RbAp48、miR-218、NF-κB在宮頸癌診斷及病情預測中的價值分析

耿雪紅，賈艷利

(孟州市人民醫院婦科，河南 孟州 454750)

宮頸HPV病毒感染是促進宮頸上皮惡性病變的重要因素，流行病學研究顯示，宮頸癌的發病率可達 234－555/10萬人左右[1，2]。 現階段臨床上宮頸癌的總體生存預后較差，治療后的復發率較高，病情控制效果不理想[3]。在探討宮頸癌的發病機制的過程中，越來越多的研究關注到了生物學因子改變在宮頸癌發生發展中的作用。微小RNA能夠通過影響到宮頸上皮細胞的轉錄或者細胞的早期增殖調控，進而參與到惡性腫瘤的發生發展過程中。特別是miR－218等的表達變化，對于細胞核DNA復制調控、癌細胞的分化等病理過程均具有顯著的影響[4，5]。 核轉錄因子 κB（NF－κB）能夠促進癌細胞侵襲能力的增強，導致癌細胞突破宮頸基底膜上皮組織的風險明顯升高[6]。視網膜母細胞瘤基因（Rb Ap48）不僅參與到了視網膜母細胞瘤的病情進展過程中，同時對于其他上皮來源惡性腫瘤的細胞周期的調控等均具有一定的作用。為了進一步揭示 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在宮頸癌中的異常表達及其與患者病情的關系，本次研究選取我院在2015年12月至2017年8月期間收治的120例確診為宮頸癌患者，探討了相關指標的表達及其與患者臨床病理特征的關系，報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 我院在2015年12月至2017年8月期間收治的120例宮頸癌患者，年齡33～67歲，平均年齡（45．52±5．57）歲；120 例宮頸癌患者均在我院行宮頸根治性切除手術，均由我院病理學證實為宮頸癌，其中鱗癌92例，腺癌28例；臨床分期為IB2～IIA期，其中早期 （IIA期）27例，晚期（IB1/IB2 期）93 例；高分化（G1）11 例，中分化（G2）101例，低分化（G3）8例；淋巴結轉移者 22例，無轉移者98例。所有樣本均在術中離體30min內取材，放入液氮保存。另選取行全子宮切除術子宮肌瘤患者24例，術前由我院液基細胞學檢測無宮頸癌上皮細胞化生；年齡 33～68 歲，平均年齡（45．57±5．52）歲；HPV陽性10例，陰性14例。兩組標本的年齡差異無統計學意義（P＞0．05）。本研究獲我院倫理委員會批準、通過，患者及其家屬簽署相關知情同意。

1．2 病例選擇 有完整的手術資料、病理資料；意識清晰；無嚴重凝血功能障礙；無肝腎功能障礙；無其它惡性腫瘤；在我院行宮頸根治性切除手術；接受本研究研究內容，具有良好依從性。

1．3 Rb Ap48、miR－218 及 NF－κB 檢測方法 采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入Rb Ap48、miR－218、NF－κB 抗體 （鼠來源，ABCUM 公司），37℃孵育2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體 （購自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產的顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1．4 統計學方法 采用SPSS 22．0統計軟件。采用χ2/Fisher確切概率法檢驗來計算計數資料的構成比的差異程度，采用Pearson分析相關性，P＜0．05則差異具有統計學意義。

2 結果

2．1 不同宮頸組織 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 表達分布情況 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在正常宮頸組織及宮頸癌組織均有表達分布；宮頸癌組織Rb Ap48、miR－218、NF－κB 表達分布均高于正常宮頸組織，差異具有統計學意義（χ2=47．69、55．48、57．40，P＜0．01），見表 1。

表1 不同宮頸組織Rb Ap48、miR-218、NF-κB表達分布情況[n(%)]

2．2 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 與臨床資料關系Rb Ap48低表達與FIGO分期有關，差異具有統計學意義 （χ2=3．94，P＜0．05）；miR－218 低表達與盆腔淋巴結轉移、間質浸潤深度及累及陰道壁有關，差異具有統計學意義 （χ2=4．79、7．53、7．89，P＜0．05）；NF－κB表達分布與病理分型、盆腔淋巴結轉移、分化程度、腫瘤最大徑及累及宮旁組織有關，差異具有 統 計 學 意 義 （χ2=26．89、47．89、17．81、38．51、13．12，P＜0．05）；Rb Ap48 低表達與患者年齡、病理分型、盆腔淋巴結轉移、分化程度、腫瘤最大徑、間質浸潤深度、累及陰道壁、累及宮旁組織及累及血管間隙差異均無統計學意義（P＞0．05）；miR－218 低表達與患者年齡、病理分型、FIGO分期、分化程度、腫瘤最大徑、累及宮旁組織及累及血管間隙差異均無統計學意義 （P＞0．05）；NF－κB 表達分布與患者年齡、FIGO分期、累及陰道壁及累及血管間隙差異均無統計學意義（P＞0．05），見表 2、表 3、表 4。

2．3 宮頸癌組織 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 相關性 經Pearson分析發現：NF－κB表達與Rb Ap48、miR－218 表 達 呈 正 相 關 關 系 （r=0．62、0．83，P＜0．01）；Rb Ap48 的表達與 miR－218 的表達呈正相關關系（r=0．53，P＜0．01），見表 5、表 6。

