫水機：TP1020型(德國Leica公司)；切片機：HM315型(德國MICROM公司)。

1.3 動物分組和給藥 金黃地鼠60只，按體重隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、YRXC低、中、高劑量組，共6組，每組10只。

給藥途經(jīng)：灌胃給藥；給藥劑量：空白對照組及模型對照組給予蒸餾水；陽性對照組給予螺內酯溶液12 mg/kg；YRXC低、中、高劑量組分別給YRXC溶液0.8、1.6、3.2 g/kg。給藥頻率：1/d。

YRXC給藥劑量的設計依據(jù)：YRXC臨床擬日用劑量為16 g，按體表面積折算金黃地鼠等效劑量為1.6 g/kg，參考相關文獻報道及等比原則，設定YRXC低、中、高劑量分別為0.8、1.6、3.2 g/kg。陽性對照藥螺內酯劑量設計依據(jù)：根據(jù)《中國痤瘡指南2014修訂版》螺內酯治療痤瘡的成人用量為“每日1～2 mg/kg”，按體表面積折算金黃地鼠等效劑量為12 mg/kg，金黃地鼠和人用劑量的折算倍數(shù)參考國內徐氏[7]及美國食品和藥品監(jiān)督管理局目前所采用的種屬間劑量換算方法。

1.4 試驗方法 試驗前用電動剃須刀剃盡金黃地鼠右側背部體毛，暴露皮脂腺斑，在強光照射下，用游標卡尺測量皮脂腺斑塊的最大橫徑(transverse diameter，DT)和最大縱徑(longitudinal diameter，DL)。各組分別灌胃給藥：YRXC低、中、高劑量組分別給予0.8、1.6、3.2 g/kg YRXC溶液；陽性對照組給予12 mg/kg螺內酯溶液；模型對照組和空白對照組分別灌胃給予等體積蒸餾水。1/d，連續(xù)給藥30 d。給藥期間，除空白對照組外，其余各組每4天肌肉注射1次丙酸睪酮2.5 mg/kg，共7次。

末次給藥1 h后，用3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉動物，再次測量皮脂腺斑大小。之后脫頸椎處死動物，剖腹，用玻璃針分離腹主動脈，取血3 mL，分離血清，放免法檢測睪酮、雌二醇的含量。切取皮脂腺斑1 cm×1 cm組織塊，以4%甲醛固定，石蠟包埋，切片，蘇木精—伊紅染色法染色，于光鏡下觀察金黃地鼠皮脂腺顯微結構(皮脂腺重疊葉數(shù)、厚度及液化小囊)。皮脂腺重疊葉數(shù)判斷標準：重疊葉數(shù)0葉為(-)；重疊葉數(shù)1 葉為(+)；重疊葉數(shù)2～3葉為(++)；重疊葉數(shù)4葉為(+++)。

2 結果

2.1 YRXC對金黃地鼠血清睪酮、雌二醇的影響 與空白對照組比較，模型對照組血清睪酮含量顯著性升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明造模成功。與模型對照組比較，中、高劑量組血清睪酮含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，0.8 g/kg劑量組血清睪酮有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，陽性對照組血清睪酮含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與陽性對照組比較，YRXC各劑量組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但高劑量組有進一步降低的趨勢。YRXC各劑量和螺內酯對金黃地鼠血清雌二醇含量無明顯影響(P>0.05)。表1。

表1 YRXC對金黃地鼠血清睪酮、雌二醇的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.2 YRXC對金黃地鼠皮脂腺斑塊大小的影響 各劑量組給藥前DT×DL值無明顯差異；給藥30 d后，與模型對照組比較，低劑量組DT×DL值降低不明顯，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中、高劑量組和螺內酯組DT×DL值明顯降低，與模型對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明中、高劑量和螺內酯均能明顯縮小金黃地鼠皮脂腺斑。與螺內酯組比較，中、高劑量組DT×DL值差別不明顯，說明中、高劑量與螺內酯在縮小金黃地鼠皮脂腺斑作用相似。表2。

