霉菌性陰道炎患者體內真菌分布、T淋巴細胞及相關細胞因子水平變化特點及意義

雷　放，宋　玲

在35～45歲的育齡期女性中，霉菌性陰道炎的發病率呈顯著的上升趨勢[1]。流行病學研究證實，霉菌性陰道炎的發病率可達272/10萬～372/10萬，同時在長期使用抗生素的人群中，其發病率顯著增加[2]。越來越多的研究顯示，免疫細胞功能紊亂或者自身免疫因子的紊亂，是促進霉菌性陰道炎患者病情進展的重要因素[2]。CD3+、CD4+T淋巴細胞的激活，能夠誘導抗原提呈表位的激活，促進自身T淋巴細胞免疫力的激活和維持，降低陰道內病原體感染的風險；CD8+T淋巴細胞的激活，能夠直接分泌相關效應因子，增加自然殺傷性T淋巴細胞的細胞毒性作用，促進霉菌等病原體的清除[3-4]。為了進一步揭示不同的T淋巴細胞亞群及其分泌的細胞因子在霉菌性陰道炎中的作用，本次研究選取2017年1月—12月在我院治療的霉菌性陰道炎患者182例，探討霉菌性陰道炎患者T淋巴細胞及相關效應因子的水平、意義，從而為臨床霉菌性陰道炎的診療和復發的預防提供參考。

1　對象與方法

1.1 對象 選取2017年1月—12月在成都市第二人民醫院治療的霉菌性陰道炎患者182例（觀察組）。納入標準：①符合霉菌性陰道炎診斷標準（外陰灼痛白帶量多，呈凝乳狀或豆腐渣樣，分泌物光鏡下可觀察到芽生孢子及假菌絲）；②患者知情同意。排除標準：①合并有免疫缺陷疾病，糖尿病，肺結核，惡性腫瘤，嚴重肝、腎疾病等；②近1個月內使用過抗生素、糖皮質激素者；③妊娠期或哺乳期；④合并其他病原菌感染，如淋球菌等。同時選取女性健康志愿者110例作為對照組，2組受試者一般資料比較差異無統計學意義（P均＞0.05）。見表1。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between 2 groups

1.2 材料 Bio-Bad全自動酶標儀購自美國飛利浦公司；IL-2、IL-4和IL-10抗體試劑盒購自南京建成生物工程研究所；TNF-α、INF-γ抗體試劑盒和流式細胞抗體購自羅氏檢測公司；FACS流式細胞計數儀器購自美國ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 病原菌培養及檢測 用一次性毛刷采集患者的陰道分泌物，嚴格按照全國性的臨床標本采集操作規程進行標本的采集和培養，采用南京伯塞康公司生產的真菌快速檢測卡進行檢測，檢測卡由黃色變為紅色為陽性。

1.3.2 T淋巴細胞及細胞因子檢測 采用化學發光法檢測IL-2、IL-4和IL-10。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測TNF-α和INF-γ；采用流式細胞技術檢測CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細胞。

1.4 統計學處理 統計分析采用SPSS 19.0軟件，計量資料采用±s表示，組間年齡、體質量指數、T淋巴細胞、細胞因子比較用成組t檢驗（組間方差齊），P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結　果

2.1 病原菌檢測結果 182例患者陰道分泌物的真菌培養結果顯示病原菌分布以白色念珠菌為主，占43.41%。見表2。

表2 真菌菌群分布Table 2 Distribution of fungal flora

2.2 2組陰道分泌物T淋巴細胞比較 觀察組陰道分泌物中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細胞水平明顯低于對照組（P均＜0.05）。見表3。

表3 2組陰道分泌物T淋巴細胞比較（%）Table 3 Comparison of T lymphocytes in vaginal secretion of 2 groups(%)

2.3 2組陰道分泌物細胞因子比較 觀察組陰道分泌物IL-2、TNF-α和INF-γ明顯低于對照組（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明顯高于對照組（P均＜0.05）。見表4。

