臍帶、脂肪源性間充質干細胞改善肝硬化大鼠的效果比較

高琳琳， 王靜敏， 張艷鶴， 楊繼康

焦作市人民醫院消化內科，河南 焦作 454002

肝硬化是由多種病因引起的肝臟終末狀態[1]，研究[2-3]顯示，干細胞為肝硬化治療帶來新的希望。臍帶間充質干細胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs)、脂肪源性間充質干細胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs)是不同來源的間充質干細胞，研究[4-5]表明，兩者在抑制肝星狀細胞(hepatic stellate cells, HSC)活性方面均有作用。本實驗探討兩種干細胞在肝硬化治療方面有無差異。

1 材料與方法

1.1材料和試劑SD大鼠40只，6周齡，體質量220～260 g，購自鄭州大學動物實驗室；胎牛血清購自杭州四季青公司；Ⅳ型膠原酶購自Sigma公司；Livin、Smac兔多克隆抗體購自美國SANTA CRUZ公司；SP9000試劑盒購自北京中杉生物工程公司。

1.2細胞的分離與培養

1.2.1 UC-MSCs的分離培養：正常足月分娩的臍帶，PBS洗滌后剪小段，去除外膜、血管，剪碎后置于培養瓶中，加入質量濃度為100 g/L的胎牛血清的培養基，置于體積分數為5%的CO2培養箱中培養。每3 d換液1次。細胞至80%匯合融合時，用質量濃度為2.5 g/L的胰酶消化，以1∶3的比例傳代培養。

1.2.2 ADSCs的分離培養：取大鼠脂肪組織約2 mg剪碎，加含1 mg/ml膠原酶的分離液，振蕩消化1 h，離心5 min后，將沉積的細胞加入質量濃度為100 g/L的胎牛血清的培養基，再次離心后，沉積的細胞加入培養基中，置于體積分數為5%的CO2培養箱中培養。24 h后換液，每3 d換液1次。細胞達80%融合時傳代。

1.3建模及干細胞移植選取SD大鼠35只，將質量濃度為500 g/L的CCl4大豆油溶液，首次劑量按5 ml/kg行腹腔注射，之后按3 ml/kg腹腔注射，2次/周，共8周。隨機處死5只大鼠，肝臟組織切片看到假小葉形成，證實造模成功。依據實驗設計，將30只大鼠分為3組：UC-MSCs組10只，ADSCs組10只，對照組10只。……