表2 YRXC對金黃地鼠皮脂腺斑塊大小的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.3 各組金黃地鼠皮脂腺斑病理組織學檢查 模型對照組：皮脂腺呈分葉狀分布，排列較緊較厚，部分腺葉較大，個別腺體液化呈小囊。陽性對照組：皮脂腺分布較模型組薄，但排列依然較緊，液化小囊較模型組稍多，皮脂腺厚度與模型對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；低劑量組皮脂腺厚度與模型組相似。中、高劑量組皮脂腺厚度變薄，排列也較松散，液化小囊形成數(shù)目多，皮脂腺厚度與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中高劑量組皮脂腺明顯變薄，個別僅有散在皮脂腺。各組金黃地鼠皮脂腺斑病理見圖1，皮脂腺重疊葉數(shù)情況詳見表3。

圖1 各組金黃地鼠皮脂腺病理圖片(HE×200)

表3 YRXC對金黃地鼠皮脂腺顯微結構的影響

3 結論

YRXC中、高劑量對金黃地鼠血清睪酮含量、皮脂腺斑塊DT×DL值有明顯降低作用，對皮脂腺顯微組織結構有明顯改善作用，提示YRXC有明顯的抗雄激素作用，部分揭示了其治療痤瘡的機制。由以上藥效學研究結果提示，本試驗中金黃地鼠YRXC有效劑量為1.6 mg/kg，折合臨床用藥有效起始劑量約為16.0 g/人。

4 討論

痤瘡發(fā)病原因未明，已知雄激素作用過強、皮脂腺分泌過度、毛囊皮脂腺導管角化異常、痤瘡丙酸桿菌感染及通過該細菌成分介導的炎癥反應特別是天然免疫反應是痤瘡發(fā)病的主要環(huán)節(jié)[8]，部分病例的發(fā)生和加重還與免疫、遺傳、內分泌障礙及心理因素等有關。

20世紀40年代Hamilton首次提出“男性激素物質”參與了痤瘡的發(fā)病，自此，雄激素與痤瘡關系的研究一直是皮膚科關注的熱點[9]。現(xiàn)已知，皮脂腺是雄激素的靶器官之一，皮脂腺的發(fā)育直接受雄激素支配，雄激素是痤瘡的始動因素，但大部分痤瘡患者外周血中雄激素水平正常[10]。睪酮(testosterone，T)是主要的循環(huán)雄激素，T可以通過5α-還原酶的作用代謝為作用更強的二氫睪酮(dihydrotestosterone,DHT)。T和DHT均可與雄激素受體(androgen receptor,AR)結合，但DHT比T對AR的親和力高10倍[11]。T、DHT與皮脂腺上的AR結合，從而發(fā)揮調節(jié)皮脂腺增生的作用，因此雄激素與痤瘡的發(fā)生關系密切。

螺內酯是《中國痤瘡治療指南(2014修訂版)》推薦的抗雄激素治療痤瘡藥物之一[4]，它的抗雄激素作用表現(xiàn)在2個方面：①能競爭性地抑制DHT與皮膚靶器官的受體結合，從而發(fā)揮抑制皮脂腺的功能；②抑制5α-還原酶，從而降低皮膚中DHT的含量。在皮膚中，5α-還原酶能將T轉化為DHT，故抑制5α-還原酶即可減少T向DHT的轉化。但該藥有月經(jīng)不調、惡心、高鉀血癥、疲勞等不良反應，因可能會誘發(fā)男性乳房發(fā)育、乳房脹痛等癥狀，不推薦使用于男性。

金黃地鼠背部皮脂腺斑是雄性素依賴性器官,是國內外公認的篩選和研究藥物抗雄性素及抗皮脂腺增生活性的動物模型[12]。本研究認為提高金黃地鼠T水平，以觀察YRXC對金黃地鼠T、雌二醇、皮脂腺斑大小及其組織結構的影響，并與指南推薦的抗雄藥物螺內酯對照，結果顯示YRXC中、高劑量有明顯抗雄激素作用，且與螺內酯效果相當，部分揭示了其治療痤瘡的機制。

YRXC除有上述抗雄激素作用外，研究證明其還有抗菌、抗炎作用[13-14]，且急、慢性毒理試驗證明其無明顯不良反應，是值得開發(fā)的治療痤瘡的有效良方。