2.4 觀察組不同患者T淋巴細胞及細胞因子比較 觀察組中有26例患者為復雜性霉菌性陰道炎（反復發作）。復雜性霉菌性陰道炎患者陰道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明顯低于普通霉菌性陰道炎患者（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明顯高于普通霉菌性陰道炎患者（P均＜0.05）。見表5。

3　討　論

長期使用抗生素、不潔性生活、自身免疫力下降等，均能夠導致霉菌性陰道炎的發生。特別是自身免疫力的改變，能夠增加霉菌感染的機會，降低陰道對于霉菌的清除能力[5]。霉菌性陰道炎的長期進展，能夠增加宮頸病變的發生風險，導致繼發性的人乳頭瘤狀病毒感染風險的增加[6-8]。近年來越來越多的隨訪研究顯示，霉菌性陰道炎患者局部陰道內的免疫細胞或者免疫因子的改變是導致患者治療敏感性下降及治療后復發的重要因素。免疫細胞的功能紊亂，能夠使霉菌對于陰道黏膜屏障的突破作用的增強，并增加其過度繁殖引起的陰道內菌群紊亂的發生率[9]。

本次研究中通過對陰道分泌物的培養發現，不同類型的真菌感染均能夠促進霉菌性陰道炎的發生，其中以白色念珠菌的感染比例最高。臨床上對于霉菌性陰道炎患者，應早期使用針對白色念珠菌較為敏感的氟康唑或者咪康唑等抗真菌藥物；對于長期使用抗真菌藥物后病情反復，或者抗真菌治療效果不佳時，可以考慮進行細菌培養和藥物敏感試驗，根據試驗結果進行抗真菌藥物的調整。

同時本研究發現，霉菌性陰道炎患者陰道分泌物中，CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細胞百分比均明顯減少。CD3+、CD4+T淋巴細胞的下降提示陰道內環境對于霉菌等病原體的抗原提呈作用不足，失去了其誘導下游T淋巴細胞免疫效應因子激活的能力。而CD8+T淋巴細胞的下降則影響自然殺傷性T淋巴細胞或者巨噬細胞的活性，導致其抵抗外來病原體或者吞噬殺傷霉菌能力的下降。龔婭婷等[9]報道了在霉菌性陰道炎患者中，陰道分泌物中的CD3+、CD4+T淋巴細胞可平均下降20%以上，同時霉菌性陰道炎患者的病程越長，陰道炎癥狀表現越為嚴重，CD3+、CD4+T淋巴細胞的下降越為明顯。但須要注意的是，部分研究者認為CD8+T淋巴細胞百分比在霉菌性陰道炎患者中可顯著的上升，與本次研究存在一定的差異。這主要由于霉菌性陰道炎患者既往可能有不同的治療病史，同時與相關研究T淋巴細胞的檢測時機的不同等有關。IL-2和IFN-γ是Th1淋巴細胞分泌的細胞因子，其能夠穩定T淋巴細胞的功能，降低因為CD4+T淋巴細胞功能過度活化導致的免疫性損傷[10-11]。IL-4、IL-10是Th2淋巴細胞分泌的細胞因子，IL-4、IL-10能夠直接誘導下游TNF的激活，提高對病原體的吞噬能力[12]。穩定的Th1/Th2免疫功能的平衡對于提高患者的抵抗力，降低感染的風險均具有重要的價值[13-14]。本研究中IL-2和INF-γ的表達濃度明顯下降，而IL-4和IL-10表達濃度明顯上升，提示了Th1/Th2淋巴細胞免疫平衡的右移和紊亂，進一步提示了T淋巴細胞功能紊亂與霉菌性陰道炎的關系。復雜性霉菌性陰道炎患者陰道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明顯下降，而IL-4和IL-10水平明顯的上升，提示了在復雜性霉菌性陰道炎患者中，相關淋巴細胞免疫紊亂的表現更為明顯，這也表明淋巴細胞免疫功能的紊亂是影響陰道炎患者病情復發的重要因素[15]。

表4 2組陰道分泌物細胞因子比較（pg/ml）Table 4 Comparison of cytokines in vaginal secretion of 2 groups(pg/ml)

表5 觀察組不同患者T淋巴細胞及細胞因子比較Table 5 Comparison of T lymphocytes and cytokines in different patients of the observation group