子宮頸癌組織中miR-126異常表達的意義

陸義紅，蔣莉莎，宋恩學(安徽醫科大學第二附屬醫院，合肥230601)

子宮頸癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，研究表明其發生發展與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關[1～3]。microRNA(miRNA)是一類非編碼小RNA分子，通過結合靶基因的3'非編碼區而調節靶基因的表達，從而參與重要的生理病理過程[4，5]。miRNA在細胞增殖、分化、凋亡等過程中起重要作用，腫瘤組織中也存在大量的miRNA異常表達[6，7]。研究表明，miRNA與多種腫瘤進程相關，在不同腫瘤中存在特異性表達，可作為腫瘤發生及預后的重要生物標志物[8]。miR-126在乳腺癌、結腸癌、白血病、胰腺癌等多種腫瘤組織中表達下調，可抑制腫瘤細胞侵襲轉移[9]，但miR-126在子宮頸癌組織中的表達鮮有報道。本研究探討子宮頸癌組織中miR-126表達變化與患者臨床病理特征、療效及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機選取2008年11月～2016年11月本院收治的子宮頸癌患者98例，于入院后行腫瘤標志物及MRI檢查，符合子宮頸癌的診斷標準[10]，均采用廣泛子宮切除(EH)聯合盆腔淋巴結清掃術(LPL)治療，術中留取子宮頸癌組織，均經病理檢查確診。患者年齡29～71(53.17±3.56)歲，國際婦產科聯盟(FIGO)臨床分期為Ⅰa2期23例、Ⅰb1期21例、Ⅰb2期18例、Ⅱa期31例、Ⅱb期5例，鱗狀細胞癌54例、腺癌30例、腺鱗癌14例，高分化25例、中分化66例、低分化41例，病理分級為G1 32例、G2 19例、G3 47例，無淋巴結轉移66例、淋巴結轉移32例。納入標準：患者未行宮頸放化療等抗腫瘤治療，生殖道解剖結構正常，自愿簽署知情同意書。排除標準：存在免疫缺陷相關合并癥、合并其他惡性腫瘤。本研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2 子宮頸癌組織中miR-126表達檢測 采用熒光定量PCR法。將子宮頸癌組織標本勻漿破碎，按照TRIzol試劑(Invitrogen)說明書進行總RNA提取，DEPC水溶解RNA。RNA逆轉錄反應參照HairpinitTM miRNAs qPCR Quantitation Kit試劑盒說明書，反應體系20 μL：包括total RNA 1 μg、oligo(dT)0.5 μL、Random primer 0.5 μL、Random primer 0.5 μL、10 mmol/L dNTP 2 μL、RNase inhibitor 0.5 μL、5×buffer 4 μL、M-MLV 0.5 μL，剩余用H2O(RNase free)補齊；反應條件：16 ℃ 30 min合成RNA/DNA雜合雙鏈，42 ℃ 30 min水解RNA鏈，85 ℃ 5 min合成DNA雙鏈。采用Applied Biosystems 7500儀器進行熒光定量PCR，反應條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性15 s， 60 ℃退火1 min，共40個循環。實驗重復3次。逆轉錄與熒光定量PCR試劑盒均購自美國Applied Biosystems公司。采用2-ΔΔCt法計算miR-126的相對表達量，以U6 mRNA為內參。miR-126的相對表達量高于其平均值為高表達，低于或等于其平均值為低表達。

1.3 隨訪 兩年內患者定期回醫院復查。隨訪內容包括盆腔檢查、陰道檢查脫落細胞學檢查、胸部X線檢查、血常規及宮頸鱗狀細胞癌抗原檢測等。記錄患者復發(出現新的病灶或腫大淋巴結)及生存情況。若2年內未復發為治療有效，若復發為治療無效)。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計數資料用例數與百分數表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 miR-126表達與子宮頸癌患者臨床病理參數的關系 miR-126的表達與子宮頸癌分化程度、臨床分期、病理分級及淋巴結轉移等有關(P均<0.05)，與年齡、分型、腫瘤直徑無關(P均>0.05)。見表1。

表1 miR-126表達與子宮頸癌患者臨床病理參數的關系[例(%)]

2.2 miR-126表達與療效及預后的關系 術后2年，miR-126高表達41例中治療有效34例(82.93%)、無效7例(17.07%)；低表達57例中治療有效39例(68.42%)、無效18例(31.58%)；二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。術后2年，miR-126高表達41例中生存37例(90.24%)、死亡4例(9.76%)；低表達57例中生存46例(80.70%)、死亡11例(19.30%)，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

近年來，子宮頸癌的發病率逐年升高，位于女性惡性腫瘤的第二位。人們生活工作壓力增大、免疫力低、首次性生活年齡<16歲、生活習慣不良等，都會導致宮頸癌的發病率升高[1]。全球每年約有20多萬女性死于子宮頸癌，嚴重威脅女性身心健康[2]。目前，子宮頸癌患者日趨年輕化。子宮頸癌的發展是一個漸變到突變的過程，因此早診斷早治療是關鍵[12]。臨床治療子宮頸癌主要采取手術治療，主要目的在于切除原發病灶及周圍癌變組織，并且遵循避免盲目擴大手術范圍、減少術后并發癥的原則，提高患者的生存質量[13]。隨著近年醫學研究的發展，腹腔鏡技術應用較為廣泛，LRH治療子宮頸癌技術越發成熟，患者更易于接受。因此本研究均采用LRH聯合LPL的治療方案[14]。

有關miRNA與腫瘤的研究越來越深入。miRNA在腫瘤的進程中起重要作用，尤其可對在腫瘤發生和侵襲轉移中直接參與的基因進行表觀調控[13]。部分miRNA在人類腫瘤組織中存在異常表達，被鑒定為癌基因、抑癌基因，為腫瘤特異性診斷和治療提供了新的靶點[14]。miRNA位于基因組中常發生變異的區域，而這些區域的變異會伴隨腫瘤的發生[15，16]。相關研究顯示，miR-126在不同的腫瘤組織中均存在表達異常[17～20]，在胃癌組織中miR-126的表達與淋巴結轉移和組織分化程度有關，此外miR-126可抑制胃癌細胞的侵襲[17]。Crk基因是miR-126的靶基因，miR-126可通過抑制Crk的表達而抑制非小細胞肺癌的侵襲轉移[18]。

本研究結果顯示，miR-126的表達與子宮頸癌分化程度、臨床分期、病理分級及淋巴結轉移等有關，與年齡、分型、腫瘤直徑無關，提示miR-126可能在宮頸癌的進程中發揮重要作用。術后2年，miR-126高表達患者的療效優于低表達患者，復發率、病死率低于低表達者。miR-126低表達的子宮頸癌患者易復發及死亡。可見miR-126在子宮頸癌組織中發揮抑癌基因樣作用。本研究為miR-126成為子宮頸癌臨床治療靶點與預后預測的生物標記物提供了理論基礎。

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