淺談微生物檢驗常見誤差與質(zhì)量控制

王慧玲

摘 要：微生物檢查是生物制藥企業(yè)常規(guī)安全性檢查的重要組成部分。微生物限度檢查法方法驗證工作十分繁瑣，影響因素包括培養(yǎng)基、菌株、試驗步驟和供試品的制備方式等。本文從微生物檢查中常見誤差談起，提出質(zhì)量控制措施，供參考。

關(guān)鍵詞：微生物檢驗；影響因素；控制措施

微生物檢驗?zāi)軌驗槿藗兏腥拘约膊〉脑\斷和治療提供準(zhǔn)確的參考依據(jù)，在對微生物進(jìn)行檢驗的過程中，其步驟復(fù)雜，對檢測人員的操作精細(xì)度要求也較高，一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題很可能會使檢驗結(jié)果出現(xiàn)誤差，進(jìn)一步為患者的疾病診斷、治療帶來很大的不良影響。有效提高、微生物實驗室對各種檢驗樣品的檢驗質(zhì)量，進(jìn)而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，從而提高室的檢驗?zāi)芰σ约凹夹g(shù)水平。

1微生物檢查中常見誤差

1. 實驗者主觀因素及操作技能中的誤差

1.1. 無菌觀念淡薄。操作馬虎、隨意，容易造成供試品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡，從而不能真實的反映供試品的染菌情況。在檢驗過程中的每一個環(huán)節(jié)，每個空間，每個操作，每個工具及材料，沒滅菌者都是帶菌者，都會對檢驗結(jié)果產(chǎn)生不確定影響，因而應(yīng)牢固的建立無菌觀念。

1.1. 操作技能中誤差。操作不熟練，實驗條件控制不嚴(yán)格，細(xì)節(jié)不注意等都會造成損失。每次操作前的消毒處理必須徹底，不得留有死角，對實驗所用器具根據(jù)材料的性質(zhì)進(jìn)行相應(yīng)的滅菌；開啟供試品包裝的工具，如剪刀、砂輪等也應(yīng)消毒，實驗用的器具如吸管應(yīng)清洗干凈，滅菌，放液時不得接觸液面，每ml樣品必須放盡，否則影響細(xì)菌記數(shù)的準(zhǔn)確性；這些細(xì)小環(huán)節(jié)都有可能污染供試品的可能，使平皿染菌數(shù)增多，導(dǎo)致實驗誤差。

1. 操作環(huán)境不符合要求帶來的誤差

由于條件限制，一些單位的無菌室在設(shè)計上不符合要求，缺少傳遞箱或緩沖設(shè)備不健全，在操作中傳遞物品不方便，人員的頻繁走動增加了染菌機(jī)會。無菌操作臺或凈化工作臺要定期檢測其潔凈度，確保達(dá)到100級。潔凈級別及檢查方法通常采用塵粒數(shù)及浮游菌數(shù)或沉降菌數(shù)測定法，凈化工作臺中的高效及中效過濾器應(yīng)根據(jù)檢測情況，必要時及時換處理。這項工作在各單位檢驗工作中應(yīng)得到足夠重視，確保操作臺達(dá)到規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)。

1. 標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇和保存及管理不當(dāng)引起的誤差

微生物檢驗的質(zhì)量控制必須要有標(biāo)準(zhǔn)菌株并且其生物學(xué)特征必須典型穩(wěn)定，如形態(tài)變異、菌落變異，耐藥性變異等均可使平板中細(xì)菌呈叢集或分散不均。菌種保藏與管理應(yīng)有完整的程序，保藏的菌種必須具備該菌種的詳細(xì)歷史及有關(guān)資料。一般是首先填寫菌種卡片，登記菌種名稱編號，來源歷史，形態(tài)特征，生化與血清學(xué)鑒定，以及菌種傳代次數(shù)、最宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、保藏方法、貯存條件及保藏地址等。

1. 培養(yǎng)基靈敏度下降引起的誤差

干粉培養(yǎng)基使用較方便，但由于其極易吸潮，如存放不當(dāng)出現(xiàn)凝塊，則其凝固性較差，應(yīng)避免使用。新鮮配制的培養(yǎng)基應(yīng)在2℃～20℃避光保存，但不得凍結(jié)，保存時間不得過2周。硫乙醇鹽流體培養(yǎng)基儲存過程中，若氧化還原層超過1/5，須經(jīng)水浴加熱煮沸10min方可使用，但只限一次。否則可使培養(yǎng)基中糖、微生物和氨基酸受到破壞，影響質(zhì)量。

1. 滅菌方法不當(dāng)造成的實驗誤差

高壓消毒滅菌法是最常用最有效的滅菌方法，為了保證高壓滅菌的質(zhì)量確實達(dá)到高壓消毒的目的，首先要選擇合格的壓力蒸氣滅菌器，其次操作人員必需了解滅菌器的原理并遵守其操作規(guī)程，特別要排盡鍋內(nèi)的冷空氣，否則雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就可能不徹底。

