清火舒脈顆粒沖劑灌胃治療家兔頸動脈粥樣硬化效果觀察

陳維達，宋婷，陳澤濤

(1山東中醫藥大學，濟南250355；2山東中醫藥大學附屬醫院)

動脈粥樣硬化(AS)是指脂質沉積附著在動脈壁內膜及內膜下，使內膜粗糙、增厚，同時伴有內膜下平滑肌細胞增生，形成如粥樣物質的斑塊。AS常累及頸動脈、冠狀動脈，引起腦卒中、冠心病，國內外學者普遍認為AS是血管內皮損傷后的一種慢性炎癥性增生性疾病，炎癥貫穿于AS的始終。頸動脈粥樣硬化(CAS)是腦卒中和短暫性腦缺血發作的重要原因之一，具有發病率高、致殘率高的特點。炎癥浸潤、血管活性物質合成、氧化應激反應、內皮功能損傷、微血管新生、基質金屬蛋白酶過表達等在CAS的發生和發展過程中起非常重要的作用。近年來研究表明，中醫藥在穩定易損斑塊、防治CAS方面療效確切。丁元慶教授基于多年臨床經驗，將傳統“火熱致中”理論與血脈病理論有機結合，應用于CAS的中醫病機闡述中，創造性提出“火熱灼脈”是CAS斑塊形成的基本病機，在此基礎上進行了清火舒脈顆粒干預CAS的相關臨床研究。本研究在前期研究基礎上，觀察了清火舒脈顆粒治療家兔頸動脈粥樣硬化的效果，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥品及主要材料 雄性新西蘭白兔30只，體質量2.0～2.5 kg，由山東中醫藥大學附屬醫院動物實驗中心提供，飼養條件為溫度20～26 ℃、濕度40%～60%。清火舒脈顆粒(免煎顆粒劑型)：葛根10 g、黃芩10 g、黃連3 g、天麻6 g、丹參10 g、醋鱉甲10 g、玄參10 g、牡蠣30 g，由江陰天江藥業有限公司提供，成人每日服用生藥量為80.9 g，制成免煎顆粒每袋重10.5 g；根據動物與人每千克體質量劑量折算系數表、實驗動物與人體表面積比例計算家兔等效用藥劑量，兔換算系數為3.27，換算兔每日給藥劑量(成人臨床劑量的8倍)為80.9 g/70 kg×3.27×8=30.2 g/kg。實驗儀器：5 mL注射器、20 mL注射器、灌胃管、普通采血管、手術剪、刀片、開口器、手術鑷。主要設備：切片刀、組織攤烤片機、病理切片機、蓋玻片、載玻片、光學顯微鏡、數碼相機、全自動生化分析儀、離心機。主要試劑：TC試劑盒、TG試劑盒、LDL試劑盒、HDL試劑盒。

1.2 CAS模型制作及清火舒脈顆粒用法 30只新西蘭白兔以基礎飼料適應性喂養1周后隨機分為對照組、模型組、實驗組，每組各10只。模型組和實驗組采用高脂肪餐喂養配合頸動脈空氣干燥法建立CAS模型。具體操作：模型組高脂喂養1周后行頸動脈內膜空氣干燥術，術后高脂喂養4周；實驗組給予高脂喂養1周，然后行頸動脈內膜空氣干燥術，術后高脂喂養4周，同時給予清火舒脈顆粒沖劑(30.2 g/kg)100 mL灌胃4周；對照組普通兔料喂養5周，每天150 g，飲水不限。頸動脈空氣干燥法：動物術前12 h禁食，不禁水；10%水合氯醛灌腸，動物頸部消毒脫毛，暴露右側頸部，縱向切開后鈍性分離右側頸總動脈，用動脈夾同時夾閉動脈的近心端及遠心端；用皮試針頭從近心端夾閉處平行于血管縱軸方向穿刺入阻斷血管兩端，連接內含生理鹽水的注射器，置換出血管腔內血液；連接醫用氮氣向夾閉段頸總動脈以120 mL/min的氣流進行空氣干燥，時長約10 min。對照組新西蘭白兔正常攝食、飲水，生長良好，活動良好，無死亡情況；模型組及實驗組造模期間共死亡4只，16只兔造模成功，未發現局部感染，創口愈合良好，但精神狀態較差，活動量減少，體質量增加迅速，反應略遲鈍。

1.3 血脂指標檢測 血清樣本于第7周采取，取材前禁食禁水，無菌環境下，將兔固定于手術臺上，常規皮膚消毒后在兔耳緣靜脈采血，用5 mL注射器抽取血液1～1.5 mL，檢測血脂指標(TC、LDL-C、HDL-C、TG)。

1.4 頸動脈組織病理觀察 暴露家兔右側頸總動脈后，在無菌條件下取出頸動脈，剝離頸動脈外膜的結締組織，用生理鹽水沖洗干凈，水平展開頸動脈內膜，肉眼觀察頸動脈內膜的變化，包括粥樣斑塊形態、分布情況。取頸動脈組織加入10%中性甲醛緩沖液，脫水，做常規石蠟包埋切片，取每只實驗兔的頸動脈組織進行相同方向的切面，切片厚5 μm，HE染色，光鏡下觀察組織病理改變。

2 結果

2.1 各組兔血脂水平比較 模型組及實驗組血清TC、TG、LDL-C水平高于對照組；實驗組血清TC、TG、LDL-C水平低于模型組，HDL-C高于模型組(P均<0.05)；詳見表1。

