采用凝聚胺法及微柱凝膠法檢測不規則抗體的應用比較

馬慶宗 ，楊志釗 ，鄒美霞 ，蔣旭 ，吳少梅 ，陳信 ，周巨明 ，鄭楚忠

(1、中山市人民醫院輸血科；2、中山市人民醫院藥學部配置中心，廣東 中山 528403；3、深圳市龍崗區人民醫院檢驗科，廣東深圳518116)

輸血前進行常規的不規則抗體檢測，能夠有效幫助臨床發現有意義的不規則抗體，也為臨床輸血提供正確、配合的理論依據，為患者的診治、搶救爭取更多的時間[1]。在交叉配血不合的情況中，有一大部分的原因是抗人球蛋白試驗陽性，因此造成交叉配血不合的常見原因往往是血清中含有不完全或不規則抗體[2]。交叉配血方法包括早期的鹽水法、酶技術配血法、凝聚胺法和微柱凝膠法等。本研究通過采用凝聚胺法和微柱凝膠法，對輸血前患者進行不規則抗體檢測，現報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取 2016年 3月至 2017年 3月我院收治的需輸血患者12680例，所有患者均符合輸血的臨床指征，其中男5326例，女7354例，年齡3～86歲。部分患者有輸血史和多次妊娠史及單次腫瘤術后受血史。患者納入標準：無輸血治療禁忌癥者。

1．2 儀器與試劑 凝聚胺法試劑由中山生科有限公司提供，不規則抗體篩選紅細胞由江蘇力博醫藥生物技術股份有限公司提供檢測試劑盒，微柱凝膠卡由北京佰利申科貿有限公司提供，專用離心機、37℃孵育器均由西班牙基立福公司提供。以上試劑均批檢合格并在有效使用期內使用。為了保證結果的穩定性、可比性，標本檢驗嚴格按照試劑說明書，采用同一批號的試劑。

1．3 方法 采集受血者EDTA－K2抗凝靜脈血3ml，對樣本進行離心，確保無纖維蛋白凝塊干擾，立即進行檢測，如未立即進行檢測則保存于2～8℃。凝聚胺法和微柱凝膠法參照滕藝艷等[3]研究的方法。對上述兩種方法篩查陽性者，采用鹽水法和抗人球蛋白法方法進行不規則抗體鑒定，確定抗體的特異性。

1．4 統計學方法 采用SPSS 22．0統計學軟件進行分析，計數資料以率或構成比表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0．05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2．1 兩種方法對不規則抗體檢測的比較 在12680例患者中，凝聚胺法檢出不規則抗體30例（0．237%），微柱凝膠法檢出不規則抗體 48例（0．379%），差異有統計學意義（P＜0．05），見表 1。

表1 凝聚胺法與微柱凝膠法對不規則抗體檢測的比較

2．2 兩種方法對不規則抗體鑒定結果的比較 凝聚胺法對抗D、抗 E、抗e、抗 C、抗M 和自身抗體的鑒定結果分別為 1、20、2、2、3、2 例；微柱凝膠法對抗D、抗 E、抗e、抗 C、抗M 和自身抗體的鑒定結果分別為 1、37、2、2、4、2 例，見表 2。

3 討論

當患者機體血容量降低，組織血液灌注減少時會引起休克，此時為患者進行輸血治療，能夠有效提高患者血容量，使患者血液循環得到改善，從而降低患者死亡率[3]。輸血治療過程中存在一定的風險，血清中含有的不規則抗體會引起一系列輸血不良反應，如新生兒溶血癥、血型鑒定困難等。采用酶法、凝聚胺法和抗人球蛋白法都能夠對不規則抗體進行篩查，而目前使用更為廣泛的是微柱凝膠法[4]。微柱凝膠法克服了酶法等其它傳統方法的缺點，使不規則抗體的篩查更加安全、便捷、靈敏，已經成為國際公認的方法，能夠更準確地保證輸血的安全[5]。本研究通過對凝聚胺法與微柱凝膠法對不規則抗體的檢測結果進行分析比較，希望能減少溶血性輸血反應并保證臨床輸血安全。

