球孢白僵菌對茶毛蟲4齡幼蟲生物測定

包 強(qiáng)，肖 蕾，楊文波，周品謙，李耀明，歐高財，王沅江*

（1.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 茶葉研究所，國家茶樹改良中心 湖南分中心，湖南 長沙 410125；2.湖南省植保植檢站，湖南 長沙 410127）

茶毛蟲（Euproctis pseudoconspersa），鱗翅目（Lepidoptera），毒蛾科（Lymantriidae），是茶樹的主要害蟲之一，以幼蟲主要危害茶樹的葉片，大量發(fā)生時將茶樹芽葉、嫩梢、樹皮咀食殆盡，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量和茶樹的長勢[1-2]。局部茶園茶毛蟲的防治因化學(xué)防治造成再猖獗，同時化學(xué)農(nóng)藥殘留嚴(yán)重影響和制約了茶葉的優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)，尋找一種高效、無污染、無農(nóng)藥殘留、無副作用的新技術(shù)防控茶毛蟲是目前茶樹病蟲害防治中的重要的研究課題之一。

白僵菌（Beauveria bassiana）是昆蟲病原真菌之一，能夠在自然條件下通過體壁接觸感染殺死多種農(nóng)林害蟲，且對人畜無毒，對作物安全，無殘留、無污染。據(jù)不完全統(tǒng)計，白僵菌可寄生15個目149個科700余種[3-4]。近年來研究學(xué)者引進(jìn)白僵菌防治茶麗紋象甲、茶角胸葉甲和茶小綠葉蟬等茶園害蟲取得一些進(jìn)展[5-7]，由于白僵菌菌株在轉(zhuǎn)寄主過程中致病性發(fā)生一定的改變，在應(yīng)用白僵菌防治病蟲前需要對該蟲開展必要的室內(nèi)研究以探明白僵菌菌株最佳濃度及害蟲抵抗逆境脅迫下的能力，基于此目的開展本研究，為白僵菌對茶毛蟲的生物防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌藥

孢子含量為400億個孢子/g的球孢白僵菌水分分散粒劑，由山西綠海農(nóng)藥科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 供試蟲體

采自湖南懷化沅陵縣三眼橋茶廠基地第一代茶毛蟲所產(chǎn)卵塊孵化，用新鮮茶梢飼養(yǎng)在室內(nèi)至4齡幼蟲，供試驗(yàn)使用。

1.3 孢子懸浮液的配置

用分析天平稱取25.00 g 400億個孢子/g球孢白僵菌放入滅菌過的三角錐形瓶，用量筒量取1000 mL的0.05%吐溫-80溶液搖勻配置成濃度為1.0×109孢子/mL的孢子懸浮液母液，用移液管依次移取母液稀釋配置1.0×108、1.0×107、1.0×106、1.0×105孢子 /mL的孢子懸浮液，共計5個濃度。

1.4 接種

每個濃度為1個處理，每個處理重復(fù)4次，以0.05%吐溫-80溶液為對照。每個處理6頭茶毛蟲幼蟲。采用浸漬法接種，將試蟲浸入到孢子懸浮液中5 s，對照浸沾0.05%吐溫-80溶液，用滅菌過的濾紙吸干蟲體表面多余的菌液。接種后把試蟲置于一次性滅菌過自制塑料盒（蓋子表面用紗布自制通氣部位）中，用基部包有濕潤脫脂棉的新鮮茶梢置于25℃、濕度95%、L∶D＝1∶1的培養(yǎng)箱飼養(yǎng)，每2 d更換1次新鮮的茶梢。

1.5 調(diào)查與統(tǒng)計分析

接菌處理后第2 d開始，每天調(diào)查1次茶毛蟲的死亡情況。如發(fā)現(xiàn)死蟲，將其移出塑料盒并置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)保濕培養(yǎng)，觀察死蟲上是否長出菌絲。死亡率、校正死亡率的計算公式如下：

