清熱除濕湯煎藥機標準化煎藥流程的建立

王金鋼 李照福* 王宏蕾 馬 園

（首都醫科大學附屬北京中醫醫院 藥學部，北京 100010）

清熱除濕湯是我院皮科經典常用方劑，具有清利濕熱，解毒涼血的功效，在臨床治療中應用廣泛、療效顯著，受到了醫師和患者的推崇。為方便患者攜帶與服用，我院推出利用中藥煎煮機煎煮的湯劑以供患者選擇服用。中藥湯劑的煎煮工藝對方劑的質量和療效發揮都具有重要作用，盡管清熱除濕湯應用時間較長，療效明確，但目前并沒有文獻對中藥煎煮機煎煮清熱除濕湯質量進行報道，為了保證清熱除濕湯代煎湯劑質量穩定可控，更好的發揮臨床療效，本著節能環保的目的，本試驗選取龍膽苦苷[1]、黃芩苷和湯劑浸出物含量為指標，采用正交試驗優選法確定清熱除濕湯的最佳煎煮工藝，為規范我院中藥煎煮機煎煮清熱除濕湯提供試驗依據。

1 儀器與材料

1.1 試驗儀器：HPLC儀（安捷倫-1100），天平（METTLER TOLEDO-XS205 DualRange），離心機（GT10-1）。

1.2 試驗材料：龍膽苦苷對照品（批號：110770-201314），龍膽草（批號：13030701），黃芩苷對照品（批號：110715-200514），中國食品藥品檢定研究院，黃芩（批號：13080402），中國食品藥品檢定研究院，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果[2]

2.1 色譜條件：色譜柱：Kromasi 100-5C18（250 mm×4.6 mm）；龍膽苦苷流動相：甲醇-水（30∶70），流速：1.0 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：254 nm，進樣量：10 μL；黃芩苷流動相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2），流速1.0 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：280 nm；理論塔板數應不低于3000。

2.2 標準溶液的配置：分別精密稱取干燥恒重的龍膽苦苷對照品0.00159 g置于25 mL的容量瓶和黃芩苷對照品0.00054 g置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.0636 mg/mL的龍膽苦苷對照品溶液和0.054 mg/mL的黃芩苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液：精密量取5 mL 清熱除濕湯湯劑置于25 mL容量瓶中，加水定容至25 mL，搖勻，精密量取5 mL置離心管內，緩慢加入甲醇5 mL，搖勻，靜置30 min，離心（6000 r/min，5 min），取上清液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液：分別精密稱生地黃、板藍根、白茅根、車前草、茯苓、生石膏制備煎液，按照2.3項下供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.5 系統適應性試驗：分別精密吸取龍膽苦苷和黃芩苷的陰性對照溶液、供試品溶液和對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，在1.1色譜條件下，記錄色譜圖，見圖1。可見龍膽苦苷保留時間為12.031 min，黃芩苷保留時間為27.832 min，供試品色譜圖中龍膽苦苷、黃芩苷色譜峰分別與前后色譜峰分離良好，且陰性無干擾，表明系統適應性良好。

圖1 不同溶液的HPLC圖

2.6 線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液1、3、5、7、10、13、15、17 μL，注入高效液相色譜儀，按照2.1色譜條件進行測定，以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，得出回歸方程，龍膽苦苷標準曲線方程為Y=86.579X-2.8383，R=0.999（公式：A=1443869.6M+7782.6，r=0.999）。結果表明，在0.0636～1.0812 μg范圍內，龍膽苦苷峰面積值與進樣量有良好的線性關系；黃芩苷標準曲線方程為：Y=115.74X-9.8585，R2=0.999，結果表明，在0.2701～0.9359 μg范圍內，黃芩苷峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

2.7 精密度試驗：按擬定的色譜條件取供試品溶液10 μL，測定龍膽苦苷和黃芩苷的峰面積，重復5次。結果，龍膽苦苷RSD =1.03%；黃芩苷RSD=1.23%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩定性試驗：取配制好的供試品溶液，按擬定色譜條件，分別在0、2、4、6、8 h進樣，測定峰面積值。結果，龍膽苦苷RSD=1.54%，；黃芩苷RSD=0.67%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.9 重復性試驗：按擬定的含量測定方法，取同一批樣品溶液，分別制備5份供試品溶液，測定龍膽苦苷的含量，結果RSD為1.89%；測定黃芩苷的含量，結果RSD為0.87%，表明本品重現性良好。

