精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）穩定性研究

梅麗，蔣玲，楊樺，栗鳳娟

（江蘇萬邦醫藥科技有限公司，江蘇徐州 221004）

2型糖尿病（T2DM）是由生活方式或遺傳因素導致的一種內分泌代謝疾病，近年來發病率呈上升趨勢[1-2]。精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）含有25%的可溶性重組賴脯胰島素（速效）和75%的精蛋白鋅重組賴脯胰島素，皮下吸收速度更加迅速，滿足餐后胰島素的需要。

與魚精蛋白結合的重組賴脯胰島素釋放緩慢，作用時間延長，可以替代基礎分泌[3]。林旋等人的研究發現精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）可明顯改善2型糖尿病患者血糖代謝，增強其免疫功能，減輕炎癥反應，從而降低其心血管事件的發生[4]。張宏穎等的研究結果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）能較好地控制餐后血糖，無嚴重的低血糖事件發生，具有較好的安全性。注射時間非常靈活，進餐即打針，患者使用更加方便[5]。

目前大量研究表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R，商品名優泌樂25）在臨床治療2型糖尿病安全、方便、有效，值得臨床推廣應用[6]。所以研究精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液在臨床使用過程中的穩定性具有非常重要的意義。

1 儀器與試藥

儀器：島津20A高效液相色譜儀。

標準品：賴脯胰島素對照品（批號：140729-200501，中國藥品生物制品檢定所）。

參比制劑：優泌樂25（批號：C572223，Eli Lilly Italia S.p.A公司）。

樣品：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R），產自江蘇萬邦生化醫藥集團有限責任公司，批號為B201608504、B201609501、B201609502。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.2mol/L硫酸鹽緩沖液-乙腈（74∶26）；柱溫：40℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：214 nm；進樣器溫度：5℃；進樣量：20 μL。

2.2 系統適用性

取賴脯胰島素對照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1mL中含1mg溶液，放置，使A21脫氨賴脯胰島素含量為0.8%～11.0%。在上述色譜條件下，重組賴脯胰島素主峰與A21脫氨賴脯胰島素峰之間的分離度不小于3.0，重組賴脯胰島素主峰的拖尾因子不大于1.5。該色譜條件用于含量測定，按外標法以賴脯胰島素峰與A21脫氨賴脯胰島素峰面積之和計算。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取賴脯胰島素對照品適量，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1mL中含20單位的溶液，作為對照品溶液。

2.4 檢測方法及結果

每批樣品分別取12支，分為6組（2支/組）進行試驗。按照筆式注射器及筆芯使用說明書緩慢顛倒或滾動筆芯至規定次數，將筆芯和注射器針頭正確安裝于胰島素筆式注射器上，排出筆芯中的氣泡后，正確設置注射劑量為30 IU（d1～d9，模擬臨床中患者用法與用量，按照體重75 kg，0.4 IU/(kg·d)的給藥劑量計算），并注射出藥液，取下注射器針頭，將上述裝有筆芯的筆式注射器于室溫下避光靜置。每24 h重復上述操作，分別在d1、d3、d6、d9收集注射出的藥液至容器中，并迅速用微量移液槍快速精密吸取兩份200 μL藥液備用。按照上述方法注射至行程終點前15 IU處（預實驗測定），放置24 h，將筆式注射器及筆芯緩慢顛倒或滾動筆芯規定次數，推注藥液至行程終點，用微量移液槍從容器中快速精密吸取200 μL藥液，用于剩余藥液混勻后的檢測。

取200 μL藥液，加入0.99 mol/L鹽酸溶液6 μL，振搖使其完全澄清，用0.01mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1mL中含20單位的溶液，作為供試品溶液。取200 μL藥液與0.1 mol/L 200 μLTris-鹽酸緩沖液[pH 8.2，(25±1)℃ ]，混合，振搖，(25±1)℃放置 1 h，用0.2 μm微孔濾膜濾過，取濾液，每1 mL加入0.99 mol/L鹽酸溶液15 μL，作為可溶性賴脯胰島素供試品溶液。

2.5 檢測誤差分析

本研究選取江蘇萬邦醫藥科技有限公司生產的三批精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）和禮來公司的優泌樂25，按照使用說明書，模擬臨床注射操作，選擇注射劑量為30 IU，并且選取了患者單次注射劑量100 μL(即10 IU) 作為小樣本量待測樣品溶液的體積。孫雪等研究發現，小樣本量法及大樣本量法檢測同批次預混注射液，結果無顯著區別，并符合方法學驗證的要求[7]，因此本次研究可以真實反映每只筆芯的實際含量。

本研究中的注射行程終點是依據萬邦筆的使用說明書而確定。選取注射至行程終點前15 IU處作為剩余藥液的混勻體積，以考察玻璃珠在筆芯內的運動空間減小后，樣品中的重組賴脯胰島素含量和可溶性重組賴脯胰島素是否穩定和符合規定。結果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在使用過程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素沒有顯著差異，并且含量和可溶性賴脯胰島素均符合質量標準要求（90.0%～105.0%與15.0%～30.0%），因此，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在使用中和使用終末期可保證成分充分混勻。

由于本實驗的溫度僅是模擬臨床使用藥常見的使用和保存溫度，不能代表其他特殊溫度條件，患者在使用過程中嚴格按照使用說明書操作時可以完全保證藥品的質量。

在可溶性重組賴脯胰島素的檢測過程中，通過向藥液中加入Tris緩沖液，可以使部分與魚精蛋白物理吸附的可溶性重組賴脯胰島素達到解吸附的效果。混懸液中的晶體大小為1～20 μm，通過0.2 μm濾膜可將其完全濾過，因此檢測結果準確可靠。

表1 精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）使用過程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素的檢測結果

3 結論

隨著精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在臨床中的廣泛應用，已經有不少學者研究其在臨床應用中的療效，但對筆芯質量控制及檢測使用中的筆芯質量還沒有見報道[8-11]。本實驗模擬臨床使用精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）的操作及室溫保存條件，運用高效液相色譜法測定胰島素含量，考察其在使用過程中的變化，為臨床開啟預混胰島素注射液后正確使用和保存提供依據。

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