表2 凝聚胺法與微柱凝膠法對不規則抗體鑒定結果的比較[n(%)]

本研究采用凝聚胺法檢出不規則抗體30例，陽性率為0．237%，低于微柱凝膠法檢出率（0．379%），這表明微柱凝膠法在進行交叉配血試驗中的敏感性明顯高于凝聚胺法，且經統計發現，χ2值為 4．167，兩種方法間差異有統計學意義（P＜0．05），這與張娜[6]等文獻報道的結果不一致。凝聚胺法的原理是將細胞抗原抗體用低離子介質致敏，紅細胞間的靜電作用力會在凝聚胺等帶正電荷的大分子聚合物作用下減少，從而使細胞間的距離縮短，形成肉眼可見的凝集；非特異性的凝集會在假凝集清除液的作用下消除，而由抗原抗體介導的特異性凝集則不會被假凝集清除液影響而分散。凝聚胺法主要用于搶救急診患者時的緊急交叉配血，操作方法相對簡單快捷，且能夠有效減少假陽性，降低成本[7]。崔慶林[8]等研究中發現，當紅細胞懸液濃度為3%時反應情況最好，不會出現假陽性或者假陰性；當紅細胞濃度低于3%時，過多的抗體會導致前帶現象的發生；當紅細胞濃度高于3%時，抗體過少而導致假陰性。另外，凝聚胺法難以檢測出Kell血型系統，需在抗人球蛋白試驗的配合下檢測[9]。凝聚胺法存在靈敏度低的問題，需要操作人員對反應終點與結果判讀具有一定的經驗，存在著一定的漏檢率。微柱凝膠法的原理是抗原抗體反應時，IgG類抗體致敏的紅細胞在抗人球蛋白的作用下發生特異性凝集，在離心力的作用下使凝集紅細胞和游離紅細胞分離。微柱凝膠法操作方法簡捷，對實驗室人員要求簡單，且微柱凝膠法檢測結果準確、靈敏度高，即節省試劑成本，又減少了環境污染[10]。其缺點主要是孵育、離心時間長，無法滿足特急的急診標本配血要求，假陽性率相對較高，成本高。

本結果顯示，凝聚胺法及微柱凝膠法檢出的抗D抗體均只有1例。目前RhD檢測已經成為臨床實驗室必測項目，這也導致了抗E抗體產生的頻率高于抗D抗體[11]，RhD配合性輸注使用頻率增高，加上RhD抗原檢測在臨床輸血工作中已成為常規的檢測項目[12]，預防和降低了抗D抗體產生的因素。不規則抗體主要是通過輸血、妊娠等免疫刺激產生的，這是產生免疫性紅細胞血型抗體的主要途徑[13，14]，本結果中陽性標本多來自于有輸血史和多次妊娠史的患者，亦證明了這一點。不規則抗體篩查能夠保證已有輸血史、妊娠史等患者的輸血安全，同時對具有溶血性反應、原因不明貧血等患者進行不規則抗體篩查，能夠有效地減少輸血反應的發生[15]。此外，還能減少血液輸注無效、浪費血液的現象，降低因不規則抗體引起新生兒溶血病的危險發生率[16]，爭取更多的時間尋找相配血型的血液[17]，為產科、兒科大大地減輕疾病風險，提高患者的治愈率、存活率。

綜上所述，兩種方法各有優缺點，但為避免不規則抗體的漏檢，減少輸血反應的發生，應結合凝聚胺法，開展微柱凝膠法對不規則抗體的檢測，聯合應用能有效保證患者的輸血安全。凝聚胺交叉配血試驗法操作快速簡便、試劑的穩定性好、試劑無需特殊設備且結果清晰，利于保障臨床輸血安全，值得各級醫院推廣使用。