國產和進口ELISA試劑HIV初篩結果與確證結果對比分析

李敏，韓曉燕，朱建民

(渭南市中心血站，陜西 渭南714000)

近年來HIV感染人數呈逐年上升趨勢，艾滋病的傳播已由高危人群向一般人群擴散[1]，WHO研究結果表明全球約有十分之一的HIV感染者由血液傳播感染[2]。HIV感染已是一個全球性的公共問題和社會問題。目前隨著我國對艾滋病宣傳力度的不斷加大，越來越多的人群對艾滋病的傳播途徑及高危行為等更為了解，部分有高危行為者想利用無償獻血這一方式來確認是否感染上HIV[3]，因此減少HIV輸血傳播是控制HIV擴散的重要途徑之一。本研究通過對渭南市138253例無償獻血者的HIV抗原、抗體國產和進口兩種試劑的初篩結果進行分析，闡明國產和進口試劑與確證結果之間的關系，為核酸開展后ELISA方法檢測HIV該采取何種策略以便最大程度的保證臨床用血安全提供有力的證據，現將檢測結果報告如下：

1 材料與方法

1．1 材料來源 2013年1月至2016年12月渭南市無償獻血者138253例，年齡18～55周歲，健康情況均符合《獻血者健康檢查要求》GB/18467。

1．2 儀器與試劑

1．2．1 檢測試劑 國產試劑生產廠家為北京萬泰，進口試劑生產廠家為美國伯樂，兩者均為第四代人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒。

1．2．2 室內質控 國產和進口試劑采用的質控品濃度分別為：0．5NCU/ml和4NCU/ml所用質控品均來自康徹斯坦。

1．2．3 儀器 TECAN EVO/150全自動加樣儀（瑞士帝肯公司），FAME24/20全自動酶免分析儀 （瑞士哈美頓公司）。

1．3 檢測方法 采用ELISA方法對無償獻血者血液標本由不同人員用國產和進口2種試劑進行抗－HIV檢測，并嚴格按照試劑盒說明書和標準操作規程文件實行，所用試劑及質控品均為中國食品藥品生物鑒定所批批檢合格，并在有效期內使用。單試劑有反應性標本用原試劑做雙孔復查；復查結果至少一孔有反應性和雙試劑有反應性標本均判讀為抗－HIV初篩有反應性，并送渭南市疾控中心（CDC）進行確認。

1．4 統計學方法 采用SPSS 19．0統計軟件進行數據處理，計數資料采用 χ2檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 國產和進口試劑HIV初篩結果及確證情況。國產試劑與進口試劑的確證陽性率比較差異沒有統計學意義：χ2=3．54，P＞0．05。

2．2 HIV初篩雙試劑有反應性標本的確證情況。

2．3 42例CDC確證陽性標本的2種試劑檢測結果分布。

2．4 100例初篩有反應性標本S/CO值分布及確證情況。

3 討論

由表1可知，國產和進口試劑的抗－HIV初篩有反應性率分別為0．056%和0．044%，差異沒有統計學意義（χ2=2．11，P＞0．05），國產和進口試劑抗－HIV初篩有反應性標本的確證陽性率分別為0．028%和0．029%，即兩種試劑的假陽性率分別為0．027%和 0．014%，差異沒有統計學意義（χ2=3．54，P＞0．05。 ），這和何江才[4]、李菳玲[5]、蔣麗娟[6]等人的結果分析一致。隨著國產試劑制備水平的提高，從靈敏度和特異性等方面比較，國產第四代HIV試劑與進口試劑具有較高的一致性[7]，有些甚至超過進口試劑[8]。雖然目前國產和進口HIV檢測試劑都是提高了敏感度和特異性的第四代試劑，但依然存在著較高的假陽性，分析原因可能有：（一）：EDTA－K2抗凝劑的濃度對血液標本抗－HIV檢測有影響[9]，可引起假陽性結果；（二）ELISA檢測的影響因素比較多，人體中的一些RF因子，補體等，都有可能會產生假陽性；（三）初篩試劑采用的是ELISA方法，而確證實驗采用的是WB法，其檢測原理不同，結果存在差異。

表2中，37例國產和進口雙試劑抗－HIV有反應性標本的確證結果均為陽性，雙試劑有反應性的確證陽性率為100%，說明2種試劑聯合檢測可提高初篩與確證結果的符合率，有助于提高對HIV感染判斷的準確度。

表3的數據顯示，國產和進口試劑均存在不同程度的漏檢，所以雙試劑檢測可以一定程度的減少血清學方法的漏檢情況。

表1 國產和進口試劑HIV初篩及確證結果

表2 37例雙試劑有反應性標本的確證結果

表3 42例確證陽性標本的HIV兩種試劑檢測結果分布

表4 100例初篩有反應性標本S/CO值及確證結果

表4不同的S/CO分組中，國產試劑有反應性標本的陽性確證率之間差異有統計學意義 （χ2=64．28，P＜0．01），進口試劑有反應性標本的陽性確證率之間差異有統計學意義（χ2=39．59，P＜0．01），說明 S/CO值越高，預示著HIV抗體確認陽性的可能性較大。這與周普輝[10]，楊育紅[11]，李向國[12]等人的結果分析相似。在1≤S/CO＜2組中，國產試劑的陽性確證率為零，說明在該分組中國產試劑有較高的假陽性率，可能原因為國產試劑為了減少漏檢，提高該試劑的靈敏度，產生較高的假陽性；S/CO≥10分組中國產和進口試劑有反應性標本經確證均為陽性，說明在S/CO≥10時國產和進口試劑的陽性符合率相同。

本站自2015年底實現核酸檢測全覆蓋，雖然核酸檢測有縮短窗口期的特點，但是抗原抗體具備在外周血中持續存在時間較長的特點，ELISA對變異及亞型的檢出概率與NAT對突變及基因型在檢測概率上相互補充，ELISA檢測對確保用血安全仍有相當重要的意義[13]，所以說在新型檢測技術普及的同時，仍需高度重視ELISA檢測。基于本研究中國產和進口試劑的特異性和靈敏度沒有顯著性差異，且雙試劑檢測可提高確證陽性的符合率這一情況，筆者認為若是采用兩遍ELISA檢測一遍核酸檢測的模式，可考慮用靈敏度和特異性均較好或有互補性的兩種不同生產廠家的國產試劑，這樣既可以節約成本，又可以防止漏檢。

目前ELISA檢測不能避免的假陽性情況，筆者認為可以建立相應策略：⑴加強獻血前咨詢和篩查工作，提高工作人員排查高危獻血者的能力[14]；⑵充分利用室內質控和室間質評的監督作用，根據它們的檢測情況及時優化實驗流程，做好關鍵控制點的監測工作；⑶加強實驗室人員責任心的同時，可選用靈敏度與特異性指標均較好的ELISA試劑來篩查HIV抗體，在盡可能檢出所有陽性標本的同時也要盡量減少因假陽性而導致的血源流失[15]。總之，所有的努力均為一個目標－避免HIV感染者“窗口期”漏檢，降低輸血傳播HIV的殘余風險，最大程度的保證臨床用血安全。