2.10 加樣回收率試驗：取已知含量的供試品，各6份，每份10 mL，精密量取5 mL，置10 mL 量瓶中，加入濃度為0.0636 mg/mL的龍膽苦苷和濃度為0.054 mg/mL的黃芩苷對照品各5 mL，放置1 h，同時振搖，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，按2.1色譜條件測定，計算回收率，龍膽苦苷為96.17%，RSD1.94%；黃芩苷為96.33%，RSD2.21%。見表2、3。

表6 正交試驗及結果

表2 龍膽苦苷加樣回收率試驗結果（μg）

表3 黃芩苷加樣回收率試驗結果（μg）

2.11 樣品含量的測定：取樣品，按擬定方法測定樣品中龍膽苦苷和黃芩苷的含量，測定結果為見表4（n=2）。

表4 龍膽苦苷、黃芩苷樣品含量測定結果

3 清熱除濕湯煎煮的正交試驗[3]

3.1 正交試驗設計：以龍膽苦苷、黃芩苷2種成分為指標，選取浸泡時間、煎煮時間因素，進行了兩因素、三水平正交試驗，因素與水平見表5。

表5 正交試驗設計表

3.2 正交試驗及其結果：根據“2.3”項下的樣品制備方法，分別按表5中的9組條件進行正交試驗，制備9組藥品每組平行3份，并在“2.1”項色譜條件下分別進樣分析，測定指定的2種有效成分的含量。同時按照《中華人民共和國藥典》（2015版）附錄中干浸膏測定法（補充），測定浸出物含量，計算平均值。結果見表6。

由正交實驗中的2種有效成分分別進行測定，結合浸出物結果共3項考察指標，因此選用綜合加權評分法對試驗結果進行方差分析。設定滿分為100分，其中浸出物含量能夠反應全方位質量，故權重系數為40，龍膽苦苷、黃芩苷此2種有效成分權重系數分別是30，綜合以上數據進行綜合加權評分，將得分結果帶入到正交試驗表中，見表7。

根據表6結果用正交試驗助手進行方差分析，結果見表7。分析結果表明，浸泡時間這個因素的F值為5.599，P值＜0.05；煎煮時間這個因素的F值為5.872，P值＜0.05，每個因素自身條件下都存在顯著差異。浸泡時間、煎煮時間2個因素無顯著統計學差異。

表7 方差分析表

根據試驗結果分析，綜合極差和方差分析，同時考慮到具體工作中煎藥的可操作性，確定清熱除濕湯的最佳煎煮機煎煮工藝為A3B2，即浸泡60 min，煎煮45 min。

4 討 論

不同藥味、不同劑量組成的處方，其浸泡時間、煎煮時間都有所不同。必須根據藥物的性質，劑量進行優化選擇。《傷寒論》中張仲景根據不同的方劑，運用多樣的煎煮方法以取得好的臨床療效[4]。由此可見，煎藥質量關乎著醫師治病的治療效果，因此需要科學、嚴謹、認真的對待。

清熱除濕湯中君藥有龍膽草、黃芩等，研究表明，龍膽草中龍膽苦苷具有利膽、抗炎、健胃、降壓的藥理作用，黃芩中黃芩苷具抑菌、利尿、抗炎、降膽固醇、抗血栓形成、緩解哮喘、瀉火解毒、止血、安胎、抗變態反應及解痙作用的藥理作用。因此本實驗采用正交試驗方法，以龍膽草中的龍膽苦苷，黃芩中的黃芩苷和浸出物含量為指標進行綜合評價，優選了清熱除濕湯的最佳中藥煎煮機煎煮工藝組合A3B2，即清熱除濕湯浸泡60 min，煎煮45 min。

本研究采用正交試驗法對清熱除濕湯的中藥煎煮機煎煮工藝參數進行考察，希望以此對本院其他不同代煎處方的質量標準制定提供參考，并為代煎處方的標準化操作規范的起草提供數據基礎。