微生態制劑對肝硬化門脈高壓大鼠腸道四種微生物的影響

陳鑒

（紹興第二醫院，浙江 紹興 312000）

肝硬化門脈高壓患者腸道淤血缺氧，導致腸道微生態失衡。本實驗采用大鼠肝硬化門脈高壓模型觀察大鼠腸道四種微生物（乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、真菌）的變化，以初步評價微生態制劑對肝硬化門脈高壓大鼠腸道微生態的作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）實驗動物：健康SD大鼠80只，SPF級，雌性和雄性各 40 只，體質量（238.7±11.9）g。 大鼠和飼料均購自上海寶特生命科學發展有限公司。（2）微生態制劑選用整腸生膠囊（地衣芽孢桿菌活菌膠囊，東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司），為活菌制劑，每片含地衣芽孢桿菌數不低于2.5億個，輔料為：乳糖、淀粉。

1.2 方法

1.2.1 肝硬化門脈高壓大鼠模型的建立 將SD大鼠80只在自由進食、飲水的基礎上腹腔注射N-亞硝基二甲胺（DMNA）12μg/kg，每周 3 次，5 周后隨機選擇其中6只，對大鼠肝臟進行病理切片檢查，評定肝硬化程度。再隨機抽取正常大鼠和造模組大鼠各4只，用戊巴比妥鈉1mg/kg靜脈麻醉后打開大鼠腹腔，游離門靜脈主干，插管測定門靜脈壓力，以正常大鼠平均壓力作為基礎值，評定造模組是否門脈高壓。如同時符合以上兩點，即大鼠肝硬化門脈高壓造模成功。

1.2.2 大鼠分組 選擇造模成功的SD大鼠32只，隨機分為模型對照組和微生態組，每組各16只，并取正常大鼠16只作為正常組。三組均給予相同飼料自由喂食，微生態組在此基礎上加以整腸生活菌制劑灌胃，5mg/kg，1 次/d（人體劑量 300mg/d），連續飼喂8周。

1.2.3 指標檢測與細菌培養 （1）指標檢測：連續喂飼8周后，清晨空腹抽取大鼠靜脈血，檢驗血清丙氨酸氨基轉氨酶 （ALT）、天冬氨酸氨基轉氨酶（AST）、總膽固醇及甘油三酯。（2）連續喂飼8周后以脫頸法處死大鼠，無菌操作采集大鼠結腸內容物，放入無菌勻漿機內碾碎，溶于糞便稀釋液中10倍稀釋，并置于振蕩器上劇烈震蕩后取稀釋后標本100μL接種到各種培養基（表1），每一個稀釋度重復3遍，采用平板菌落計數法，求平均值后計算每克腸道內容物所含的菌落數。

表1 各菌群培養基及培養條件

1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。計量數據采用（±s）表示，并進行t檢驗。

2 結果

2.1 四種腸道微生物的變化 與正常組相比，模型對照組腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌均減少，大腸桿菌、真菌數量增加，差異均有統計學意義 （均P<0.05）；微生態組與模型對照組比較，乳酸桿菌、雙歧桿菌增加，大腸桿菌、真菌數量減少，差異有統計學意義（P<0.05）。詳見表2。

表2 微生態制劑對大鼠腸道四種微生物數量的影響（×104CFU/g）

2.2 對大鼠血脂及肝功能的影響 與正常組相比，模型對照組血清總膽固醇、甘油三酯、ALT及AST均升高（P<0.05），而微生態組較模型對照組總膽固醇、甘油三酯、ALT及AST均降低（P<0.05）。詳表3。

表3 微生態制劑對大鼠血脂及肝功能的影響

3 討論

3.1 肝硬化門脈高壓大鼠腸道微生物改變 正常情況下，腸道中微生物的數量和種類相對穩定，以維持腸道微生態的動態平衡。同時，腸道具有一系列特有的屏障，阻止細菌易位。肝硬化門脈高壓者腸道的屏障功能受損，細菌易位，引起腸道菌群的種類和/或數量的改變；同時，肝硬化者腸內神經體液調節功能異常，減少分泌腸黏膜上皮細胞間緊密連接的蛋白，使得腸道通透性增加，進一步破壞腸道屏障，加重腸道細菌易位，引發一系列炎癥反應和免疫應答，進一步加重肝硬化的發生與發展[4]，嚴重者甚至刺激炎癥因子誘發腸道感染、自發性腹膜炎、敗血癥等感染性并發癥。本研究結果同樣顯示，與正常組相比，模型對照組腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌均減少，大腸桿菌、真菌數量均增加（均P<0.05），表明肝硬化門脈高壓大鼠存在腸道微生物群紊亂。而微生態組與模型對照組比較，乳酸桿菌、雙歧桿菌增加，大腸桿菌、真菌數量減少（均P<0.05），表明微生態制劑能增加肝硬化門靜脈高壓大鼠的腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌，抑制其大腸桿菌和真菌等致病菌或條件致病菌的生長，使其腸道微生態重新回歸平衡。

3.2 微生態制劑與血脂、肝功能 肝臟病變與血脂代謝紊亂密切相關。研究已經證實乳酸桿菌和雙歧桿菌有降脂的作用[5]。本研究結果提示肝硬化門脈高壓大鼠存在血脂代謝紊亂的現象，模型對照組的總膽固醇和甘油三酯水平均高于正常組，而微生態組這兩個指標卻低于模型對照組，說明微生態制劑有調脂的功效。可能機制為：（1）乳酸桿菌在腸道內定植生長過程中建立的酸性環境有利于膽固醇與膽鹽發生共沉淀作用。（2）乳酸桿菌具有膽鹽水解酶，可以使結合狀態的膽鹽水解成去結合的膽鹽，與膽固醇共沉淀。（3）微生態制劑改善腸道功能后促進膽汁酸的肝腸循環，繼而降低體內膽固醇的水平。（4）微生態制劑改善腸道功能后使患者排便規律，促進膽固醇隨糞便排出，減少對膽固醇的重吸收。本研究結果同樣提示肝硬化門脈高壓大鼠存在肝功能受損，模型對照組的 ALT 及 AST 水平均高于正常組（P＜0．05），而微生態組這兩個指標卻低于模型對照組（P＜0．05），說明微生態制劑有改善肝功能的作用。肝臟作為清除內毒素的重要場所，細菌和內毒素移位到肝臟，會直接導致肝臟受損，并通過誘導炎癥介質間接使肝臟進一步受損，而微生態制劑通過修復腸道屏障，能夠恢復腸道微生態平衡，減少細菌和內毒素的移位，在一定程度上阻斷了肝臟受損的路徑，達到護肝作用。

3.3 創新與不足 本研究從動物實驗層面研究了微生態制劑對肝硬化門脈高壓的微生物、血脂和肝功能的影響，但未研究微生態制劑對大鼠腸道黏膜屏障的影響，有待于后續跟蹤報道。