巴戟天寡糖對大鼠子宮缺血再灌注損傷的抗氧化作用*

程亮星

(鄭州大學第一附屬醫院《腫瘤基礎與臨床》編輯部，河南 鄭州 450052)

婦科腫瘤的手術、外傷，以及子宮移植均可能出現子宮缺血再灌注損傷，這一生物學現象可能會對子宮造成嚴重的不可逆性損傷[1]。如何減輕子宮缺血再灌注損傷、研發保護性藥物成為婦產科學的研究熱點。巴戟天寡糖(morinda officinalis oligose，MOO)提取自中藥巴戟天的肉質根，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡的作用[2]。本研究采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型，探討巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷的抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 動 物

50只SPF級健康雌性Wistar大鼠，均為6月齡，體質量(378±23)g，購自河南省實驗動物中心，并飼養于該中心，動物合格證號為SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

巴戟天寡糖由河南大學藥學院提取，具體方法參考文獻[2]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase，CAT)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)、過氧化脂質(lipid peroxides，LPO)及考馬斯亮蘭試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所，批號分別為20150723，20150715，20150713，20150720，20150728，20150717；其他試劑均為國內分析純。

1.3 動物分組與給藥方法

將50只大鼠隨機分為假手術組，模型對照組，巴戟天寡糖低、中、高劑量組5組，每組10只。巴戟天寡糖低、中、高劑量組按體質量依次給予質量分數70，140，280 g/L巴戟天寡糖液10 μL/g灌胃，假手術組和模型對照組按體質量給予10 μL/g雙蒸水灌胃，1 d 1次，連用7 d。

1.4 大鼠子宮缺血再灌注損傷模型的建立

各組大鼠末次給藥后1 h采用線栓法制備大鼠子宮缺血再灌注損傷模型[2]：以質量分數10 g/L的戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)腹腔注射麻醉，腹部正中切口，經大隱靜脈注射50 u/kg肝素鈉后，鈍性分離腹主動脈，在髂總動脈分叉處上0.5 cm處結扎腹主動脈(假手術組大鼠僅穿線，不結扎)，結扎30 min后，解除結扎線，復灌60 min，經戊巴比妥鈉過量麻醉致死，取出子宮于-80 ℃冰箱中保存。

1.5 檢測指標

每例子宮標本稱取100 mg制成生理鹽水勻漿，4 ℃、4 000 r/min離心15 min，取上清液，檢測其SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平。SOD用黃嘌呤氧化酶法，GSH-Px用5,5-雙硫代對硝基苯甲酸顯色法，CAT用鉬酸銨法，MDA和LPO用硫代戊巴比妥法，總蛋白量檢測用考馬斯亮蘭法。

1.6 統計學方法

2 結 果

與假手術組對比，模型對照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，MDA、LPO水平升高，差別有統計學意義(P<0.05)。與模型對照組對比，巴戟天寡糖3個劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，MDA、LPO水平降低，差別有統計學意義(P<0.05)。巴戟天寡糖3個劑量組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對比，差別均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

組 別SOD/(u·mg-1)GSH-Px/(u·mg-1)CAT/(u·mg-1)MDA/(nmol·mg-1)LPO/(nmol·mg-1)假手術組172.86±6.85 62.96±3.32 107.01±4.491.99±0.293.32±0.45模型對照組127.73±3.05**38.10±3.04**75.92±3.68**3.89±0.37**7.90±0.54** 巴戟天寡糖高劑量組156.02±7.17##53.79±2.27## △△97.40±3.45## △△2.46±0.23##△△4.47±0.36##△△ 巴戟天寡糖中劑量組145.38±3.63##△△48.92±2.80##89.11±2.57##2.855±0.16##5.04±0.39## 巴戟天寡糖低劑量組137.01±5.84##△△ **43.89±2.35##△△ **85.62±3.59##△△ **3.17±0.70##△△ **6.09±0.75##△△ **F98.449116.537106.95966.396112.752P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：與假手術組對比，**P< 0.01；與模型對照組對比，##P< 0.01；與巴戟天寡糖高劑量組對比，△△P< 0.01；與巴戟天寡糖中劑量組對比，＊＊P< 0.01

3 討 論

子宮缺血再灌注損傷常見于婦科腫瘤切除術、子宮移植術和子宮受外傷后。有研究[3-4]證實，氧化損傷、鈣超載、細胞凋亡、免疫功能異常等均參與了其整個病理生理過程，任一環節被干預或阻止均有可能減輕子宮缺血再灌注損傷的程度。巴戟天寡糖已經被證實能夠通過減輕過氧化損傷、清除自由基、減輕細胞凋亡，以及改善其能量代謝等來保護缺血再灌注損傷的腦、心臟、腎臟組織[5-6]。這提示巴戟天寡糖也可能對子宮缺血再灌注損傷具有保護作用。SOD、GSH-Px、CAT均為抗氧化酶類，正常機體內具有一定水平的SOD、GSH-Px、CAT，發揮著保護生物膜完整性的作用，對體內過氧化具有對抗作用，在自由基過剩時能夠通過清除自由基來保護正常機體組織免受過氧化損傷的影響。SOD、GSH-Px、CAT水平高低可以一定程度上反映機體抗氧化能力[7-8]。MDA和LPO均是脂質過氧化反應的產物，可用于機體脂質過氧化程度的評估，其水平越高，證實機體脂質過氧化程度越嚴重，在缺血再灌注過程中發現MDA和LPO水平升高則證實組織已經受到了損傷[9]。

本研究結果顯示：與假手術組對比，模型對照組SOD、GSH-Px、CAT水平降低，而MDA、LPO水平升高(P<0.05)，證明造模成功。與模型對照組比較，巴戟天寡糖低、中、高劑量組SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低(P<0.05)，提示巴戟天寡糖具有較強的抗氧化能力。3個巴戟天寡糖組SOD、GSH-Px、CAT、MDA、LPO水平兩兩對比，差別均有統計學意義(P<0.05)；且隨著巴戟天寡糖質量分數的增加，SOD、GSH-Px、CAT水平升高，而MDA、LPO水平降低，證實巴戟天寡糖的抗氧化作用隨其質量分數的增加而增強。

綜上所述，巴戟天寡糖對子宮缺血再灌注損傷具有抗氧化作用，可能通過抗氧化作用來減輕子宮組織的損傷，且作用具有一定的劑量依賴性。

4 參考文獻

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