3 討論

宮頸癌的病情進展，能夠導致患者生存預后的惡化，增加患者的病死率[7，8]?，F階段臨床上主要通過手術治療宮頸癌，但單純手術治療的臨床效果較為局限[9，10]。越來越多的研究認為，綜合生物學靶向治療能夠在改善宮頸癌的生存預后、提高近期治療效果等方面發揮積極的作用。本次研究通過對于宮頸癌患者血清中相關生物學指標的研究，可以為宮頸癌的生物學靶向治療提供參考靶點，并可以為宮頸癌的早期診斷或者預后評估等提供參考。

非編碼RNA對于細胞的生理功能、細胞周期調控或者細胞的早期異常增殖等過程均具有一定的影響。miR－218的高表達能夠通過誘導糖蛋白磷酸化配體等方面發揮作用，促進細胞內第二信使的異常傳導，增加早期細胞核DNA的病變風險。近年來臨床上免疫組化分析研究表明，miR－218等微小RNA在促進癌細胞的變形能力、提高癌細胞對于淋巴結內皮細胞或者血管內皮細胞等的粘附能力等方面均具有一定的作用[11]。NF－κB對于核轉錄調控的影響主要通過細胞內的三磷酸腺苷或者鈣離子的濃度調節，對于相關指標的影響能夠顯著促進上皮細胞的異常增殖，早期病變細胞的細胞周期如G1或者S期細胞比例明顯上升[12]。Rb Ap48對于癌細胞的早期浸潤深度的影響能夠促進多種惡性腫瘤的臨床分期的進展，干預癌細胞分化誘導凋亡抑制因子的表達，促進視網膜瘤、乳腺癌、卵巢癌等的發生。已有的相關研究證實了NF－κB在宮頸癌中的表達波動情況，但對于Rb Ap48或者miR－218的表達分析研究不足。

在本次研究中，通過免疫組化分析研究發現，在宮頸癌患者病灶組織中 Rb Ap48、miR－218、NF－κB等蛋白水平均呈現出了明顯的高表達趨勢，提示 Rb Ap48、miR－218、NF－κB 等均可能參與到了宮頸癌的病情進展過程中，相關指標的異常表達可以通過下列幾個方面的機制發揮作用[13]：⑴Rb Ap48的高表達能夠通過促進宮頸癌上皮細胞內AKT或者NOTCH信號通路的激活，導致癌細胞的增殖調控異常，增加癌細胞的細胞核的異型性；⑵miR-218對于宮頸癌上皮細胞轉錄增強子或者啟動子的誘導作用，增加了腫瘤干細胞的細胞活性，誘導癌細胞轉移或者復發風險的提高；⑶NF-κB的異常表達，是促進宮頸癌上皮細胞浸潤能力增強的重要因素，能夠顯著增加宮頸癌的臨床病理分期的進展。曹學全等[14，15]研究者在探討了83例樣本量的宮頸鱗癌患者的資料發現NF-κB的陽性表達水平可平均上升26%以上，且患者的細胞異型性越差，細胞排列的極性越差，NF-κB等指標的異常高表達越明顯。在探討相關指標與宮頸癌臨床病理特征的分期過程中發現，Rb Ap48表達與FIGO分期的表達密切相關，這主要考慮與Rb Ap48的異常表達對于癌細胞的浸潤或者轉移的影響有關，從而提升了臨床分期，特別是Rb Ap48的異常表達對于宮頸上皮惡性腫瘤細胞浸潤宮旁組織過程的促進作用，對于臨床分期的影響更為顯著，但本次研究并未發現Rb Ap48的表達與細胞分化或者淋巴結轉移等的關系，這可能與Rb Ap48對于細胞分化誘導凋亡因子等的激活作用不足有關。miR-218表達與盆腔淋巴結轉移、間質浸潤深度及累及陰道壁有關，miR-218的異常表達能夠促進癌細胞通過淋巴結轉移，并進一步增加浸潤陰道壁的風險，同時miR-218的異常表達對于宮頸間質成分的浸潤，能夠增加術后復發并影響宮頸癌的近期臨床治療效果。而NF-κB表達分布與病理分型、盆腔淋巴結轉移、分化程度、腫瘤最大徑及累及宮旁浸潤均具有一定的關系，NF－κB對于宮頸癌的多種病理過程均具有一定的影響，這主要考慮與NF－κB對于癌細胞免疫逃逸、分化障礙、細胞粘附能力的影響有關。最后，Rb Ap48、miR－218、NF－κB具有一定的相關性，提示不同的生物學因子在宮頸癌的發生發展過程中可能具有一定的協同效應，但具體的內在機制仍然需要進一步的探討。

表2 Rb Ap48與臨床病理特征關系

表3 miR-218與臨床病理特征關系

表4 NF-κB與臨床病理特征關系

表5 宮頸癌組織NF-κB與Rb Ap48、miR-218相關性（例）

表6 宮頸癌組織Rb Ap48與miR-218（例）

綜上所述，Rb Ap48、miR－218、NF－κB 在宮頸癌患者中異常表達，可作為宮頸癌診斷標記物，對宮頸癌病情預測具有潛在的重要價值。