2.2 各組兔頸動脈組織病理變化 肉眼觀察發現，對照組兔頸動脈柔軟有彈性，動脈管腔內膜光滑完整，細胞形態規則；模型組及實驗組頸動脈內膜表面僵硬，隨時間延長逐步加重，且有條紋狀不規則隆起。對照組鏡下可見頸動脈內膜完整，未見粥樣硬化斑塊及泡沫細胞，內膜下平滑肌細胞排列規整(見圖1A)。模型組動脈內膜表面欠光滑，增厚，細胞形態、大小差異較大，內皮細胞排列混亂不規則，同時可見大量斷斷續續、排列不規則的胞質淡染和充滿脂質空泡的泡沫細胞沉積(見圖1B)。實驗組內膜表面光滑，平滑肌細胞排列比較整齊，內膜未見增厚，鏡下可見少量泡沫細胞及巨噬細胞包含在斑塊內部(見圖1C)。

表1 各組家兔血清TC、LDL-C、HDL-C、TG水平比較

注：A為對照組；B為模型組；C為實驗組

3 討論

丁元慶教授通過對中風及CAS危險因素及病理基礎的臨床研究發現，“火熱灼脈”是CAS斑塊形成的基礎病機，痰、瘀是CAS斑塊形成的重要病理產物，貫穿于CAS發生發展過程的始終[1]。同時指出，“火熱邪氣”具有階段性，常挾痰挾瘀，導致本病呈現虛實夾雜的病機特點，使久病不復、纏綿難愈。故治療應以清熱瀉火與活血化痰養陰配伍，采用清熱瀉火法穩定AS易損斑塊，切合其病機關鍵。丁元慶教授在治療CAS火熱證的長期臨床實踐中總結出清火舒脈顆粒這一經驗方，具體藥物為葛根、黃芩、黃連、天麻、丹參、牡蠣、玄參、醋鱉甲。方中葛根辛涼可散陽明怫郁之火，亦能活血、生津；陽有余，以苦降之，黃連、黃芩相須而為使藥，重在清上中二焦之痰熱實火，苦寒降泄，正合陽明降濁之性，梳理中焦氣機，恢復臟腑、三焦氣化，則火熱漸去，中焦清空，君火自降；天麻疏利肝氣，丹參入肝行血，二者同用共除肝經火邪，具有氣血雙解之功；牡蠣軟堅散結，可清除痰瘀結塊之標；玄參、牡蠣、鱉甲有清熱養陰之效，且牡蠣、鱉甲又能軟堅散結，故可消退CAS斑塊。

脂質過氧化是AS的重要機制，葛根、黃連、黃芩、丹參均有清除自由基、抗過氧化作用，故可有效延緩甚至逆轉AS進程。研究[2，3]發現葛根提取物葛根黃酮、葛根素對自由基具有很強的清除能力，能改善高脂膳食引起的機體氧化應激，調節機體氧化平衡狀態。黃連素可調節高脂血癥模型小鼠的脂質代謝及其導致的AS與肝損傷，同時具有一定的抵抗脂質過氧化作用[4]。黃芩素、黃芩苷是黃芩中有效的抗氧化劑，對多種自由基有很好的清除作用[5～9]。酚酸類成分是丹參中的主要藥效物質，研究[10]發現丹酚酸A可通過抗氧化作用從而抑制血管內皮細胞損傷。

藥理研究發現葛根素、丹參、天麻具有抗血小板聚集、防止血栓、改善微循環的功效，對CAS有較好治療作用。研究[11～13]表明丹酚酸B通過拮抗 P2Y12和抑制磷酸二酯酶(PDE)發揮抗血小板作用。丁誠實等[14]的實驗表明PGEZ-l具有抗凝、抗栓作用，提示天麻具有預防血栓作用。現代藥理研究[15～18]證實，天麻、丹參、葛根具有擴張腦血管，改善腦供血，促進腦代謝的作用，故能有效改善臨床癥狀。現已證實葛根對腦缺氧小鼠具有明顯改善作用[19，20]。黃芩、天麻、丹參可通過抑制興奮性遞質釋放，或直接增強腦組織抗缺氧能力，從而達到改善腦代謝、保護腦組織、增強記憶力、改善患者生活質量的作用。葛根、黃連、丹參還能有效抑制內源性膽固醇的合成，降低TG、TC水平。

本研究觀察了清火舒脈顆粒治療家兔CAS的效果，結果顯示，模型組及實驗組血清TC、TG、LDL-C水平高于對照組，且實驗組血清TC、TG、LDL-C水平低于模型組，HDL-C高于模型組，說明清火舒脈顆粒能降低家兔血清TC、TG、LDL-C水平。實驗結束后，對家兔頸動脈組織進行病理切片及HE染色，可見對照組頸動脈內膜表面光滑完整，未見增厚，未見粥樣硬化斑塊及泡沫細胞，內膜下平滑肌細胞排列規整；而模型組內膜表面欠光滑，明顯增厚，伴有斷斷續續、排列不規則的大量泡沫細胞沉積，大量平滑肌細胞遷移內膜，內皮細胞排列混亂不規則、不連續，細胞大小、形態差異大；實驗組內膜表面完整光滑，未見增厚，平滑肌細胞排列較規范整齊，斑塊內含有少量的巨噬細胞、泡沫細胞。上述結果表明清火舒脈顆粒可以延遲CAS家兔斑塊形成、穩定斑塊，從而達到治療CAS的作用。

結合上述研究結果，我們認為清火舒脈顆粒能降低CAS家兔血清TC、TG、LDL-C水平，穩定CAS斑塊，延緩CAS斑塊形成，對治療CAS具有積極作用。