黃精多糖的提取及抗氧化作用的研究

方歡樂，李曉明，李秋全，王麗

（西安培華學院醫學院，陜西西安 710125）

隨著時代的發展，老齡人口不斷增長，人們的生活伴隨著更多的壓力，更多的人患上了慢性疾病、免疫疾病等[1]。因此，人們更關注健康和長壽的問題。黃精有很多功能，一般多用于疲倦乏力、肺虛干咳、解熱消渴等[2]。黃精的主要活性成分有糖類、甾體皂苷、黃酮、蒽醌類化合物、氨基酸和微量元素等[3]。黃精在臨床上的應用較多，其主要活性成分就是黃精多糖（Rhizomapolygonatum polysaccharide）[4]。黃精多糖具有抗氧化、降抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗病毒的、抑制癌細胞、保肝等作用[5-6]。文章研究了黃精多糖的提取方法及其抗氧化功效，對黃精多糖在醫藥行業、保健品方面以及在疾病的預防和治療中有現實意義，為黃精多糖的開發提供一定的實驗數據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

YP102N電子天平、RE-52AAA旋轉蒸發器、DZF型真空干燥箱、SHB-III循環水式多用真空泵、752型紫外可見分光光度計、G-26C高速離心機。

1.2 動物

昆明種雄性大鼠，購于西安交通大學動物中心，動物的質量合格證號：SCXK(陜)2010-001。

1.3 藥品

黃精粗粉（產自漢中勉縣）、濃硫酸、葡萄糖、無水乙醇、蒸餾水、3%氫氧化鈉溶液、活性碳、30%鹽酸、異丙腎上腺素（美國Sigma公司）、蒸餾水、生理鹽水、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），其他為分析純。

2 實驗方法

2.1 黃精多糖的提取

黃精多糖的提取參照文獻提取方法進行[7]，黃精粗粉100g，過60目篩，加入1500mL3%NaOH溶液過夜后，過濾，將濾渣再加3%NaOH（加入量為濾渣的2倍）溶液過夜。然后過濾，合并上清液調pH至中性（要迅速，否則會破壞多糖的結構），旋轉蒸發濃縮至原溶液體積1/4，濃縮時溫度必須控制在70～80℃，鹽酸除蛋白調至pH為3，靜置除去沉淀，濃縮，加無水乙醇（無水乙醇加量為濃縮液體積的4倍）沉淀，用蒸餾水洗滌、溶解沉淀，過濾除去不溶雜質。真空干燥黃精多糖，得到純多糖。

2.2 黃精多糖的含量測定

2.2.1 葡萄糖標準溶液的測定

用分析天平稱取葡萄糖干燥標準品0.1002g，然后將葡萄糖放入100mL容量瓶內，再加蒸餾水溶解，最后稀釋至刻度即可，攪勻以后，取上述配制好的葡萄糖溶液10mL稀釋至50mL于容量中，留作標準液。把配制好的葡萄糖標準溶液分別量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8mL，然后依次置于10mL具塞試管中，再將蒸餾水加入，使各管中的總體積至2mL即可，再將1.0mL的6%苯酚溶液依次加入各管，充分攪拌混勻后，迅速加入5.0mL濃硫酸（加濃硫酸時把移液管放于試管正上方）溶液，混勻，放置等待5min，在沸水浴中加熱15min后，取出冷卻即可。再取2.0mL蒸餾水作為對照組，和上述操作相同，加入各溶液，最后將所有溶液在490nm下測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線如圖1所示。得回歸方程y=7422x+0.2607，R2=0.797。

圖1葡萄糖溶液標準濃度曲線圖

2.2.2 多糖含量的測定

用移液管量取黃精多糖溶液1mL，按照上述葡萄糖標準溶液的測定方法，再用同樣的方法測定黃精多糖的吸光度，運用公式計算樣品中多糖的百分含量：

多糖含量(%)=C·D·F/W

公式中，C為供試液中葡萄糖的濃度（mg/mL）；D為供試液中黃精多糖溶液的稀釋倍數，F為換算因子，W為供試品的質量（mg）。測得供試液中的黃精多糖的吸光度A=1.907，由曲線方程A=7422C+0.2607可得C=0.0002499mg/mL。多糖的含量（%）=C·D·F/W=88.7%。