微生物檢驗的質(zhì)量控制

開展對微生物檢驗的質(zhì)量控制，是實驗室內(nèi)部檢測的一項基礎(chǔ)工作，會直接影響到細(xì)菌學(xué)最終的檢測結(jié)果的可靠性以及準(zhǔn)確性。

2.1加強對微生物檢驗室質(zhì)量管理體系的質(zhì)量控制

質(zhì)量管理體系的建立關(guān)系到檢驗室各項大小工作的開展，因而必須加強對其的資質(zhì)認(rèn)定，即做好計量認(rèn)證工作，應(yīng)按照檢驗室相關(guān)的資質(zhì)認(rèn)定檢驗要求、評審準(zhǔn)則來切實做好各項工作，不斷完善以及有效運行此質(zhì)量管理體系。要按照實驗室的相關(guān)管理手冊要求，進(jìn)行正確的管理及使用各種設(shè)備儀器、藥品，及時發(fā)現(xiàn)存在的問題及解決，能隨著不斷發(fā)展的檢驗技術(shù)做及時地更新。此外，要明確每一個實驗室人員具體的崗位職責(zé)，并督促其堅決執(zhí)行。

2.2加強對微生物檢驗員的質(zhì)量控制

加強對檢驗員的質(zhì)控，首先應(yīng)為檢驗員提供學(xué)習(xí)專業(yè)知識的教育培訓(xùn)機(jī)會，定期派送人員到先進(jìn)的院校學(xué)習(xí)新理論、新技術(shù)等，定期安排檢驗員參加一些應(yīng)急演練和實際考核、對未知菌株進(jìn)行分離鑒定，以促使檢驗員對各種樣品的檢測能力。

2.3微生物檢驗分析全過程的質(zhì)量控制

2.3.1分析前的質(zhì)控

分析前的質(zhì)控包括：（1）填寫檢驗樣品的申請單。這個環(huán)節(jié)要求檢驗員如實地、詳細(xì)地填寫病患組基本的情況為臨床的診治提供相關(guān)依據(jù)。（2）病患的準(zhǔn)備工作。檢驗員結(jié)合患者實際情況，要求醫(yī)護(hù)人員提醒病患，在采集樣品標(biāo)本之前的準(zhǔn)備工作，如休息、飲食等方面。應(yīng)選擇在病患停藥或是治療前后的3天采集樣品標(biāo)本，利于避免藥物對檢測結(jié)果的影響。（3）標(biāo)本采集。標(biāo)本的采集工作關(guān)系到分析的結(jié)果。因而，檢驗員應(yīng)規(guī)范標(biāo)本采集的部位、時間、器具以及儲存等環(huán)節(jié)的工作。（4）標(biāo)本驗收。檢驗員應(yīng)仔細(xì)核對標(biāo)本的標(biāo)簽內(nèi)容是否符合檢驗申請單的內(nèi)容，詳細(xì)了解標(biāo)本的采集方法及送檢時間，檢查標(biāo)本的質(zhì)量是否達(dá)標(biāo)，且可根據(jù)檢驗?zāi)康淖龀鱿鄳?yīng)的處理。

2.3.2分析中的質(zhì)控

在對微生物檢驗的質(zhì)控中，應(yīng)制定行之有效且符合質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的管理文件。以為微生物檢驗質(zhì)量提供可控依據(jù)，嚴(yán)格記錄檢驗室日常的質(zhì)量記錄以及具體的操作流程，以及時發(fā)現(xiàn)不足之處并及時糾正，提高檢測的質(zhì)量。檢驗室設(shè)備的質(zhì)量方面，應(yīng)每日對冰箱等設(shè)備進(jìn)行使用監(jiān)控記錄。對于高壓滅菌器等儀器應(yīng)進(jìn)行定期保養(yǎng)、維修，并進(jìn)行記錄，以確保檢驗室各類儀器的正常運行。此外，還應(yīng)對培養(yǎng)基、抗血清以及試劑等進(jìn)行質(zhì)控。

2.3.3分析后的質(zhì)控

檢驗員要核實好化驗單內(nèi)容，保證病患資料無誤，從而為臨床診治提供依據(jù)，檢驗員應(yīng)仔細(xì)比較近期檢測結(jié)果和最終的檢測結(jié)果，分析各個參數(shù)之間的關(guān)系，便于對臨床資料進(jìn)行綜合地、科學(xué)地分析。嚴(yán)格按照報告單的審核制度，安排專人對報告單進(jìn)行統(tǒng)一接收、送達(dá)以及簽收。檢驗人員應(yīng)結(jié)合基礎(chǔ)理論知識，合理地、科學(xué)地規(guī)定標(biāo)本在檢測后的正確保存方法及時間，便于日后的信息資料復(fù)查及核對。

總之，影響微生物檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的因素是多方面的，通過提高檢驗人員素質(zhì)，嚴(yán)格規(guī)范操作流程，提高標(biāo)本質(zhì)量，能夠有效控制影響微生物檢驗結(jié)果的因素，從而提高微生物檢驗工作的質(zhì)量，保證微生物檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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（作者單位：山東潤澤制藥有限公司）