高效液相色譜法測定苯甲酸鈉中鄰苯二甲酸含量

李顯文，張琪

（武漢有機實業有限公司，湖北武漢 430000）

苯甲酸鈉（化學式C6H5COONa）又名安息香酸鈉，無臭或微帶安息香氣味，易溶于水。苯甲酸鈉是食品中常用的防腐劑，對酵母菌、霉菌及部分細菌作用效果很好，防腐效果在pH 2.5～4.0最好[1]。苯甲酸鈉價廉易得，有很好的防腐抑菌效果[2]，在世界各國均被廣泛使用，也用于醫藥工業和植物遺傳研究，染料中間體、殺菌劑。我國GB 2760-2011《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》明確規定了21類食品中苯甲酸及苯甲酸鈉最大使用量，除此之外食品不允許添加苯甲酸和苯甲酸鈉作為防腐劑[3]。苯甲酸鈉中的鄰苯二甲酸鈉在使用環境是酸性時轉化為鄰苯二甲酸，而鄰苯二甲酸又可以與醇類作用生成鄰苯二甲酸酯類，此物質可干擾機體內分泌系統，具有類雌激素作用和抗雄性激素作用[4]，嚴重危害人體健康。在我國的食品分析檢測中，HPLC逐漸作為常用的高通量，高靈敏分析手段，承擔著越來越重要的作用[5]。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

安捷倫高效液相色譜儀1260LC（紫外檢測器，VWD），超純水機（武漢品冠儀器設備有限公司），色譜柱（Wakopak ，Handy ODS，250 mm×4.6 mm×5 μm）。

1.2 試劑

冰乙酸（HPLC級，西隴化工股份有限公司），甲醇（HPLC級，TEDIA），鄰苯二甲酸（基準試劑，天津市光復精細化工研究所）。

1.3 玻璃儀器

1 mL、5 mL、10 mL移液管，100 mL、25 mL容量瓶。

2 方法

2.1 色譜條件

流動相/溶劑（693 mL超純水，300 mL甲醇，7 mL冰乙酸）；檢測波長：228 nm；流速：1 mL/min；柱溫：50 ℃；進樣量：20μL；等度沖洗，分析時間40 min；計算方法：外標法（峰面積）。

2.2 實驗部分

2.2.1 線性相關性

標準溶液儲備液：稱取鄰苯二甲酸標準樣品0.1 g左右，加少量溶劑，超聲2 min使溶解，冷卻至室溫，用溶劑定容至100 mL。

標準工作溶液：將標準溶液儲備液取不同的體積并稀釋成6個不同濃度的標準工作溶液，并測試，每個標準工作溶液測試2次。

2.2.2 回收率試驗

分別配制3個不同濃度的溶液，每個溶液測試3次。

2.2.3 系統適用性

苯甲酸鈉溶液：稱取苯甲酸鈉樣品0.5 g，加少量溶劑，超聲2 min使溶解，冷卻至室溫，用溶劑定容至25 mL，上機測試。

3 結果

3.1 線性相關性

標準溶液儲備液：稱取鄰苯二甲酸標準樣0.104 6 g，加少量溶劑，超聲2 min使溶解，冷卻至室溫，用溶劑定容至100 mL，濃度為1 046 mg/L。

標準工作溶液配制方法及檢測結果見表1。

對濃度和峰面積進行線性處理，得到其關系為：

圖1 鄰苯二甲酸濃度和峰面積關系圖

濃度和峰面積的關系為Y=50.456X+36.811（Y為峰面積，X為濃度），回歸曲線的校正系數0.9996＞0.990，線性關系良好，符合要求。

3.2 回收率試驗

溶液的配制方法及結果見表2。

回收率的平均值為99.07%，回收率在80%～120%，回收率相對標準偏差（RSD）為0.92%（n=9）

3.3 系統適用性

將苯甲酸鈉溶液測試，結果如圖2所示。

圖2 系統適用性典型圖譜

鄰苯二甲酸保留時間是6.225 min，苯甲酸鈉的保留時間是14.929 min，鄰苯二甲酸的對稱因子是1.32，塔板數達7 662，鄰苯二甲酸和苯甲酸鈉的分離度為7.00，均符合要求（分離度R＞1.5）。

表1 標準工作溶液的配制方法及檢測結果

表2 回收率試驗溶液配制方法及檢測結果

3.4 檢測限與定量限

取標準溶液儲備液，按倍比稀釋法稀釋，以信噪比（S/N=3）時相應的濃度為檢測限；以信噪比（S/N=10）時相應的濃度為定量限[6]。結果顯示，鄰苯二甲酸的檢測限為0.47 mg/L，定量限為1.64 mg/L。

4 結論

綜上，鄰苯二甲酸的平均回收率為99.07%，回收率的相對標準偏差為0.92%，回歸曲線校正系數0.9996，鄰苯二甲酸與苯甲酸鈉的分離度為7.0；均符合回收率80%～120%，回收率的相對標準偏差≤10%，回歸曲線校正系數≥0.990，分離度大于1.5的要求；說明該高效液相色譜法檢測苯甲鈉中鄰苯二甲酸的含量準確可靠，靈敏度高。

[1]沈裕生,林瑋.果汁保存技術探討[J].鄭州輕工學院學報(自然科學版),1998(2):54-57.

[2]李丹花,岳丹,喬莉娟,等.苯甲酸鈉對新鮮果汁保鮮效果研究[J].湖北農業科學,2014,53(15):3594-3596.

[3]李菊,劉淑君,黃雪琳.苯甲酸和苯甲酸鈉安全性與檢測方法研究進展[J].糧食與油脂,2002(9):49-51.

[4]鞏玉紅.鄰苯二甲酸酯類增塑劑的應用及危害[J].山東化工,2011,40(5):93-95.

[5]張健泓.陳優生.高效液相色譜法概論[J].中國醫藥導報,2008(5):28-29.

[6]姚枝玉.吳秋娟,董靜,等.陰離子交換高效液相色譜法測定3-硝基鄰苯二甲酸中雜質4-硝基鄰苯二甲酸,鄰苯二甲酸的含量[J].藥學與臨床研究,2015,23(1):30-33.