2.3 黃精多糖對心肌肥厚大鼠抗氧化作用研究

2.3.1 大鼠心肌肥厚的模型

采用異丙腎上腺素皮下注射建立心肌肥厚的大鼠模型，給藥劑量選取5mg/kg.d，皮下注射連續給藥7天。

2.3.2 分組及給藥

32只大鼠，隨機分成4個組，每組放8只大鼠，并對每組大鼠做好標記。分別為對照組、模型組、黃精多糖高劑量組（0.72g/kg）、黃精多糖低劑量組（0.27g/kg）。給ISO后隔40min在給黃精多糖，連續給黃精多糖治療二十天。

2.3.3 大鼠血液中SOD活性和MDA含量測定

大鼠稱重，然后依次進行眼球取血，將血液放置于離心機中，3600r/min, 離心15分鐘，取上清液，采用黃嘌呤氧化酶法在550nm處測定SOD含量，用硫代巴比妥酸法在532nm處測定MDA含量。

3 實驗結果

心肌肥厚大鼠的體內抗氧化作用影響的實驗結果見表1。從表1中可以看出，ISO組大鼠血液中的SOD含量明顯下降、MDA含量明顯增加。而黃精多糖高劑量組較ISO誘導的大鼠血液中的SOD含量升高、MDA含量降低,與異丙腎上腺素模型組相比具有統計學意義（P＜0.05）。

表1 心肌肥厚大鼠的體內抗氧化作用影響（x-±s）

4 結論

本實驗運用了堿提醇沉法，提取多糖濃度相對比較高多糖比較純的。但是用堿溶液提取濃縮時一定不能溫度過高，否則會破壞多糖的結構。在調pH時要迅速，稀堿易使多糖發生糖苷鍵的斷裂，部分多糖發生水解，可溶性雜質也隨之浸出，為了提高稀堿提取的黃精多糖的純度，本實驗用了鹽酸脫蛋白法。測定 SOD活性和 MDA含量可間接反映氧化應激的程度[8]。本研究顯示ISO誘導的心肌肥厚模型中，大鼠血液中MDA含量明顯增加，SOD含量降低。用黃精多糖后發現血液中SOD活性增加，MDA含量降低。表明了黃精多糖具有一定的抗氧作用，提示黃精多糖對心肌肥厚可能有一定的改善作用。

[1]梁引庫.黃精多糖提取工藝的研究[J].中國農學通報,2012,28(12):269-272.

[2]薛丹,黃豆豆,黃光輝,等.植物多糖提取分離純化的研究進展[J].中藥材2014,37(1):157-161.

[3]周桃英,陳年友,陳中建,等.超聲波-微波協同法提取黃精多糖工藝研究[J].江蘇農業科學,2013,41(6):231-233.

[4]張庭延,胡威,汪好芬,等.九華山黃精多糖的分離純化及化學表征[J].食品科學,2011,32(10):48-51.

[5]夏曉凱,張庭廷,陳傳平.黃精多糖的體外抗氧化作用研究[J].湖南中醫雜志,2006,22(4):90,96.

[6]陸建平,張靜,張艷貞,等.黃精多糖的功能活性及應用前景[J].食品安全質量檢測學報,2013,4(1):273-278.

[7]趙瑞萌，孫庭閣，張玲.堿法提取黃精多糖及提取工藝流程的優化[N]，泰山醫學院學報，2010,(01).

［8］ 鮑探. 靈芝孢子粉對帕金森病大鼠氧化應激反應和神經炎癥的影響［J］實用藥物與臨床，2014,17(4):402-404.