累計死亡率（%）＝（死亡蟲口數(shù)/處理總蟲數(shù)）×100

累計校正死亡率（%）＝（處理組累計死亡率-對照組累計死亡率）/（1-對照組累計死亡率）×100

采用SPSS17.0軟件中單因素方差分析對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。利用鄧肯氏新復(fù)極差法對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病性

試驗(yàn)結(jié)果表明，白僵菌孢子懸浮液可以感染茶毛蟲幼蟲，白僵菌孢子進(jìn)入蟲體，白僵菌在蟲體萌發(fā)生長，達(dá)到致死茶毛蟲幼蟲的效果（表1）。

2.2 死亡率

從表1可知，白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲幼蟲死亡率上升，隨著濃度增大需要的半數(shù)死亡時間逐漸縮短，致死率也逐漸升高。105個孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲在藥后第5 d后出現(xiàn)死亡，死亡率16.67±13.61%；1.0×107個孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液在藥后第7 d茶毛蟲致死率達(dá)到50%，半致死亡時間為7 d；1.0×108個孢子/mL濃度半致死亡時間僅1 d，死亡率達(dá)到了61.11±20.79%，差異顯著。109個孢子/mL濃度處理的茶毛蟲處理后一天全部死亡，死亡率達(dá)到100±0.00%。

2.3 化蛹率

研究發(fā)現(xiàn)，茶毛蟲4齡幼蟲在室內(nèi)飼養(yǎng)能化蛹，受到白僵菌孢子懸浮液脅迫下部分蟲體通過提前化蛹來避免菌液對自身的影響。由圖1可知，在清水處理下，茶毛蟲在第5 d后進(jìn)行化蛹，第6 d全部化蛹；在105～106白僵菌孢子懸浮液濃度下，存活的部分茶毛蟲在第4 d化蛹，與清水相比，提前1 d。但隨菌液濃度增大，在大于108個孢子濃度下，茶毛蟲不能通過化蛹來躲避白僵菌的脅迫而死去。

表1 不同劑量的白僵菌菌液處理下茶毛蟲的累計校正死亡率Table 1 Cumulative corrected mortality of tea caterpillars treated with different doses of Beauveria tenella

圖1 不同濃度的白僵菌孢子懸浮液下茶毛蟲化蛹率的比較Fig. 1 Comparison of the rates of tea caterpillar pupation under different concentrations of Beauveria tenella spore suspension

3 結(jié)論與討論

白僵菌作為昆蟲病原真菌之一，能夠在自然條件下通過體壁接觸感染殺死多種農(nóng)林害蟲。本研究結(jié)果表明，白僵菌孢子懸浮液通過接觸蟲體感染茶毛蟲幼蟲后在蟲體萌發(fā)，達(dá)到致死幼蟲的作用。白僵菌孢子懸浮液處理的茶毛蟲幼蟲死亡率上升，隨著濃度增大半致死亡需要的時間逐漸縮短，致死率逐漸升高。1.0×107個孢子/mL濃度白僵菌孢子懸浮液在藥后第7 d茶毛蟲致死率達(dá)到50%，半致死亡時間為7 d；1.0×108個孢子/mL濃度半致死亡時間僅1 d，死亡率達(dá)到了61.11%，差異顯著。1.0×109個孢子/mL濃度處理的茶毛蟲處理后一天全部死亡，死亡率達(dá)到100%，推薦使用1.00×108個孢子/mL濃度防治茶毛蟲幼蟲。本試驗(yàn)結(jié)論為田間防治應(yīng)用濃度提供了一個初篩基礎(chǔ)，具體田間的應(yīng)用效果需要進(jìn)一步驗(yàn)證篩選。

在白僵菌孢子懸浮液脅迫下部分蟲體通過提前化蛹來避免菌液對自身的影響。在105～106白僵菌孢子懸浮液濃度下，存活的部分茶毛蟲在第4 d化蛹，與清水相比，提前1 d。但隨菌液濃度增大，在大于108個孢子濃度下，茶毛蟲不能通過化蛹來躲避白僵菌的脅迫而死去，說明茶毛蟲幼蟲自身存在抵抗白僵菌逆境脅迫的機(jī)制，有待進(jìn)一步明確。